Способ определения степени повреждения клеток Советский патент 1985 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к криобиологии, в частности к способам определения повреждений клеток.

Цель изобретения - определение повреждения субклеточных органелл.

Пример. В стеклянную ампулу ввели 0,4 мл суспензии ли:зосом. Сюда же при постоянном перемешивании, с экспозицией по времени после каждого добавления в 1 мин, добавляли дискретно по 20 мкл 0,1 мл раствора, содержащего 10 М спинового зонда и 1М NiClj. Добавки производили пять раз. Наблюдали спектр ЭПР от радикалов, находящихся в цитозоле лизосом (компоненты 1) и радикалов, находящихся в мембранах лизосом (компоненты 1). Быстрое замораживание полученной суспензии до 77 К с последующим быстрым отогревом до комнатной температуры

95246

приводило к падению интенсивности сигнала с компонентами 30%, что свидетельствовало о нарушении проницаемости мембран 30% субклеточных органелл. Сохранение интенсивности сигнала с компонентами 1 свидетельствует о том, что на рушение проницаемости мембран происходит путем образования пор, проницаемых для ионов никеля. Если исследуемый раствор готовить согласно известному способу, то сигнал ЭПР от него не наблюдается. Это объясняется тем, что резкое увеличение концентрации соли в суспензии органелл приводит к разрушению их мембранных структур, и спиновый зонд становится доступным для парамагнитных ионов что вызывает

20 уширение спектра ЭПР от зонда до необнаружения уже в исходном состоянии.

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТЕПЕНИ ПОВРЕЙЩЕНИЯ КЛЕТОК путем добавления к биологическому материалу раствора спинового зонда, содержащего 2,2,6,6-тетраметш1-4-оксопиперидин-t-оксил и хлористый никель с последующей регистрацией величины сигнала электроиного парамагнитного резонанса, отличающийся тем, что, с целью определения повреждения субклеточных органелл, раствор спинового зонда добавляют 5 раз в отношении 1:20 с экспозицией 1-2 мин.