Способ определения резистентности эритроцитов Советский патент 1985 года по МПК A61B10/00 

9

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ЭРИТРОЦИТОВ путем их разрушения с последующим определением степени гемолиза по выходу гемоглобина, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и чувствительности способа, разрушение эритроцитов проводят импульсным электрическим полем возрастающей напряженности от 1,4 до 3,2 кВ/см.

00 iib 1 Изобретение относится к и ветеринарии, а именно к гематологическим исследованиям, и может быть использовано для диагностики различных гемолитических заболеваний, других патологий, сопровождающихся изменением свойств эритроцитов, в частности эритроцитарнь1х мембран. Кроме того, способ может дать информацию о действии различных.реагентов ядов, лекарств на эритроциты как в русле крови, так и об изменениях при хранении и консервации крови. Цель изобретения - повышение точности и чувствительности способа. Пример. Предварительно заготавливают 10 пробирок следуклцей нумерации: К, 1, 2, 3, 4 5, 6, 7, 8, 100%. В первые 9 пробирок наливают 9,5 мл физиологического раствора, в пробирку 100% - столько же дистиллированной воды. Кровь из вены, пальца или пуповины в количестве 0,8 - 0,6 мл отмывается от плазмы по стандартным мето дикам физиологическим раствором. Затем 0,25 мл уплотненных эритроцитов смешивают с 25 мл изотонического раствора 9% сахарозы на Na-фосфатном буфере или трис-буфере (рН 7,4) Из полученной суспензии отбирают равные объемы и обрабатывают на любой установке, позволяющей получить в объеме 1-2 см импульсное однородное электрическое поле с прямоугольной, формой импульса. Рекомендуемый размер рабочей камеры - 2 см. Длительность импульса 300 мкс. Напряженность поля увеличивают от 1,4 до 3,2 кВ/см. Обработанные клетки в объемах по 0,5 мл помещают в соответствующие, заранее подготовленные ;пронумерованные пробирки. Напряженности поля, соответствующие номерам медицине пробирок, следующие, кВ/см: 1 про11784102бирка 1,4i № 2 - 1,6,- № 3 - 1;8; № 4 - 2,0;№ 5 - 2,2; № 6 - 2,4 № 72,8; № 8 - 3,2; в пробирке К и 100% помещают по 0,5 мл необработанных полем клеток из той же суспензии. Пробирки перемешивают и центрифугируют при 3000 10 мин. Содержание гемоглобина в надосадках определяют по оптической плотности при длине волны 410 нм на СФ-26. При этом нет необходимости количественно определять точную концентрацию гемоглобина. Процент гемоглобина вычисляется для каждой интенсивности поля по формуле j,, % гемолиза 100%, где D: - показание регистрирующего прибора для данной пробирD - показание прибора для пробирки 100% (с дистиллированной водой); Пробирка к - контроль, процент гемолиза для здоровых доноров при соблюдении методик не должен превышать 2,5-3%. Данные определения резистентности эритроцитов крови из пуповины новорожденного Б представлены в таблице. Для пробирки 3 (поле 1,8 кВ/см) оптическая плотность 0,140. Для пробирок со 100% гемолизом оптическая плотность оказалась 0,680. Тогда для данной пробирки степень гемолиза будет равна 1ЛО % гемолиза -;г41 -100% 20,59%. Резистентность эритроцитов новорожденного находится в пределах физиологической нормы, ,0 кВ/см.

1,80,175; 0,140; 0,180

2,00,335;0,350i 0,365

2,20,500i 0,480i 0,460

2,40,595; 0,610 0,620

2,80,650i 0,655; 0,640

3,20,680; 0,695; 0,680

100-100-100 HiO 0,680; 0,680;,0,680

Продолжение таблицы

25,74;20,59;25,4723,9

49,26;5li47}52,2151,0

73,53;70,59;67,6470,6

87,50,-89,71;91,1889,5

95,59;96,32;94,1295,3

100,Oi 100,0) 99,2699,8

100,0;100,0;100,0.100,0