Питательная среда для глубинного культивирования продуцентов пектолитических ферментов Советский патент 1983 года по МПК C12N1/20 C12N9/14 

. Изобретение относится к фермент ной отрасли микробиологической промышленности и может быть использова но для производства мацерирующих ферментов при глубинном культивировании микроорганизмов. Известна питательная среда для глубинного культивирования продуцен пектоли-тических ферментов subtifis, содержащая, вес.%: Пшеничные отруби 2,0 Глюкоза (NH4)2,HP04 Дрожжевой экстракт MgSO4 -7H2O Активность пектат-транс-элюминаз на этой среде составляет 50 ед/мл. За единицу активности принято такое количество фермента, которое вызывает снижение оптической плотности при длине волны 235 нм на 0,01 за 1 мин при 25°С ClJ. Недостатком среды является TOj,, что она содержит дорогостоящие и де фицитные вещества: глюкозу, дрозкжев экстракт и не может быть рекомендована для получения технических ферментных препаратов. Известна также среда для глубинного культивирования ceostridium pectinofermentans 15,- прсдуцента пектолитических ферментов, состояща из свекловичного жома, минеральных солей, источников фактора роста и воды При следующем соотношении компонентов, Бес,%: Свекловичный жом Кукурузный экстракт СаСО, (1Ш4Т-2НРО4 0,1 Активность пектат-транс-элюминаз на этой.среде составляет 0,6 ед/мл. За единицу активности фермента принято такое количество фермента, которое вызывает увеличение оптической плотности на 0,555 за 1 ч в условиях реакции С2 . В ферментативном комплексе мацерирующего препарата, п элученного из глубинной культуры продуцента С8. pectinofermentans 15, который выращивают на среде-прототипе, отсутствуют гидролитические и лиазные ферменты зндо-действия, а активность пектат-транс-элюминазы недостаточно высока. Это значительно снижает маЦерирующее действие препарата на растительные субстраты. Цель изобретения - повышение синтеза пектат-транс-элюминазы (ПТЭ) и эндо- полигалактуроназы (эндо-ПГ). Поставленная цель достигается тем, что питательная среда для глубинного культивирования продуцентов пектолитических ферментов, состоящая из свекловичного жома, минеральных солей и источника факторов роста, водопроводной воды, содержит в качестве йсточ-ников факторов роста щелочной гидролизат кормовых дрожжей, а в- качестве минеральных солей -. хлористый , двузамещенный фосфат калия и хлористый кальций при следующем соотношении компонентов, вес.% . Свекловичный жом 1-3 Хлористый аммоний 0,1-0,5 Двузамещенный фосфат калия0,75-1,25 Хлористый кальций 0,01-0,05 Щелочной гидролизат кормовых дрожжей0,5-1,5 Водопроводная веда Остальное В таблице представлена сравнительная характеристика ферментативной активности штаммов - продуцентов пектолитических ферментов.

sp. 8

Прототип Опыт

sp. P-12

Прототип Опыт

.0,6 3,2 0,5 5,6 Штаммы - продуценты пектолитических ферментов выращивали в 3-литровых колбах без аэрации культуральной жидкости. Питательные среды стерилизовали при 1 атм в течение 0,5 ч корректировали значение рН до 8,0J8,4 и заражали посевным материалом в количестве 5%. Выращивание проводили в течение 30 ч при З7с. По окончании процесса в культуральной жидкос|Ти определяли активность ПТЭ прямым спектрофотометрированием при длине волны 230-235 им (за единицу активности принято такое количество фермента, которое в условиях реакции вызывает увеличение оптической плотности на 0,1 за 1 ч) и активность эндо-ПГ вискозиметрическим методом. При использовании щелочного гидролиза кормовых дрожжей рН питательной среды сдвигается в щелочную зону и достигает значений 7,8-8,3. Оптимсшьные значения рН питательной среды для глубинного культивирования Вас. circuBans 31 с целью биосинтеза мацерирующих ферментов находятся в интервале 8,0-8,4. Следовательно, использование щелочного гидролизата кормовых дрожжей позволяет исключить операцию корректировки питательной среды перед.ее засевом, что упрощает технологическую схему полхгчения культуральной жидкости продуцента. Таким образом, изобретение позволяет повысить Финтез пектат-трансэлюминазы и эндо-полигалгжтуроназы.