Способ определения состояния противокоревого иммунитета Советский патент 1985 года по МПК A61K39/00 

01

00

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может быть использовано для определения состояния противокоревого иммунитета у людей, больных и переболевших корью, у привитых коревыми вакцинами, а также у экспериментальных животных.

Целью изобретения является повышение точности определения, упрош,ение и сокраш,ение времени исследования.

Способ осушествляется следуюш,им образом.

В реакции используют не живой вирус кори, а коревой гемолизируюш,ий антиген, полученный из суспензии живых вирусных частиц путем обработки ее твином-эфиром по методу Norrby, а контакт антигена исследуемой сыворотки и эритроцитов обезьян проводят в течение 1,5-2 ч при 45+1 °С.

При обработке твином-эфиром гемолитическая активность увеличивается в 10-20 раз по сравнению с исходной, в результате чего получают коревой антиген, обладающий способностью вызывать полный лизис эритроцитов обезьян, что является основой разработки нового способа определения состояния противокоревого иммунитета - реакции задержки прямого гемолиза (РЗПГ).

Определение титра противокоревых антигемолизинов в испытуемой сыворотке проводят в РЗПГ с 2 гемолитическими единицами коревого антигена, с 5%-ной взвесью эритроцитов обезьян, при инкубации смеси при 45±1°С. Учет реакции осушествляется сразу же после наступления полного гемолиза в контроле антигена, представляющего смесь двух гемолитических единиц антигена и 5% взвеси эритроцитов обезьян. За титр антигемолизинов в испытуемой сыворотке принимают ее наивысшее разведение, вызывающее видимую задержку гемолиза по сравнению с полным лизисом в контроле антигена.

По сравнению с прототипом в реакции задержки гемолиза (РЗГ) разработанный способ определения состояния противокоревого иммунитета - РЗПГ, более прост в исполнении. Твином-эфиром обрабатывается исходная культуральная вируссодержащая жидкость, а не концентрированный вирус и, следовательно, исключается необходимость использования ультра центрифуг. Учет результатов проводится визуально без применения спектрофотометров, что не только упрощает метод, но и существенно снижает время проведения исследований. Время, затрачиваемое на постановку и учет реакции, сокращается также за счет повыщения температуры инкубации смеси антигена, исследуемой сыворотки и эритроцитов обезьян до 45±1°С, что позволяет уменьшить время контакта до 1,5-2 ч.

Полученный гемолизирующий антиген стабилен и высокоактивен, что повышает

точность определения специфических антигемолизинов в сыворотках не менее чем на 10%. Так, при обследовании 198 детей в возрасте 6-10 лет, привитых живой коревой вакциной Л-16 (ЖКВ Л-16) 3-8 лет назад, специфические антигемолизины выявлены в РГЗ (1) у 96 детей (48,4%), в РЗПГ у 127 детей (64,1%). При обследовании 52 детей в возрасте от 1 до 3,5 лет, не болевших корью и не привитых против этой инфекции, противокоревые антигемолизины не были выявлены ни с помощью известного, ни с помощью разработанного способов. На 20-27 день после введения этим детям ЖКВ Л-16 про5 тивокоревые антигемолизины выявлены в РЗГ в сыворотках 37 детей (71,1%), в РЗПГ У 43 детей (82,7%).

Пример 1. Больная М., 19 лет, поступила в 1 КИБ г. Москвы с подозрением на корь (№ истории болезни 5907). С целью

0 подтверждения клинического диагноза больная обследована на 3 и 10 день с момента появления сыпи. С помощью РЗПГ в первой сыворотке противокоревые антигемолизины выявлены в титре 1:16, во второй - 1:512. Более чем 4-кратное нарастание титра противокоревых антител подтвердило правильность клинического диагноза.

Пример 2. При обследовании В. Е. 1975 года рождения до и после введения

0 ЖКВ Л-16 с помощью РЗПГ установлено, что до вакцинации ребенок не имел в крови противокоревых антигемолизинов, на 27 день после введения вакцины специфические антитела выявлены в титре 1:160. Результаты обследования свидетельствуют о формировании у данного ребенка поствакцинальной невосприимчивости к вирусу кори.

Следовательно, предлагаемый способ позволяет оценить состояние противокоревого иммунитета при заболевании и вак0 цинопрофилактике.

К настоящему времени с помощью данного способа обследовано 171 человек в возрасте от 1 г до 33 лет, больных корью,

5 67 человек в возрасте 45-60 лет, переболевших корью в раннем детстве, 296 человек в возрасте от 1 г до 16 лет, привитых ЖКВ Л-16, и 52 ребенка в возрасте от 1 г до 3,5 лет, не болевших корью и не привитых ЖКВ (контрольная группа).

0 Всего исследовано 757 сывороток. Установлено, что заболевание корью и введение ЖКВ Л-16 приводит к интенсивному синтезу противокоревых антигемолизинов, которые обнаруживаются в течение длительного периода времени после заболевания или вакцинации. Однако у 23% привитых противокоревые антигемолизины не выявляются через 4-6 лет после вакцинации, что свидетельствует о возможности утраты с годами

311754874

поствакцинального противокоревого иммуни-ных контингентов населения, при этом оттета у некоторых привитых детей.личается простотой и легкостью постановки

Таким образом, предлагаемый способ оп-ведения исследований, а получение стабильределения состояния противокоревого им-ного активного гемолизирующего антигена

мунитета позволяет выявлять иммунных иувеличивает точность исследований не менее

неиммунных к вирусу кори лиц среди раз-чем на 10%.

и учета реакции, сокращается время про

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОСТОЯНИЯ ПРОТИВОКОРЕВОГО ИММУНИТЕТА путем выявления специфических антигемолизинов в сыворотках крови, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения, упрощения и сокращения времени исследования, выявление специфических антигемолизинов осуществляют при 45±1°С в течение 1,5-2 ч в реакции задержки прямого гемолиза, при этом используют стабильный гемолизирующий антиген, полученный обработкой вируссодержащей жидкости твином-эфиром.