Штамм бактерий @ @ ,используемый при мочке льна Советский патент 1985 года по МПК C12N15/00 

ел

ел

О)

111556

Изобретение относится к микробиологической промьшленности, а именно к получению активных споровых, материалов для мочки льна и представляет собой новый штамм бактерий, исполь- 5 зуемый при мочке льна.

Известна культура Clostridium gurfelli, примечяемая при мочке льна f, .

Однако она не способна при обычной Ю тепловой мочке в кислой среде разлагать пектиновые вещества, поскольку не синтезируют фермент полигалактуро назу.

Наиболее близким к предлагаемому IS является штамм Clostridium felsineum 13 (ВНИИСХ), применяемый при мочке и способный разрушать пектиновые веществ E2I1.

Недостатками данного штамма явля- 20 ются низкая активность продуцируемых им пектолитических ферментов, неспособность к мочке льна в регенерированной мочильной жидкости, а также неустойчивость при хранении, приво- 25 дящая к образованию различных морфологических форм и малое спорообразование при промьшленном выращивании.

Цель изобретения - повышение активности спорового препарата для зо мочки льна.

Поставленная цель достигается штаммом бактерий Cloetridiwn felsineum 84 (Всесоюзная коллекция микроорганизмов АН СССР, коллекционный номер ВКМ В 1527Д), используемым при

мочке льна.

Штамм бактерий Clostridiiaa felsinevm 84 выделен с льносоломы.

Полученный штамм идентифицирован 40 по определителям Верже (1974) и Prevot (1966) и имеет следующие морфолого-культуральные и физиологическую характеристики.

Морфолого-культуральные признаки. 45 Величина клеток |2--часовой культуры 3-6xt,2 мкм. Клетки имеют вид палочек, которые через 16-30 ч превращаются в клостридии, имеющие форму сигарj и через 48-80 ч споруются. В молодом возр)асте палочки очень подвижны, перитрихи,- окрашиваются по Граму. В клостридиальной стадии также подвижны, в клетках просматривается проспора и накапливается гранулеза. .55

На агаризованной среде растет только в анаэробных условиях, обра: уя колонии оранжевого цвета, выпукдше.

8 .2

с ровными краями, с вросшей в агар более темной точечной серединой, диаметр колонии 2-6 мм.

На жидкой питательной среде при оптимальных температуре и рН проходит полный цикл развития и активно сбраживает крахмал и пектиновые вещества с образованием газа (в % по общему) водорода 54-60, углекислого газа 40-46.

Физиолого-биохимические признаки. Молоко с лакмусом, свертьгеает, подкисляет, образует газ, желатину актив но разжижает, целлюлозу разлагает в анаэробных условиях в присутствии стартовых доз углеводов. Анаэроб. Оптимум температуры для развития 35-37 С

Оптимальные значения ,4-7,2.

Отношение к источникам Углерода. Растет на средах с различными углеводами, подкисляя среду и образуя газ. Активно используют ксилозу, глюкозу, лактозу, сахарозу, галактозу, фруктозу, арабинозу, мальтозу, декстрин, крахмал, пектин; не использует рафинозу, спирты не усваивает.

Отношение к источникам азота. Слабо использует соли аммония и хорошо развивается на средах с органическими формами азота, такими как казеин, пептон, кукурузный экстракт, аминокислотами (цистеином, цистином, аспарагиновой и глутаминовой, гистидином тирозином, аргинином).

Признаки штамма устойчивы, штамм не патогенен для человека и животных

Штамм Clodtridium felsineum 84 хранится в музее Всесоюзной коллекции микроорганизмов института биохимии и физиологии микроорганизмов,ДН СССР и имеет коллекц онный номер ВКМ В 1527Д.,

Сущность изобретения заключается в том, что штамм Clostridium felsineum 84 способен при выращивании образовывать споры, обладающие активным комплексом пектолитических ферментов, играющих существенную роль в процессе мочки льна.

Бактериальный споровый препарат получают путем выращивания штамма Clostridiura felsineum 84 на питательной среде следующего состава, г/л; картофельный или кукурузный крахмал 15-22; кукурузная мука 5-7; кукурузный экстракт 4-5; мел 4-6; аммоний сернокислый 1; 50%-ный раствор хлорного железа 3 мл; рН среды 5,8-7,4.

После вьфащивания в 1 мл культуральной жидкости содержится 200 - 280 млн спор.

В табл. t представлена сравнительная характеристика спор предлагаемого штамма и известного, из которой видно, что новый штамм образует споры, обладающие хорошей выживаемостью в течение.одного года, а также высбкой активностью пектолитических ферментов, значительно превосходящей известный: по пектинметилэкстеразе в 1,9 раза, полигалактуроназе в 1,3-1,8 раза, пектин-трансэлиминазе 1,7-1,9 раза, полигалактуронат-трансэлиминаэе в 2-3 раза; и при этом образует в 3,5 раза больше спор, что соответственно увеличивает выход целевого продукта.

Таблица 1

Штамм бактерий Clostridium felsineum 84 (Всесоюзная коллекция микроорганизмов института биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР, коллекционный номер ВКМ В 1527Д), используемый при мочке льна. г (/) с

Эффективность действия препарата пектолитин, полученного из культуры

,

2, В регенерированной ночипьиой жидкости рН 6,8-7,0

Clostridium felsineum 84, на цроцесс мочки льна отраженав табл. 2.

IТаблица2

52 Т 1,3

Внесены споры С1. felsineum 13 Внесены споры С1, felsineum 84

Примечание. 1 млрД. спор/г - титр препарата.

Предлагаемый щтамм отличаетсй от штамма-прототипа тем, что, образуя более активный комплекс пектолитических ферментов, он сокращает процесс мочки льна по сравнению со штаммом-прототипом при обычной тепловой мочке на 9 ч (на 27 ч по сравнению с контролем) и при мочке в регенерированной мочильной жидкости на 10 ч, в то время как штаммпрототип в последнем случае вообще неэффективен. Таким образом, предПродолжение табл.2

50 5 1,2

4 20

А2 Я,3

лагаемый штамм Clostridium felsineimi 84 позволяет получать препарат для мочки льна хорошего качества за счет Сбалансированного синтеза пектолитических ферментов.

. Ожидаемый экономический эффект от применения препарата, изготовленного на предлагаемом штамме Clostridium felsineum 84 может составить 5-10 руб. на 1 т льносоломы или 10-20 руб. на 1 кг препарата.