СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТЕПЕНИ ТЯЖЕСТИ ЭНДОГЕННОЙ ИНТОКСИКАЦИИ У НОВОРОЖДЕННЫХ ДЕТЕЙ С ГИПЕРБИЛИРУБИНЭМИЕЙ Российский патент 2008 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии и инфекционным болезням, и может быть использовано для оценки степени тяжести эндогенной интоксикации при гипербилирубинэмии у детей.

Эндогенная интоксикация (ЭИ) является неспецифическим синдромом, характерным для многих заболеваний. Прогноз течения заболеваний, выбор способа дезинтоксикационной терапии невозможно осуществить без объективной оценки степени эндогенной интоксикации. К настоящему времени разработано множество способов диагностики ЭИ. Наиболее объективными из них считаются: определение гуморального агента, ответственного за развитие ЭИ - определение, так называемого, маркера интоксикации. Но можно выделить слишком большую группу токсичных веществ эндогенного происхождения (билирубин, желчные кислоты, фракции остаточного азота, циркулирующие иммунные комплексы и др. так называемые средние молекулы или молекулы средней массы (МСМ) и еще большую группу экзогенных токсичных факторов). Определение МСМ достаточно дорогостоящий способ и требует определенного оборудования. Способы диагностики ЭИ путем тестирования крови больного на биологических агентах требуют определенных условий работы и значительных затрат времени. Таким образом, проблема маркера интоксикации еще далека от окончательного решения. В большинстве случаев факта обнаружения того или иного токсического агента недостаточно для того, чтобы адекватно объяснить клинические данные. Дезинтоксикационные механизмы в каждом организме имеют индивидуальный функциональный порог. В практической же деятельности врачу необходимо в считанные минуты определиться в степени интоксикации и своевременно начать реанимационные мероприятия, от своевременности начала которых зачастую зависит исход лечения.

В последние годы возрос интерес к изучению механизмов вовлечения системы крови в реакцию организма на стресс и экстремальные воздействия. Эритроциты первыми вступают в контакт с токсическими агентами, прежде всего вследствие их многочисленности и способности изменять свою форму и образовывать агрегаты. Контакт с токсическими агентами приводит к повреждению эритроцитарных мембран. Таким образом, повреждение эритроцитарных мембран можно рассматривать как интегральный показатель токсичности экзо и эндотоксинов.

В качестве прототипа авторы предлагают «Способ диагностики синдрома эндогенной интоксикации» Лазорева В.М., патент N RU 2234095 от 10.08.2004 г, включающий оценку проницаемости мембран эритроцитов в присутствии водного раствора NaCl в разведениях, количество эритроцитов определяют в камере Горяева и при количестве негемолизированных эритроцитов, в 10 раз превышающем контрольное, диагностируют синдром эндогенной интоксикации.

Наряду с несомненными достоинствами, метод имеет некоторые недостатки:

1) для данного метода используется венозная кровь в количестве 4 мл - 5 мл, что для педиатрической практики (особенно в неонатологии) не допустимо;

2) метод констатирует сам факт наличия или отсутствия эндогенной интоксикации у больных, не характеризуя отдельные степени ЭИ при гипербилирубинэмии, в частности;

3) возраст обследуемых от 17 до 76 лет - это значительный разброс, что может отразиться на результатах определения ПЭМ;

4) больные, взятые для обследования, с полиорганной патологией, что также может отразиться на результатах определения ПЭМ;

5) кровь детей не исследовалась, а у детей многие биохимические процессы протекают отлично от взрослых в силу того, что у детей происходит развитие и формирование систем адаптации (нервной, иммунной и эндокринной).

Техническим результатом заявленного авторами изобретения является повышение скорости и точности определения степени тяжести эндогенной интоксикации при гипербилирубинэмии у новорожденных детей. Предлагается: 1) микрометод (достаточно 0,02 мл крови); 2) метод количественный (более точный и быстрый: степень гемолиза определяли не в камере Горяева, что субъективно, а на ФЭКе, по концентрации свободного гемоглобина).

Эритроциты разводят физиологическим раствором в соотношение 1:2 (к 0,02 мл капиллярной крови добавляют 0,04 физиологического раствора) и по 0,01 мл взвеси помещают в 5 центрифужных пробирок, в каждую центрифужную пробирку добавляют по 2,5 мл рабочего раствора с возрастающей концентрацией мочевины. Схема приготовления рабочих растворов для определения ПЭМ приведена в таблице 1.

Таблица 1
Схема приготовления рабочих растворов для определения ПЭМРаствор мочевины 0,3 моль/л (мл)Раствор NaCl 0,87% (мл)Концентрация мочевины в рабочем растворе (моль/л)35650,1150500,1555450,16560400,1865350,19510000,3

Гемолиз в смесях изотонических растворов мочевины и хлористого натрия обусловлен способностью мочевины быстро диффундировать через клеточную мембрану и, создавая гиперосмолярную концентрацию внутри эритроцита, вызывать его набухание с последующим гемолизом. Степень гемолиза выражают в единицах оптической плотности. ПЭМ определяют как отношение оптической плотности пробы к оптической плотности пробы с 100% гемолизом (6-я пробирка), умноженное на 100%. Степень гемолиза пропорциональна проницаемости данной популяции эритроцитов.

Опытным путем было установлено, что наиболее информативными для определения ПЭМ были показатели оптической плотности гемолиза с рабочим раствором 60:40 (4-я пробирка).

Материалом для исследования явилась капиллярная кровь 96 новорожденных детей от 0 до 8 мес., находившихся в реанимационном отделении детской больницы №1 г.Твери, забираемая планово для контроля за их состоянием. Было установлено, что в норме (клинически здоровые новорожденные) проницаемость эритроцитарных мембран (ПЭМ) составляет 5,04±0,2%. Показатели ПЭМ у новорожденных с гипербилирубинэмией имели большой разброс. При легкой степени гипербилирубинэмии показатели ПЭМ составили 12,05±0,06%, при среднетяжелой - 29,8±0,015%, при тяжелой форме - 58,23±0,24%.

Результаты исследования приведены в таблице 2.

Таблица 2
Показатели ПЭМ зависимости от стадии эндогенной интоксикации (ЭИ)№п/пИзмеряемые показателиКонтроль n=13Легкая степень ЭИ n=28Среднетяжелая степень ЭИ n=34Тяжелая степень ЭИ n=211Количество эритроцитов (млн/мл)5,3±0,265,3±0,274,8±0,244,5±0,232Степень гемолиза (единицы оптической плотности)0,5±0,0261,6±0,791,98±0,012,5±0,13ПЭМ (проницаемость эритроцитарных мембран) %5,04±0,212,05±0,0629,8±0,01558,23±0,24

Клинические испытания «способа определения степени тяжести эндогенной интоксикации при гипербилирубинэмии у новорожденных» показали, что способ позволяет прогнозировать степень эндотоксикоза с точностью прогноза 85%. Диагностически значимым для перехода в новое состояние (здоровые, то есть нет интоксикации - легкая - среднетяжелая - тяжелая степень тяжести интоксикации) является увеличение ПЭМ приблизительно в два раза (5,04±0,2-12,05±0,06-29,8±0,015-58,23±0,24). Происходит своего рода качественный скачок.

Клинический пример №1

Больной С., 18 дней, история болезни 1409, поступил в отделение патологии новорожденных детской городской больницы №1 по поводу выраженного беспокойства (монотонный плач), незначительная желтушность кожи и склер, печень +3 см, гипертермия до 38 градусов С.ПЭМ было определено сразу при поступлении (результат в течение 30 минут: эритроциты у ребенка 4,7 Гига\л, степень гемолиза в опытной пробе (60:40)=1,393 ПЭМ=Еоп./Е(100% гем.)*100%=1,393/2,401*100%=58,017%, что свидетельствовало о тяжелой степени эндогенной интоксикации). Больной переведен в реанимационное отделение, где ему проводилась интенсивная терапия. Окончательный диагноз: нарушение гемоликвородинамики, гипербилирубинэмия 3 стадии, тяжелая степень. Прогноз полностью подтвердился.

Клинический пример №2

Больной М., 2 мес, история болезни 1287, поступил в отделение патологии новорожденных детской городской больницы №1 по поводу выраженной желтушности склер, температура тела 38 градусов С, однократная рвота фонтаном, печень +2 см. Было определено ПЭМ сразу при поступлении (результат в течение 30 минут: эритроциты 5,1 Гига\л, степень гемолиза в опытной пробе (60:40)=0,1201, ПЭМ=0,1201/1,001*100%=11,99%). Была диагностирована легкая степень эндогенной интоксикации. Ребенок после проведения дезинтоксикационных мероприятий был переведен в инфекционное отделение. Уже к концу первого дня госпитализации температура нормализовалась, ребенок активный, сосет хорошо, стул нормальный, рвоты не было, желтушность склер значительно уменьшилась. Окончательный диагноз: ОРВИ: энтеровирусная инфекция, гипербилирубинэмия 1 стадии, легкая степень. Прогноз подтвердился.

Клинический пример №3

Больной Д., 4,5 мес., история болезни 1187, поступил в реанимационное отделение городской больницы №1 по поводу желтушности склер и ладоней, многократной рвоты фонтаном, обезвоживания (запавший родничок), повышенной температуры тела до 38,5 градусов С. Печень +3 см. Стул светлый. Мама мальчика 8-й день находится в инфекционном отделении по поводу гепатита А. С ребенком сидела бабушка. Со слов бабушки заболел остро. Нарастала вялость, повысилась температура, началась рвота. По скорой доставлен в больницу. При поступлении у ребенка определили ПЭМ (результат в течение 30 минут: эритроциты 4,7 Гига\л, степень гемолиза в опытной пробе (60:40)=0,58, ПЭМ=0,59/1,98*100%=29,798%).

Была диагностирована среднетяжелая степень тяжести интоксикации. После проведенных дезинтоксикационных мероприятий ребенок через сутки был переведен в инфекционное отделение. Окончательный диагноз: гепатит А, гипербилирубинэмия 2 стадии, средне-тяжелая степень тяжести. Прогноз полностью подтвердился.

Изобретение относится к области медицины, а именно к педиатрии и инфекционным болезням, и может быть использовано для определения степени тяжести эндогенной интоксикации у новорожденных детей с гипербилирубинэмией. Сущность способа: осуществляют забор 0,02 мл капиллярной крови, в которой определяют проницаемость эритроцитарных мембран по осмотической резистентности эритроцитов. При значении проницаемости эритроцитарных мембран 12,05±0,06% диагностируют легкую степень эндогенной интоксикации, при значении 29,8±0,015% - среднетяжелую степень эндогенной интоксикации, а при значении 58,23±0,24% - тяжелую степень эндогенной интоксикации. Использование способа позволяет повысить точность определения степени тяжести эндогенной интоксикации при гипербилирубинэмии у новорожденных детей. 2 табл.

Способ определения степени тяжести эндогенной интоксикации у новорожденных детей с гипербилирубинэмией, включающий исследование крови, отличающийся тем, что осуществляют забор 0,02 мл капиллярной крови, определяют проницаемость эритроцитарных мембран по осмотической резистентности эритроцитов, и при значении проницаемости эритроцитарных мембран 12,05±0,06% диагностируют легкую степень эндогенной интоксикации, при значении 29,8±0,015% - диагностируют среднетяжелую степень эндогенной интоксикации, а при значении 58,23±0,24% - тяжелую степень эндогенной интоксикации.