Штамм @ @ 2-82-продуцент пектат-лиазы Советский патент 1985 года по МПК C12N9/88 C12N15/00 C12R1/18 

ел СЛ изобретение относится к микроб логической промьшшенности, а именно к штаммам - продуцентам пектоли тических ферментов на отходе свек лосахарного производства - свекловичном жоме и на отходе картофелекрахмального производства - картофельной мезге, и может быть исполь эовано в промьгашенности первичной обработки льносоломы и в сельском хозяйстве. Известен штамм CI. felsineum 22 продуцент пектат-лиазы 1 , Недостатком штамма является низкая активность пектат-лиазы (360 ед/мл), продолжительное время ферментации (48 ч), высокая темпер тура культивирования (40-С), что приводит к дополнительным энергозатратам. Наиболее близким к предлагаемому является штамм Erwinia carotovo ra МЛ-1. Активность пектат-лиазы в культуральной жидкости штамма-прототип составляет 450 ед/мл 2. Недостатком известного штамма является низкая пектат-лиазная активность. Цель изобретения - повышение пектат-лиазной активности. Указанная цель достигается тем, что в качестве продуцента пектатлиазы используют новый штамм Erwinia carotovora 2-82, вьщеленный из мочильной жидкости льнозавода. Предлагаемьй штамм хранится при 4°С на картофельном агаре. Штамм депонирован в музее культур промышленных микооорганизмов института ВНИИгенетика, коллекционный номер ЦМПМ В-2892. Морфологические признаки. Клетк одиночные, прямые палочки О,6-0,8 1,0-3,0 мкм. Подвижные, движутся при помощи перитрихиальных жгутиков . Грамотрицательные. Колонии бесцветные с темноокрашённым центром, ровным краем, 4-7 мм в диаметре. Физиолого-биохимические признаки. Растет в присутствии кислорода оптимальная температура роста ZS-SO C, удельная скорость роста 0,36 Ч-1 рН 7,2-7,4. В процессе роста сбраживает ара бниозу, маннит, салицин, ксилозу, рафинозу, лактозу, эскулин, манно 12 зу, рамнозу, рибозу с образованием ислоты. Утилизирует нитраты, лактат, цитрат, пептон. Энергично разжижает елатину, выделяет из цистеина, асщепляет пектат, гидролизует казен. Ацетоин и индол не образует, не растет в присутствии 5% NaCI, при тилизации глюкозы газ не выделяет. Максимальная температура роста 40-42 0. Содержание ГЦ 52,2 мол.%. Признаки штамма устойчивы. Штамм не патогенен. Пример 1. Продуцент пектатлиазы Erwinia carotovora 2-82 культивируют на жидкой питательной среде следующего состава, мас.%: К4НРО -2Н О 0,7; 0,2; (т SO о, г, рИ 7,0-7,2. В качестве источника углерода используют 2,5% сухого свекловичного жома. Водопроводная вода остальное . После стерилизации питательную среду охлаждают до 25-28 С и засевают посевным материалом в количестве 1%, полученным на указанной среде при культивировании продуцента в 0,3 л колбах Эрленмейера с 50 мл среды на качалке (220250 об/мин) в течение 16-17 ч при 28-30°С. Культивируют продуцент в 0,5 л колбах Эрленмейера со 150 мл среды. Условия культивирования такие же как и при получении посевного материала. После окончания процесса культивирования культуральную жидкость центрифугируют 30 мин при 56 тыс. об/мин для отделения клеток и в культуральной жидкости спектрофотометрически определяют пектатлиазную активность, За единицу активности пектатлиазы принимают количество фермента, вызьтающее изменение абсорбции реакционной смеси на 0,1 за 10 мин при 30°С. Активность пектат-лиазы в культуральной жидкости составляет 630700 ед/мл. Пример 2. Культивируют продуцент на среде, содержащей в качестве источника углерода 2,75% iсухого свекловичного жома. Остальное так же как в примере 1-,

Активность пектат-лиазы в культуральной жидкостиСоставляет 850900 ед/мп..

Пример 3. Культивируют про дуцент на среде, содержащей в качестве источника углерода 2,75% сухой картофельной мезги. Остальное так же как в примере 1.

Активность пектат-лиазы составляет 870-900 ед/мл.

Пример 4. Культивируют про дуцент на среде, содержащей в качестве источника углерода 3,0%.сухой картофельной мезги.Остальное так же как в примере 1.

1615514

Активность пектат-лиазы гостачляет 800-820 ед/мл.

Предлагаемый щтамм Erwinia carotovora 2-82 обладает по срав, нению с прототипом более высокой

пектат-лиазной активностью в (1,82,0 раза).

Таким образом, использование предлагаемого штамма Erwinia carotovora 2-82 при тех же условиях культивирования н на той же питательной среде позволяет получить более высокую пектат-лиазную активность ,15. аналогичной с прототипом пита|. тельной среде.

Штамм Erwinia carotovora 2-82 ЦМПМ В-2892 (коллекция Центрального Музея промышленных микроорганизмов института ВНИИ генетика) - продуцент пектат-лиазы.