Способ выделения антител при помощи сорбции антигенами, фиксированными химическим путем на целлюлозе, с последующей элюцией Советский патент 1959 года по МПК A61K39/44 

Для лечения и профилактики ряда заболеваний (столбняка, дифтерии, газовой гангрены и других) используются сыворотки крови иммунизированных животных.

Действующим началом этих сывороток являются белковые вещества - антитела. Все остальные белки иммунной сыворотки, составляющие основную ее массу, не обладают лечебными свойствами, являются чужеродными для человеческого организма и могут вызвать нежелательные реакцияИзобретением является способ выделения чистых антител иммуносорбентом, представляющим собой антиген, фиксированный на целлюлозе при помощи галоидалкилата.

Способ осуществляется следующим образом. 50 г целлюлозного порошка заливают 100 мл 7%-ного раствора галоидалкилата в 2,5%-ном растворе уксуснокислого натрия. Перемешивают, щысушивают при 60- 80° и затем прогревают в течение 40 мин. при 125°. При этом остаток галоидалкилата вступает в прочную химическ ю связь с целлюлозой. Целлюлозный порошок на бюхнеровской воронке отмывают водопроводной водой (в течение 20 ми«.) от несвязавшегося с целлюлозой галоидалкилата. Переносят в сушильный шкаф и вновь полностью высушивают при 80°. Сухой порошок три раза промывают бензолом (по 200 мл), высушивают на бюхнеровской воронке, переносят в стакан с 300 мл 15%-ного раствора гидросульфита натрия, нагретого до 50-60°, и выдерживают порошок в этом растворе при постоянном перемешивании 30 мин. Содержимое стакана переносят на бюхнеровскую воронку, жидкость отсасывают, а порошок промывают 20 мин. водопроводной водой. Далее порошок на 30 мин. помещают в стакан с охлажденной диазотирующей смесью (1,5% NaNOg в 5% НС1). Во время диазотирования смесь непре№ 119658- 2 -

рывно перемешивают, после этого порошок промывают 5 мин. водопроводной водой и подсушивают па бюхнеровской воронке. Для комплексирования с белком слегка подсушенный порошок переносят в эрленмейеровскую колбу с 150 мл раствора белка (10, 20 или 25 мг на миллилитр) в боратном буфере рН 8, 6. Колбу укрепляют на магнитной мешалке и помешают ее на 24 час. в рефрижератор, после чего тш,ательпо отмывают порошок от несвязавшегося с целлюлозой белка водопроводной водой и физиологическим раствором. К отмытому порошку добавляют вероналовый буфер рН 9,2 с бета-нафтолом, оставляют па 8- 10 час. и отмывают от бета-нафтола. Готовый иммуносорбент высушивают па воздухе.

Удаление белков, не связанных с иммуносорбентом, проводится пропусканием через колонку 10% NaCl до тех пор, пока в вытекаюшей из колонки жидкости содержание белка не будет меньшим, чем 5-10 мг на 1 мл жидкости.

Элюция антител проводится при помощи подкисленного до рН 3,2 1% раствора хлористого натрия. Элюцируюш,ий раствор пропускают через колонку и собирают вытекаюшую из нее жидкость, либо к пасыш:енному иммуносорбенту добавляют элюцирующий раствор и перемешивают 60 мин. при комнатной температуре.

Предмет изобретепия

Способ выделения антител при помош,и сорбции антигенами, фиксированными химическим путем па целлюлозе, с последуюш,ей элюцией, отличаюш,ийся тем, что, с целью повышения степени очистки антител, фиксацию антигенов производят через остаток галоидалкилата.