Люминесцентный способ определения содержания аминофлуоресцеина в флуоресцеинизоцианате Советский патент 1958 года по МПК G01N21/64 C09B11/10 

Флуоресценнизоцианат является важным микробиологическим красителем. О его качестве при синтезе судят по содержанию в нем аминофлуоресцеина. При гидролизе флуоресцеинизоцианат переходит с аминофлуоресцеин, поэтому для получения воспроизводимых результатов при его применении необходимо знать степень его гидролиза.

Описываемый люминесцетный способ позволяет определить содержание аминофлуоресцеина во флуоресцеипизоцианате и степень гидролиза последнего.

Способ осуществляют следующим образом.

Приготавливают растворы флуоресцеинизоцианата, аминофлуоресцеина и флуоресцеина с концентрациями 1,0 мг/л и два буфетных раствора со значением ,5 и 12,0. В пять колбочек наливают по 10 мл первого буферного раствора и в пять других по 10 мл второго буферного раствора.

В колбочки с кислыми растворами добавляют 0,20, 0,15, 0,10 и 0.05 мл раствора аминофлуоресцеина, в колбочки со щелочными растворами добавляют такие же количества флуоресцеинизоцианата.

С помощью монохроматора, при длине волны 520 |J., измеряют относительные интенсивности флуоресценции всех растворов (принимая отсчет слепого опыта за нуль). Область максимальной интенсивности флуоресцеинизоцианата находится в пределах 9,0-12,0 рН, а максимальная интенсивность развивается при ,4-1,5.

При концентрациях этих веществ в соответствующих растворителях, не превыщающих пороговых, при которых начинается концентрационное тущение, интенсивность флуоресценции пропорциональна их конценрациям. Из полученных экспериментальных данных находят константы, входящие в формулы определения выхода и процентного содержания аминофлуоресцеина в флуоресцеинизоцианате.

Для определения выхода фл юресценции флуоресцеинизоцианата в две колбочки наливают по 10 лл щелочного буферного раствора, в одну

из них добавляют 0,1 мл раствора флуоресцеинизоцианата,в другую- такое же количество раствора флуоресцеина. Измеряют относительные интенсивности флуоресценции и по известной формуле вычисляют величину выхода флуоресценции на флуоресцеинизоцианата.

Для определения процентного содержания аминофлуоресцеина в флуоресцеинизоцианате готовят растворы анализируемого изоцианата в ацетоне с концентрациями 1,0 мг1л и 0,1 мг1л. В две колбочки наливают по 10 мл буферного раствора с рН 1,5 и в две другие по 10 мл буферного раствора с ,0. В одну из колбочек с кислым раствором добавляют 0,1 мл испытуемого раствора флуоресцеинизоцианата с концентрацией 1,0 мг1л и такое же количество испытуемого раствора флуоресцеинизоцианата с концентрацией

0,1 мг1л добавляют в буферный раствор с ,0.

В колбочку со щелочным раствором добавляют 0,1 мл раствора флуоресцеина с концентрацией 0,1 мг1л.

Принимая отсчет слепого опыта за нуль, измеряют относительные флуоресценции приготовленных растворов и из полученных данных по известным формулам находят процентное содержание аминофлуоресцеина в флуоресцеинизоцианате.

Предмет изобретения

Люминесцетный способ определения содержания аминофлуоресцеина в флуоресцеинизоциаиате, отличающийся тем, что, с целью определения степени гидролиза флуоресцеинизоцианата, содержание аминофлуоресцеина устанавливают ПС интенсивности флуоресценции испытуемого образца в щелочной и кислой средах.