Способ определения @ -рецепторов нейтрофилов человека Советский патент 1985 года по МПК

сд

00

со р Изобретение относится .к медицине и может быть использовано при определении функционального состояния нейтрофилов при патологических состояниях организма, s Целью изобретения является упрощение и ускорение определения Fcрецепторов нейтрофилов. Способ осуществляется следующим образом. Проводится оценка Fc-рецепторов нейтрофилов у исследуемого донора. В стерильных условиях из вены получают 2,5 мл крови. Нейтрофилы выделяют путем центрифугирования в градиенте плотности (1,114 г/см) J yколл-верографин. После двухкратного от№)1вания раствором Хенкса (общий объем 2Q мл) клетки ресуспендируют в растворе Хенкса, содержащем 27, ал бумина. Конечная концентрация нейтрофилов - 20 млн клеток/мл. Все ман пуляции проводят в силиконированной стеклянной посуде. Вакцину стафилококка (Staphylococcus aureus № 141) 5 млрд клеток/мл, в объеме 0,2 мл смешивают с 0,2 мл фракции IgG-имму ноглобулинов человека (10 мг/мл), инкубируют 30 мин при 37 , трижды отмывают физиологическим раствором (общий объем 15 мл) при 500 g и взвешивают в растворе-Хенкса, конечная концентрация - 5 млрд клеток/м В силиконированных пробирках 22 смешивают по 0,1 мл нейтрофилов и IgG-обработанных стафилококков. В контроле используют стафилококковую вакцину, необработанную IgG. После инкубации 30 мин при ЗУв пробирки добавляют 10 мл раствора Хенкса, центрифугируют при 200 g и из клеточного осадка готовят мазки, которые фиксируют метанолом и окрашивают по Романовскому. Просматривают 100 нейтрофилов, из них отмечают число клеток, содержащих более 5 стафилококков. Результат: в .опыте - 35%, в контроле - 3%. Отсюда число Fcпозитивных нейтрофилов составляет 32% (35-3-32). Полученные результаты согласуются с известными данными где число Fc-позитивных нейтрофилов у здоровых людей составляет 19-80%. Согласно предлагаемому способу проведено изучение Fr.-рецепторов нейтрофилов у 21 здорового донора в возрасте 20-40 лет.. Средний показатель составил 35,313,6%. Число Fc-позитивных нейтрофилов у здоровых людей составляет 19-80%. Самый низкий показатель (19%) отмечен в опытах с IgG человека (по прототипу), в остальных случаях- использовали IgG-антитела кролика. При реализации предлагаемого способа длительность анализа сокращается в два раза.

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ FC-PEЦЕПТОРОВ НЕЙТРОФИЛОВ ЧЕЛОВЕКА включающий смешивание суспензии нёйтрофилов с частицами носителя, покрытого антителами, с последующим уче том кле ток, ев я завших частицы, отличающийся тем, что, с целью .упрощения и ускорения определения, в качестве частиц носителя антител используют взвесь стафилококков штамма Staphylococcus aureus № 141 (депонирован в ГНИИСКМБП им. Л.А.Тарасевича под № 120), а в.качестве антител для обработки используют антитела класса IgG к стафилококку.