Питательная среда для культивирования бифидобактерий штамма @ @ N 1 Советский патент 1985 года по МПК C12N1/20 C12R1/01 

Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано для производства препарата - бифкдумбактерина.

Цель изобретения - повьшение выживаёмости би|)идобактерий.

Сущность изобретения заключается в следукяцем.

Питательная среда включает сернокислое железо, хлористый натрий, лактозу, соевый экстракт и агарагар и содержит в качестве источника азотистых соединений гидролизат сьтороточного альбумина при следующем содержании компонентов на 1 ft среды, вес.%:

Железо сернокислое 0,0002-0,001

Натрий хлористый 0,4-0,6

10%-ный соевый

экстракт3,0-7,0

Лактоза0,8-1,2

Агар-агар0,075-0,1

Альбуминовый гидролизат

с содержанием аминного

азота 160-200 мг% Остальное

Известно, что сывороточный альбумин содержит значительное количество цистеина, что позволяет отказаться от введения данного компонента в состав альбуминовой среды и использовать в качестве активатора ферментативной активности бифидобактерий более дешевый компонент - сернокисло железо. Соевый экстракт, получаемый из кормового соевого шрота, содержит витамины группы В и используется в качестве витаминной добавки.

Приготовление альбуминового гидролиз ата.

На 1 л альбуминовой фракции белков лошадиной сыворотки, получаемой после высаливания глобулинов, добавляют 220 г сернокислого аммония и тщательно перемешивают до полного рарастворения соли. Полученный раствор фильтруют через фильтровальные кассеты в меппсах из технического волокн Осадок альбуминов в мешках помещают под механический пресс для более полного удаления из него смачивающей жидкости. Степень отпрессовки альбуминов является достаточной, когда осадок белка приобретает желтовато-оранжевый цвет и становится ломким. Отпрессованный альбумин . счищают с мешков и хранят при 4 С не более 30 дней. Сухой альбумин закладывают в вискозные гильзы по ВО 100 г в каждую, помещают в диализационные ванны с проточной водопроводной водой (температура воды +5-10 С) Диализ длится 20-24 ч до достижения 0,3%-ной концентрации сульфата аммония в растворе.

Содержание белка в диализате составляет 13-16%. Диализат разводят дистиллированной водой до З содержания альбумина.,Добавляют панкреати 10 г на 1 л, хлороформ 20-30 мл на 1 л.

Гидролиз ведут в течение 40-48 ч при с периодическим перемешиванием до прекращения нарастания аминного азота. В процессе гидролиза рН поддерживают на уровне 8,0-8,5, добавляя 20%-ный раствор NaOH. При прекращении нарастания аминного азота (420-600 мг%) гидролизат декантируют, устанавливают с помощью трихлоруксусной; кислоты рН 4,7, кипятят 10 мин, фильтруют через , миткаль. В готовом гидролизате устанавливают рН 7,0 с помощью 20%-ного раствора NaOH и стерилизуют при 30 мин.

Пример 1, Альбуминовый гидролизат разводят до содержания аминного азота 160 мг% дистиллированной водой. С помощью 20%-ного раствора NaOH устанавливают рН 7,6.К 800 мл гидролизата дьбавляют 0,002 г сернокислого железа, 4 г хлористого натрия, 0,75 г агар-агара.

Кипятят 10 мин и добавляют 8 г и 30 г 10%-ного соевого экстракта. Объем среды до водят до 1.л добавлением альбуминового -гидролизата с таким же содержанием аминного азота (160 мг%). Среду стерилизуют при 110°С в течение 30 мин.

( . . .

Приме р 2. Альбуминовый гидролизат разводят до содержания аминного азота 180 мг% дистиллированной водой. Устанавливают рН 7,8 с помощью 20%-ного раствора NaOH К 800 мл .гидролизата добавляют 0,005 г сернокислого железа, 5 г хло ристого натрия 0,8 г агар-агара.

Кипятят 15 мин и добавляют 10 г лактозы и 50 г 10%-ного соевого экстракта. Объем среды доводят до 1 л добавлением альбуминового гидролиэата с содержанием аминного азота 280 мг%. Среду стерилизуют при в течение 30 мин.

31

Пример 3. Альбуминовый гидролизат разводят до содержания аминного азота 200 мг% дистиллированной водой С помощью 20%-нрго раствора NaOH устанавливают. рН 7,8. К 800 мл гвдролизата добавляют 0,01 г сернокислого железа, 6 г хлористого натрия, 1,0 г агар-агара.

Кипятят 10 мин и добавляют 12 г лактозы и 70 г 10%-ного соевого

1671984

экстракта. Объем среды доводят до 1 л добавлением альбуминового гидролизата (аминный азат 200 мг%)I Среду стерилизуют при в течение 30 мин.

Количество выросших колоний бифидобактерий до и после лиофильной сушки в зависимости от применяемой 10 среды представлено в таблице.

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ БИФИДОБАКТЕРИЙ ШТАММА BACTERIUM BIFIDUM № 1, содержащая источник азотистых соединений, соевый экстракт, сернокислое железо, хлористый натрий, лактозуS агар-агар, отлича.нгщаяся тем, что, с целью повышения выживаемости бифидобактерий в качестве источника азотистых соединений используют ферментативный гидролизат лошадиного сывороточного альбумина с содержанием амннного азота 160-700 мг) при следующем содержании компонентов, мас.%: Сернокислое железо 0,0002-0,001 0,4-0,6 Хлористый натрий . соевый 3,0-7,0 экстракт 0,8-t,2 Лактоза W 0,075тО,1 Агар-агар с Ферментативный гидролизат лошадиного сьюороточного Остальное альбумина О) со 00

Альбуминовая . 18+2 5±1 Блаурокка (контроль) 15+1 5+1 1+1 18+2 5+1 1+1 1+1 14+2 5+1 1+1