Способ определения резистентности эритроцитов Советский патент 1982 года по МПК A61B10/00 

Изобретение относится к медицине, а именно к гематологическим лабораторным исследованиям, и может быть использовано для диагностики при токсикозах, бронхопневмониях, туберкулезе, лейкемии, лимфогрануломатозе, циррозе печени, при различных гемолитических заболеваниях. Известен способ определения резистентности эритроцитов путем их разрушения с последующим определением гемоглобина . Однако на проведение исследования 3известным способом затрачивается боль шое количество времени, при этом спо соб обладает низкой чувствительностью что затрудняет диагностику. Цель изобретения - повышение чувствительности и ускорение способа. Поставленная цель достигается тем что согласно способу определения резистеитности эритроцитов путем их разрушения с последующим определением гемоглобина эритроциты разрушают; ультразвуком с возрастающей интенсивностью от 0,05 до 0,6 Вт/см при частоте 880-890 кГц. Способ осуществляют следующим образом. .В центрифужную приборку с каплей гепарина производят забор 0,5 мл крови из любой сосудистой зоны (из пальца или вены). В предварительно подготовленные четыре центрифужные пробирки, содержащие 1,9 мл физиологического раствора хлористого натрия, вносят 0,1 мл крови. Содержимое пробирок осторожно перемешивают. Пробы озвучивают-, например, на ультразвуковом приборе Ультразвук Т-5. Рабочая частота высокочастотных колебаний составляет 880+8 8 кГц. Озвучивание производят путем соприкосновения ультразвуковой головки поверхностью 1 см с поверхностью физиологического раствора, содержащего эритроциты. Режим озвучивания: 0,05 Вт/см (1-я пробирка); 0,2 Вт/см 39 (2-я пробирка); О, Вт/см (3-я пробирка); 0,6 Вт/см ( пробирка). Время озвучивания 3 мин. Все пробир ки центрифугируют 10 мин при 2000об/ 1н 0 надосадочном растворе хлористого натрия, содержащем разрушенные эрит роциты, определяется уровень гемогло бина. Для этого из каждой пробирки отбирают по 0,3 ил надосадочной жидкости и помещают в соответствующее количество пробирок, содержащих 2,7 мл MitjOH (1 мм концентрированного разводится до 250 мл водой) содержимое пробирок тщательно перемешивают и йютометрируют или спектро фотометрируют в кювеТе (1 см) при длине волны 570 нм. Результаты выражают в грамм %. Концентрацию гемоглобина определяют по формуле: К ОП.22, где К концентрация гемоглобина в грамм %; ОП - оптическая плотность на регистрирующем приборе. В тех случаях, ког да определение ведется в крови при патологических процессах, сопровождающихся изменением количества эритроцитов, например,- при кровопотери, необходимо делать поправку на гематокрит. И в расчетной формуле исполь зуется гематокритный показатель: ОП. 22 Н где Н - гематокритная величина, . Полученные значения гемоглобина на каждом режиме суммируют и получаю величину гемоглобина, свидетельствую щую о гемолизе эритроцитов при обработке их ультразвуком. Увеличение выхода гемоглобина по сравнению с нор мой указывает на снижение резистивности эритроцитов, уменьшение выхода гемоглобина на повьпоение резистивнос ти. Пример. Больной Г., лет. В течение двух последних лет страдает приступами стенокардии. При поступлении в стационар снята ЭКГ„ проведено определение в крови комплекса биохимических показателей, подтвержда щих наличие хронической ишемической болезни.У больного произведен забор крови с каплей гепарина из вены. Для оп ределения резистентности эритроцитов отобрано 0,5 мл. После озвучивания полу чены результаты, представленные в табл. 1. Таким образом, у больного Г. выход гемоглобина составляет 5,76 г % при норме 15,6 ;t 0,67 г %, что свидетельствует о повышенной резистивности эритроцитов. С целью сравнения предлагаемого способа с извёЬтным у 5 кроликов моделировалась острая кровопотеря (65% объема крови) и определялась резистентность эритроцитов в исходном cotтоянии и через 2 ч после потери крови. Для выражения гюлученных результатов использовали известный способ показатель средней клеточной хрупкости, т.е. резистентности, соответствующую тому проценту раствора хлористого натрия, при котором гемолизуется 50 клеток. Изменение процента раствора, при котором гемолизуется 50% клеток, отражает изменение резистентности эритроцита. Показатели резистентности эритроцитов 7 кроликов в исходном состоянии и через 2 ч после тяжелой (б5%) кровопотери известным и предлагаемым способами приведены в табл. 2. Как видно из табл. 2, исследование резистентности эритроцитов известным способом показало, что у интактных животных 50% клеток гемолизуется при 0, растворе NaCl. После острой кровопотери 50% клеток гемолизируется „р, о,/,7 растворе NaCl, что является свидетельством того, что резис тентность эритроцитов через 2 ч после массивной потери крови не изменена. При использовании предлагаемого способа выход гемоглобина с учетом гематокритной величины увеличился на 24% по сравнению с исходным фоном, j что свидетельствует о снижении резистентности эритроцита ло сравнению с данными интактных кроликов. Таким образом, предлагаемый способ является более чувствительным и позволяет выявить функциональные изменения эритроцитов уже в первые часы развития патологического процесса, не выявляемого известным спосо бом.

npo6MpKM,Jl/f

Режим озвучивания, Вт/см

1.а.§-5.и..«.1

гемоглоСостояние резисграмм %

тентности