Способ определения резистентности организма Советский патент 1984 года по МПК G01N35/569 

1. СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА, включающий инкубацию лейкоцитов крови с тестмикробной взвесью с последующим подсчетом живых и мертвых микроорганизмов, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения, взаимодействие лейкоцитов с тест-микробной взвесью осуществляют в присутствии аутосыворотки. 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве тест-микробов используют B.lisodecticus в количестве 80 клеток на 1 лейкоцит, а сыворотку добавляют в количестве 2,5 мл.

4

Изобретение относится к медицине, преимундественио к лабораторной диагностике и может быть использовано при любых локализациях инфекционно-воспалительных процессов (в урологии, в хирургии, в гинекологии и т.д.).

Известен способ определения резистентности организма, включающий инкубацию лейкоцитов крови с тест-микробной взвесью с последующим подсчетом живых и мертвых микроорганизмов 1.

Однако известный способ недостаточно точен, поскольку учитывается только одна сторона иммунологического состояния - реакции клеточного иммунитета и не учитывается анти.микробная активность сыворотки.

Цель изобретения - повышение точности определения резистентности организма.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определения резистентности организма, включающему инкубацию лейкоцитов крови с тест-микробной взвесью с последующим подсчетом живых и мертвых микроорганизмов, взаимодействие лейкоцитов с тест-микробной взвесью осуществляют в присутствии аутосыворотки.

В качестве тест-микробов используют B.lisodecticus в количестве 80 клеток на 1 лейкоцит, а сыворотку добавляют в количестве 0,5 мл.

Способ осуществляется следующим образом.

Для получения 0,5 мл сыворотки у больных с инфекционно-воспалительными процессами в мочеполовых органах, в желчном пузыре, в легких и в других органах производят забор в пробирку около 2-3 мл венозной крови. Лейкоциты получают из надосадочного слоя цитратной крови больных. С этой целью в пробирку набирают 0,7 мл 3,8-/о раствора лимонно-кислого натрия и 3 мл венозной крови. Пробирки центрифугируют при 1000 об/мин в течение 5 мин и вместе с надосадочной жидкостью отделяют лейкоциты от эритроцитов. Лейкоциты отмывают от цитрата 0, раствором хлористого натрия путем центрифугирования при 3 тыс. об/мин в течении 5 .мин. При попадании в пробирку во время отделения лейкоцитов некоторого количества эритроцитов и тромбоцитов (мещающих учету бактерицидной активности), последние разрушают добавлением З /о-ного раствора уксусной кислоты. После разрушения эритроцитов лейкоциты сразу же отмывают путем центрифугирования от уксусной кислоты. К осадку отмытых лейкоцитов добавляют 1,0 мл 0,9%ного раствора хлористого натрия и смещивают их с 0,5 мл сыворотки крови. К приготовленной смеси добавляют одномиллиардную взвесь суточной культуры B.lisodecticus из расчета до 80 микробных клеток на один лейкоцит, обычно это составляет 0,2 -

0,3 м микробной взвеси. Смыв B.lisodecticus и титрование культуры производят 0,9°/о-ным раствором NaCl. Приготовленную смесь инкубируют в термостате в течении 3 ч при с 37°. По окончании срока инкубации пробирки центрифугируют при 3 тыс. об/мин в течении 5 мин. Надосадочную жидкость сливают, осадок встряхивают и из последнего готовят на стандартных стеклах мазки. После высушивания на воздухе мазки фиксиру ют в течении 5 мин в метиловом спирте или в смеси этилового спирта с формалином в соотношении 19:1. Фиксированные мазки окрашивают по методике Spitznagel в модификации В. Е. Пигаревского, т.е. в течении

5 15 мин зеленым прочным и в течении 30 с азуром А. При приготовлении растворов красителей (зеленого прочного и азура А) придерживаются рекомендаций В. В. Пигаревского. Так, рН раствора зеленого прочного составляет 8,1; готовят 0,25/о-ный раствор

0 азура А. При этом методе окраски живые микроорганизмы окрашиваются в сиреневый или в темно-синий цвета, а неживые - в зеленый цвет или определяются в виде теней, а также сферопластов. Для учета активности антимикробных факторов лейкоцитов и сыворотки крови впервые использован метод полуколичественной оценки в виде среднего цитохимического коэффициента (СЦК). С этой целью модифицирована формула Астальди и Верга:

СЦК

100

где а--тени бактерий;

5 - бактерии, окрашенные в зеленый

цвет; е - сферопласты;

Г - бактерии, окращенкые Б сиреневый

цвет;

:fGO -.-. общее число подсчитанных микробных клеток.

Из основании полученных у различных групп больных данных впервые разработаны критерии оценки активности антимикробных факторов лейкоцитов и сыворотки крови, а следовательно, и резистентности организма к инфекции. При этом активность антимикробных факторов лейкоцитов и сыворотки крови расценивалась как высокая при СЦК 1,0 и выше; 0,6-0,9 - средняя; 0,3- 0,5 - низкая и О-0,2 - очень низкая. Пример 1. Больной Д. 56 лет находился на стационарном лечении в урологическом отделении областной клинической больницы. Диагноз: обострение хронического левостороннего пиелонефрита, хронический простатит.

Клинические проявления заболевания:

боли в поясничной области слева, озноб с

гюБышением температуры до 38-39°С, дизурические расстройства акта мочеиспускания.

Указанные явления отмечались в течении

четьфех дней. За это время больной наблюдался и лечился у врача -уролога полиj линики.

Краткие данные анамнеза. Семейный анамнез не отягощен. В 1980 г. перенес левостороннюю уретеролитотомию, а в 1981 г - левостороннюю пиелолитотомию. Послеоперационный период протекал гладко. Рана зажила первичным натяжением. Пассаж мочи из левой почки восстановился. С 1981 г по март 1983 г перенес три атаки строго левостороннего пиелонефрита. Дважды находился на стационарном лечении в урологическом отделении областной больницы.

По данным рентгеноурологического обследовании рецидива камней в почках и в мочеточниках нет. Слева имеются признаки острого пиелонефрита. По данным изотопной регографии функция левой почки снижена в фазе секреции и экскреции. Проба Реберга-Тареева не изменена. Анализы при поступлении. Общий анализ крови 10.04.83 г.Эритр. 3,9-1 о ; гемоглобин 130 г/л; лейкоцитов - 3,9-10 (эозинофил. 1, палочки 10, сегмент 54, лимфоцит 25, моноцит 10), СОЭ22 мм/ч. Общий анализ мочи: белка 0,066%, лейкоцитов на 1/2 поля зрения, соли - ураты. Из мочи высеян протей в титре до 100 тыс. в одном мл мочи. По данным коагулограммы имеет место гиперкоагуляция. Печеночные пробы и электролиты в норме. Общий белок 70 г/л, -у-глобулин 19%.

Иммунологические исследования при поступлении.

Индуцированная активность лейкоцитарного лизоцима 0,0028 мкг/л.

Бактерицидная активность лейкоцитов крови (СЦК) 0,5. Бактерицидная активность сыворотки крови (СЦК) 0,3. Суммарная бактерицидная активность лейкоцитов и сыворотки крови (СЦК) 1,0. Содержание иммуноглобулинов в сыворотке крови (Jg) - Jg200; Jg М 140 и Jg 80 МЕ/мл. Интенсивность фагоцитоза лейкоцитов крови (ИФ) 48%, фагоцитоз незавершенный.

Лечение больного.

Антибактериальная терапия: биссептол 480 по 2 таблетки два раза в день, карбенициллин по 500 тыс. ед. внутримышечно четыре раза в сутки (1 курс), фуразолидон 0,05 гр четыре раза в сутки, эритромицин 0,25 гр три раза в день (II курс).

Для повышения активности антимикробных факторов организма использовали: метандростенолон 0,005 гр три раза в день внутрь; левомизол 150 мг один раз в три дня и витамин А по 500 тыс. ME три раза в день. Указанные препараты больному назначены с третьего дня после поступления на стационарное лечение. Курс лечения проведен в течении 15 дней.

Кроме указанной терапии проводилось симптоматическое лечение и гальваногрязевые апликации на область предстательной

железы (в связи с хроническим простатитом). Диета - стол № 7, седативные препараты (родедорм) утром и вечером. Режим - полупостельный. Дважды внутривенно введено по 120 мл нативной плазмы и по 200 мл гемодеза.

По окончании курса лечения состояние больного улучшилось. Болевой синдром и дизурические явления прекратились. В удовлетворительном состоянии выписан на ам0 булаторное лечение. Койко-день в стационаре - 17 дней. Больной после выписки из стационара приступил к труду.

Исследования проведены у 102 больных с инфекционно-воспалительными процессами в почках 55 человек; в мочевом пузыре

5 10 человек, в предстательной железе 15 человек; в яичках 5 человек; в яичниках и в матке 12 человек и в желчном пузыре 10 человек. Кроме того, исследования также проведены у 20 здоровых людей (доноров).

0 Наряду с одновременным изучением активности антимикробных факторов лейкоцитов и сыворотки крови у больных и у доноров, также изучали раздельную антибактериальную активность сыворотки крови и лейкоцитов. С этой целью к 0,5 мл сыворотки крови добавляли 0,2 мл миллиардной взвеси суточной культуры B.lisodecticus. Живую суточную культуру B.lisodecticus добавляли раздельно к отмытым лейкоцитам из расчета до 80 микробных клеток на один

0 лейкоцит. Препараты с раздельным исследованием окрашивали зеленым прочным и азуром А по указанной методике. Живая суточная культура B.lisodecticus взята в качестве тест-микроба в связи с тем, что она в отличии от других тест-микробов (стафи5 лококков, энтеробактерий, стрептококков и многих штаммов кишечной палочки) обладает высокой чувствительностью к сывороточным и лейкоцитарным защитным факторам. Кроме того, более крупные по сравне0 нию с 209 лабораторным штаммом стафилококка размеры микробных клеток B.lisodecticus позволяют более точно определить их состояние после взаимодействия с зашятными факторами лейкоцитов и сыворотки крови.

5 В результате проведенных исследований установлено, что у здоровых доноров среднийцитохимический коэффициент

(СЦК) при одновременном определении активности антибактериальных факторов в

лейкоцитах и в сыворотке крови составляет 2,Г-0,2.

СЦК при раздельном определении активности антибактериальных факторов в лейкоцитах и в сыворотке крови здоровых 5 людей составляет 1,0-0,06 и 0,8-0,01 соответственно. При суммировании данных раздельного исследования (1,,,8) видно, что эти показатели значительно ниже, чем