Способ получения коллагенового раствора для диагностики состояния тромбоцитов крови Советский патент 1985 года по МПК A23J1/10 G01N33/48 

сд сд to

1C

g Изобретение относится к технологии получения коллагеновых растворов, применяемых для диагностики состояния тромбоцитов крови, и может быть использовано в мясной промышленности. Целью изобретения является снижение латентного периода коллагенового раствора и повышение его тромбоцитоагрегирующей активности. Пример 1. Коллагенсодержащее сырье, в частности ахилловые сухожилия крупного рогатого скота, освобождают от околосухожильной сумки и промывают проточной водой 30 мин. Промытое сырье в количестве 1 кг измельчают на мясорубке с диаметром решетки 1,6 мм и обрабатывают раствором фермента аспергилпепсина активностью 0,25 ед/мл рН 2,2, жидкостном коэффициенте 1:4 и температуре 20°С в течение 10 сут. Далее проводят инактивацию фермента путем добавления 1 н. раствора едкого натрия, доводя рН раствора до 6,0 и осуществляют выдержку раствора 24 ч. После инактивации механическим путем, в частности на центрифуге, раствор балластных вешеств отделяют от коллагена и последний растворяют в 20 л 0,1 М раствора уксусной кислоты, фильтруют и проводят нейтрализацию 1%-ным раствором аммиака, доводя рН до 4,0. Полученный коллагеновый раствор используют в качестве реагента для оценки агрегационной активности тромбоцитов крови от интактных кроликов. При этом раствор имеет следующие характеристики: продолжительность латентного периода (время от момента внесения образца коллагена до начала агрегации) составляет 5,5 мин, а тромбоцитоагрегирующая активность 47,30/0. Пример 2. Коллагенсодержащее сырье, в частности дерму крупного рогатого скота, очищают, промывают, мездрят и снимают эпидермис. Подготовленное сырье в количестве 1 кг промывают проточной водой и измельчают на мясорубке с диаметром рещетки 2 мм. Далее проводят обработку раствором фермента аспергилпепсина активностью 0,5 ед/мл при рН 2,7, жидкостном коэффициенте 1:3 и температуре 25°С в течение 6 сут. Инактивацию фермента осуществляют 1 н. раствором едкого натрия, доводя рН раствора до 6,5. При этом рН сырье выдерживают 20 ч. После инактивации на центрифуге отделяют раствор балластных веществ от коллагена и последний растворяют в 30 л 0,2 М раствора уксусной кислоты. Полученный коллагеновый раствор фильтруют и нейтрализуют 0,1 н. раствором едкого натрия, доводя рН до 4,9. Коллагеновый раствор имеет следующие характеристики: продолжительность латентного периода 3,9 мин, тромбоцитоагрегирующая активность 41%. Пример 3. Коллагенсодержащее сырье, например щкуру теленка, очищают, промывают, мездрят и снимают эпидермис. Подготовленное сырье в количестве 1 кг промывают проточной водой 1 ч, измельчают на мясорубке с диаметром рещетки 2 мм и обрабатывают раствором фермента аспергилпепсина активностью 0,5 ед/мл рН 3,2, жидкостном коэффициенте 1:3 и темпераiyp 30°С в течение 4 сут. Инактивацию фермента проводят 2н.раствором едкого натрия, доводя рН раствора до 7,0, выдержку при этом рН осуществляют в течение 18ч и после выделения коллагена его растворяют в 30 л 0,1 М уксусной кислоты Полученный коллагеновый раствор фильтруют и нейтрализуют 7/о-ным раствором аммиака, доводя рН до 5,8. Коллагеновый раствор имеет следующие характеристики: продолжительность латентного периода 3,4 мин, тромбоцитоагрегирующая активность 35,6°/оПример 4. Коллагенсодержащее сырье, например дерму крупного рогатого скота, очищают, промывают, мездрят и снимают эпидермис. Подготовленное сырье в количестве 1 кг промывают водой в течение 30 мин, измельчают на мясорубке с диаметром решетки 2,0 мм и обрабатывают раствором фермента аспергилпепсина активностью 0,5 ед/мл при рН 2,0, жидкостном коэффициенте 1:3 и температуре 18°С в течение 3 сут. Инактивацию проводят 1 н раствором едкого натрия, доводя рН раствора до 5,5 и выдерживают сырье при этом рН 24 ч. Выделенный коллаген от раствора балластных веществ растворяют в 20 л 0,1 М уксусной кислоты, фильтруют и нейтрализуют Р/О-НЫМ раствором аммиака, доводя рН до 3,5. Полученный коллагеновый раствор имеет следующие характеристики: продолжительность латентного периода 9,6 мин, тромбоцитоагрегирующая активность 19,3/о. Очень низкие агрегационные свойства реагента связаны с эффектом дезамидирования, вызванного низкими значениями рН обработок. Пример 5. Коллагенсодержащее сырье, например щкуру теленка, обрабатывают как в примере 4. Далее сырье промывают водой 30 мин, измельчают (как в примере 4) и обрабатывают раствором фермента аспергилпепсина активностью 0,25 ед/мл при рН 3,5, жидкостном коэффициенте 1:4 и температуре 32°С в течение 10 сут.

34

Инактивацию фермента проводят 1 и.труют и нейтрализуют 70/о-ным раствором раствором едкого натрия, доводя рН раст-аммиака, доводя рН до 6,0. вора до 7,5 выдержку при этом рН осуществляют в течение 24 ч, а выделенный кол-Коллагеновый раствор находился в лаген .от раствора балластных веществ скоагулированном состоянии и не мог быть растворяют в 20 л 0,1 М уксусной кислоты.использован в качестве диагностического Полученный Коллагеновый раствор филь-реагента.

1155227

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОЛЛАГЕНОВОГО РАСТВОРА ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ СОСТОЯНИЯ ТРОМБОЦИТОВ КРОВИ, включающий промывку исходного сырья, обработку его ферментным препаратом, инактивацию фермента раствором щелочи и обработку органической кислотой с получением коллагенового раствора, отличающийся тем, что, с целью снижения латентного периода коллагенового раствора и повышения его тромбоцитоагрегирующей активности, в качестве ферментного препарата используют раствор аспергилпепсина с активностью 0,25-0,5 ед/мл, после инактивации фермента осуществляют выделение балластных веществ механическим путем, а полученный коллагеновый раствор нейтрализуют щелочью до рН 4,0-5,8.