Способ получения сорбента для аффинной хроматографии Советский патент 1991 года по МПК C08B15/06 G01N30/48 C12N11/12 

Изобретение относится к получению производных целлюлозы, которые могут быть использованы в качестве сорбентов для аффинной хроматографии, используемых в биотехнологии.

Цель изобретения - повышение механической прочности сорбента.

П р и ме р 1.4,1 гсвежеприготовленного Си(ОН)2 растворяют в 50 мл 25%-ного NHijOH. раствор добавляют к 5 г целлюлозы из линта хлопчатника. Через 20 ч объем смеси доводят тем же раствором аммиака до 500 мл. Раствор осветляют центрифугированием в течение 5 мин при 4000 об/мин, 50 мл полученного медно-аммиачного раствора помещают в сосуд емкостью 500 мл, куда налито 200 мл смеси хлороформ:бензол 1:9, содержащей 0,26 мзс.% (0,6 мл с ,08

г/см полиоксиэтиленсорбитанмоноолеата. В сосуд опускают мешалку и эмульгируют в течение 4-5 мин при 440 об/мин Эмульгированную целлюлозу выпускают через нижний отросток в регенерирующий раствор, содержащий 500 мл ацетона и 50 мл ледяной уксусной кислоты. Через 8 мин, выпавшие шарики, отделяют и промывают 10-ю объемами воды.

Пористые целлюлозные шарики фракционируют на капроновых ситах и отделяют фракции, содержащие частицы целлюлозы размером 70-200 мкм.

1 г (100 мл) пористых целлюлозных шариков (ПЦШ) помещают в круглодонную кол бу емкостью 500 мл, снабженную обратным холодильником, добавляют 100 мг. пиридина, содержащего 1.6 мас.% боргидрида наО

ю ю

трия. и нагревают на водяной бане в течение 8 ч. После этого сорбент промывают на воронке Бюхнера сначала ацетоном,а затем дистиллированной водой до исчезновения следов ацетона.

1 г (100 мл) ПЦШ промывают еще раз на стеклянном фильтре дистиллированной водой, переносят в стакан, суспендируют в 70 мл дистиллированной воды и добавляют 20 мл 12%-ного раствора NaOH, 0,016 мас.% (0,2 мл, ,18 г/см ) эпихлоргидрина и 0.01 мас.% (20 мг) №ВЩ. Стакан помещают в водяную баню и нагревают смесь до 60°С о течение 2 ч, постоянно перемешивая посредством механической мешалки. Через 2 ч продукт промывают дистиллированной водой до нейтрального значения рН.

Затем сорбент активируют обработкой 0,015 М раствором NaJCM в течение 18 ч в темноте и снова промывают водой.

Далее сорбент обрабатывают 0,1 М кар- бонат-бикарбонатным буферным раствором с рН 9,2 и для получения иммуносорбента добавляют предварительно отдиализован- ный против буфера белок (гамма-iлобулин лошади). Смесь перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре и инкубируют 1 сут при 4°С. Полученный иммуносорбент промывают поочередно 0,01 М раствором HCI в 0,15 М растворе NaCI и затем 0,1 М борно-боратным буфером с рН 8,6 Свободные альдегидные группы восстанавливают

обработкой иммуносорбента 0,1 М МаВЩ в 0,15 М NaCI, а затем отмывают его 0,15 М раствором NaCI, Количество присоединившегося белка.отделяют по окрашиванию бромфеноловым синим.

Условия получения и свойства сорбента при различных параметрах способа представлены в таблице.

10

Формула изобретения

Способ получения сорбента для аффинной хроматографии, включающий осаждение целлюлозы из эмульсии 1%-ного

медно-аммиачного раствора целлюлозы в смеси хлороформа и бензола при объемном соотношении их соответственно 1:9, содержащей 0,13-0,26 мас.% полиоксиэтиленсор- битанмоноолеата, раствором уксусной

кислоты в ацетоне и обработку выделенного продукта 1,6%-ным раствором боргидрида натрия в пиридине в течение 4-8 ч с последующей активацией водным раствором пе- риодата натрия и коньюгацией с белком,

отличающийся тем, что, с целью повышения механической прочности сорбента, перед активацией продукт обрабаты- вают водным щелочным раствором, содержащим 0,01-0,05 мас.% эпихлоргидрина и 0,01-0,04 мас.% боргидрида натрия при нагревании.

дальнейшем использовании)

Изобретение относится к получению производных целлюлозы, которые могут быть использованы в качестве сорбентов для аффинной хроматографии и биотехнологии. Изобретение позволяет повысить механическую прочность сорбентов за счет того, что целлюлозу осаждают из эмульсии 1%-ного медно-аммиачного раствора целлюлозы в смеси хлороформа и бензола при их объемном соотношении соответственно 1:9, содержащей 0,13 - 0,26 мас.% полиоксиэтиленсорбитанмоноолеата, раствором уксусной кислоты в ацетоне. Выделенный продукт обрабатывают 1,6%-ным раствором боргидрида натрия в пиридине, в течение 4 - 8 ч с последующей обработкой водным щелочным раствором, содержащим 0,01 - 0,05 мас.% эпихлоргидрина и 0,01 - 0,04 мас.% боргидрида натрия, при нагревании. Затем продукт активируют водным раствором перйодата натрия и конъюгируют с белком. 1 табл.

Прочность сорбента определяют по высоте Объемное соотношение хлороформ:бензол 1 составляет 86-94%.

водного столба над сорбентом в колонке с см и см. :9, концентрация боргидрида натрия 1,6 мас.%. Выход сорбента