Способ определения резистентности организма Советский патент 1985 года по МПК A61K39/00 

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может быть использовано для прогнозирования, профилактики и лечения неспецифических забрлеваний различной эти ологии. Цель изобретения - повышение точности способа определения резистентное ти организма. Способ осуществляют следуюпщм образом. У обследуемого осуществляют забор пробы крови из концевой фаланги паль ца при помощи меланжера до отметки 0,5. Затем в этот же меланжер допол нительно вводят до отметки 1,1 разбавляющую жидкость, представляющую собой 3%-ньй раствор уксусной кислоты, окрашенный 1%-нь1М раствором мети леновой сини. Затем, осуществляя колебательные движения меланжера в течение трех минут, перемешивают находящиеся в нем жидкости. Полученную смесь вводят в камеру Горяева и общепринятым способом осуществляют под счет лейкоцитарных клеток. Для этого параллельно с забором пробы крови для определения общего.количества лейкоцитов у обследуемого берут мазо крови путем нанесения капли крови на предметное стекло с последукмцим распределением ее по предметному стеклу специальным шпифованным стеклом. Полученный мазок высушивают, фиксируют красителем, приготовленным по методу Май-Гронвальда, и окрашивают по методу Романовского-Гимзе. Полученный мазок промывают, высушивают на воздухе и производят подсчет форменных элементов лейкоцитарной формулы под микроскопом с иммерс онной системой. Далее приступают к определению фагоцитарной активности нейтрофиловфагоцитов по методу Бермана и Славской, основанному на фазности фагоцитарной реакции. Для этого в центри фужную пробирку, содержащую 0,3 мл пробы крови, вносят 0,1 МП 3%-ного раствора цитрата натрия. Пробирку центрифугируют 20 мин со скоростью 500 об/мин. Надосадочную жидкость сливают, а в осадок вносят 0,1 мл 10 миллиардной взвеси Рас. Cb1i (штамм 276) и термостатируют при 37 С в течение 45-60 мин при встряхивании взвеси через каяодые 15 мин. После термостатирования несколько капель взвеси переносят на агар в чашку Петри и распределяют при помощи предметного стекла. Затем чашку Петри помещают в термостат и вьщерживают 2 ч при . После термостатирования к поверхности агара прикладывают слегка прижимая обезжиренное подогретое предметное стекло, после чего стекло быстро снимают, полученный мазок высушивают, фиксируют и окрашивают методом, аналогичным использованному при окраске препарата для подсчета лейкоцитарной формулы, и исследуют под микроскопом с иммерсионной системой с целью подсчета количества активных нейтрофилов, т.е. нейтрофилов, в протоплазме которых бьши обнаружены микробные тела, и неактивных нейтрофилов, т.е. захвативших микробных тел. Суммарное количество активных и неактивных нейтрофилов не превьш1ает 100 нейтрофилов. Затем в активных нейтрофилах подсчитывают количество жизнеспособных и нежизнеспособных микробных тел. На основании полученных результатов вычисляют фагоцитарное число по формуле где а - количество активных нейтрофилов;о - количество неактивных нейтрофилов;фагоцитарньй индекс по формуле а где С - количество жизнеспособных микробных тел; - количество нежизнеспособных микробных тел; и коэффициент завершенности фагоцитоза по формуле С d. Затем в сухую центрифужную пробирку помещают 0,5 мл крови и получают сьгооротку путем центрифугирования со скоростью 1500 об/мин. В отдельную пробирку отбирают 0,2 мл полученной сыворотки и добавляют в нее 1,8 мл 0,5%-ного раствора хлорида натрия (для получения разведения сыворотки 1:10) и тщательно перемешивают. Затем в шесть отдельных пробирок наливают по 1 мл 0,5%-ного раствора хлорида натрия. Из пробирки, содержа щей сыворотку в разведении 1:10, отбирают 1 МП и наносят на первую пробирку ( I ), содержащую чистый физиологический раствор, перемешивают, от бирают из нее 1 мл и вносят его в следующую (II) пробирку и т.д. анало гичным образом до последней пробирки из которой после перемешивания отбирают 1 мл с целью достижения равенст ва объемов во всех исследуемых пробирках. В каждую из пробирок вносят бактермальную смесь, приготовленную сле дующим образом. В пробирку со скошенным мясопептонным агаром вносят культуру Вас. Coli (штамм 276) и пробирку помеща.ют в термостат (t 37 С) на 24 ч. Через 24 ч известным способом готовят 10-миллиардную взвесь бактерий. В каждую пробирку с указанным разведением сьторотки вносят по две капли полученной взвеси бактерий с последующим вьщерживанием их в термостате при в течение 24 ч. Через 24 ч определяют титр нормального агглютинина по последней пробирке, в которой еще обнаруживают агглютинат. После этого прис1упают к определению активности лизоцима. Для этого из оставшейся сыворотки отбирают О,1 мл и вносят в пробирку, содержащую 4,9 мл 0,5%-ного раствора хлорида натрия. В эту же пробирку затем вносят 1 мл 10-миллиардной взвеси бактерий M.Lysodecticus, перемешивают и осуществляют первичное фотоколориметрировагше. Затем пробирки с бактериальной взвесью термостати руют при 37 С в течение трех часов и повторно фотоколориметрируют. При этом в качестве контроля используют физиологический раствор, содержащий 10-миллиардную взвесь M.Lysodecticus без сыворотки. Активность лизоцима вычисляют по формуле D.-2ti. . ioo D,

L - активность лизоцима;

D - оптическая плотность до

термостатирования в пробе; D - оптическая плотность после термостатирования в пробе;.

55

Пр и м е р 1. Гольного К. с диагнозом: острый язвенно-некротический оптическая плотность до термостатирования в контроле; оптическая плотность после термостатирования в контроле. Показатель резистентности вычисляпо формуле: У lSiISi I - а 1,2,..., 2 ; показатель резистентности; относительньй статистический вес -го показателя; величина -го показателя у пациента в момент обследования;известная из практики величина 1 -го показателя, соответствующая наименьшей резистентности организма;а. - известная из практики величина 1 -го показателя, соответствующая наибольшей резистентности организма. При значении показателя резистентти ниже 110 определяют сниженную истентность, а при его значении е 140 --повышенную резистентность. Величины относительных статистиких весов (к) каждого из семи по-, ателей приведены в таблице :iE Показатель ффциент завершенности оцитоза оцитарное число ее содержание нейтрофилов ивность лизоцима ержание агглютинина ее число лейкоцитор оцитарный индекс гингивостоматит обследовали с цель определения резистентности предлаг емым способом. Показатели крови Общее число лей1ьоцитов, лейкоцитарные клетки/л 13,5- 1 Общее содержание нейтрофилов,%74 Активность лизоцима,% 23 Содержание агглютинина, титр80 Фагоцитарное число,% 40 Фагоцитарньй индекс,ед 6 Коэффициент завершеннос.ти фагоцитоза 0,40 Вычисленный показатель резистен ности составил 74,72, Следовательно, у больного была оценера сниженная резистентность . Резистентность организм оцененная по известному способу, т же оказалась сниженной. После проведенного лечения у бо ного наблюдалась полная эпителизац элементов поражения. В этот период у него повторно бьша определена ре зистентность. Показатели крови: Общее число лейкоцитов, лейкоцитарные клетки/л 6, Общее содержание нейтрофилов,% 63 Активность лизоцима,% 79 Содержание агглютини- , на, титр 160 Фагоцитарное число,% 69 Фагоцитарньй индекс,ед. 3,4 Коэс фициент завершенности фагоцитоза 0,78 ВЬ1числен«ьй показатель резистен ности составил 126,6. У больного бьша оценена нормальная резистентность. При оценке резистентности по известному способу она по- прежнему оставалась ниже нормы. Больной К. был вызван для контрольного осмотра через две недели после полной эпителизации элементов поражения. Показатели крови: Общее число лейкоцитов, лейкоцитарные клетки/л 6, Общее содержание нейтрофилов, %67 Активность лизоцима,% 84 Содержание агглютинина, титр160 Фагоцитарное число, % 75 Фагоцитарный индекс,ед. ,3,2 Коэффициент завершенности фагоцитоза0,93 Вычисленный показатель резистентности составил 141,0. Оценена повышенная резистентность организма. По известному способу резистентность бьша оценена также повышенной. Положительньй эффект предлагаемого способа подтверждается тем, что из 16-ти обследованных больных предлагаемым способом результаты оценки резистентности в норме. В то же время определение резистентности известным способом позволило лишь у шести обследованных лиц установить нормальную резистентность, у остальных было показано снижение резистентности, что составляет 37,5% случаев. Следовательно, использование предлагаемого способа повышает точность определения резистентности организма по сравнению со способом, основываюп мся на определении коэффициента завершенности фагоцитоза, ъ 1,1 раза.

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА, включющий определение активных и неактивных нейтрофилов с последующим подсчетом в них показателя резистентности, отличающийся тем, что, с целью повьшения точности способа, дополнительно определяют в крови общее количество лейкоцитов, общее содержание нейтрофилов, активность лизоцима и содержание агглютинина, подсчитывают показатель резистентности для каждого показателя крови, сумм1 руют и при общем показателе резистентности ниже 110 определяют сниженную резисS тентность, а при его значении вьш1е (Л 140 - повьпиенную резистентность.