Способ получения пектолитического ферментного препарата Советский патент 1978 года по МПК C12D13/10 

Иэобрегение огноситч:я к фермегной отрасли микробиологической промышленности и может быть использовано в производстве пектолитических ферментных препаратов, применяемых в промышленности первичной обработки лубяных волокон для получения технического волокна из льносоломы.

Известен способ получения пектолитического ферментного препарата, предусматривающий культивирование в анаэробных условиях C&ostjidium pectinofer-mentons на питательной среде,содержащей источник углерода - глюкозу, источник пектиновых веществ - свекловичный жом и минеральные соли, с последующей фильтрацией культуральной жидкости и выделением из нее фермента. Полученный таким способом препарат не обладает высокой активностью ij.

Известен также способ получения пектолигического ферментного препарата путем культивирования CE,oatrid ufn feEsineum на питательной среде,содержащей источник углерода, источник пектиновых веществ, минеральные соли , К НРОдИ СаСО , воду. Однако выход ферментного препарата, полученного таким способом, недостаточно высок 2j.

Целью изобретения является повышение выхода и активности пектопитического ферментного препарата.

Поставленная цель достигается тем, что в качестве продуцента ферментов используют штамм C6osir4 3ium feCsinfium -22, в качестве источника углерода используют декстрин,, а в качестве источника пектиновых веществ используют свекловичный жом, при этом указанные компоненты берут в количествах соответственно 2- 10 г и 10 - 30 г на 1 л питательной среды.

Штамм CEostridium еез1пеит-22 имеет следующую характеристику.

Морфологиче-ские признаки. На жидкой среде с льняными стеблями клетки в виде палочек, крупные, прямые, подвижные, одиночные. Размеры 6,,6 мк. Споры овальные, крупные, размеры l.yo.S мк. Кулыуральные признаки - галакгозный агар. Колонии овальные, гладкие, блестящие, оранжевого цвета О,2-ОЭмм в диаметре. На жидкой дрожжевой воде с льняным снопиками через 12 часю роста культура накапливает грануаюзу. Черев 48 часов полностью сбраживает псясровные ткани льностебдей, среда мутнеет, на дн образуется рыллый осадок из псжровных псаней и биомассы. Физиологические признаки. Максимум роста при 37-4О С. Ассимилирует глюкозу, галактозу, сахарозу, мальтозу, дек стрин, инудин, крахмал, пектин маннит. Не усваивает глицерин, целлюлозы в лактат кальция. Нуждается в биофакторах - дрожжевом экстракте, соевой или кукурузной муке. Не рвютет на мясо-пеп тонном бульоне, в присутствии (МЧ HPQ N Н PQ, , (МНд),SQ4, К N Оз не развивается. Требует для своего роста источника фосфора - K,j НРО, КН РО (ЛуМРО, Предлагаемый способ осуществляется следующим образа. Пример. Готовят питательную среду следующего состава: 20 г свеклоГвичного жома, 5 г декстрина, 5 5 г КН РО мела и доливают до литра водой. Среду стерилизуют в авто клаве при 0,5 атм 0,5 часа. В охлажденную до 49 С среду добавляют суспензию спс штамма ffiCs-inuurn-22 в количестве 1 мл. Выращивание ведут в анаэробных без до отудга воздуха в течение 48 часов при

Способ

Выход препарата, г/л

Активность препарата, ед/г 37 С. Для отделения культуральной хядкосги от механических примесей и биомассы куль туральную жидкость центрифугируют, концентрируют на вакуумно-выпарной установке, доводя обьем до 8О100 мл. Концентрирование ведут при 30-40°С в присутствии стабилизатора MgfC6 в количестве 100 мг/л. Препараты выделяют путем осаждения концентрата этиловым спиртом в отношении 1:4 в присутствии СаССд. Препарат высушивают до порошкоо азного состояния при комнатной температуре на воздухе. Выхсзд препарата - 15 г. Активность препарата по пектат-транс-элиминазе 28000 ед/г. П р и м е р 2. Готовят питательную среду следующего состава: 10 г свекловичного жома, 2 г декстрина, 1 г K-HP(X, 1 г КИдРОф , 2 г мела. Остальное по примеру 1, Выход 3 г/л, активность препарата 7ООО ед/г. П р и м е р 3. Готовят питательную среду следующего состава: ЗО г свекловичного жома, 1О г декстрина, 10 г , 15 г . 5 г мела, доливают до литра водой. Остальное по примеру 1. Выход 8 г/л, активность 15000 ед/г. Предлагаемый способ получения пектолитического ферментного препарата позволяет получить препарат с большим выходом и выссжой активностью (табл.1) Кроме того, испытание полученного ферментного препарата при мацерации стеблей льна показало его более высокую мацерирующую способность, по сравнению с известным препаратом (табл.2). Таблица

Известный

Предлагаемый

10

24000

15

28000

Т а б л и Ц а 2

Формула изобретени

Способ получения пектопигического ферментного препарата путем культивирования продуцирующих его микроорганизмов рода CEos-tridium feEsineOm на питательной среде, содержащей источник углерода, источник пектиновых веществ и минеральные соли КН,РО, Кд НРО и СаСОд , воду, отличающийся тем, что, с целью повыщения выхода и активности препарата, в качестве продуцента используют щтамм Сбое leHdineum - 22, в качестве источника углерода используют декстрин, а в качестве источника пектиновых веществ используют свекловичный К.ОМ, при этом используемые компоненты берут в количествах соответственно 210 г и 10-30 г на 1 л питательной среды.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

А. И. Баха АН СССР, 1973.