Способ определения бластных клеток в смешанных клеточных популяциях на гистологическом препарате Советский патент 1985 года по МПК G01N33/48 A61B10/00 

1

Изобретение относится к гематологии и онкологии и может быть использовано для быстрого обнаружения в смешанных клеточных популяциях незрелых лейкозных и опухолевых клеток, дпя одновременной оценки их функцио- налькой активности, в том числе на фоне цитостатической терапии, а также в экспериментальной гематологии, онкологии и цитологии при изучении разных аспектов роста, дифференцировки и созревания лейкозных и опухолевых эл ементов.

, Целью изобретения является повышение точности способа.

Способ осуществляют следующим образом.

Препараты клеток крови, костного мозга и лимфатических узлов готовят стандартным способом во время взятия крови, стернальной пунк1дии или пункции лимфатического узла, В то же время для получения клеТок из плевральной и ас1щтической жидкости последние предварительно центрифугируют при 1000 об/мин в течение 1U - 15 мин. Затем надосадок удаляют, а из осадка делают .мазки. Все препараты высушивают на воздухе, а затем в течение 15 мин фиксируют в смеси метиловьй спирт уксусная кислота, приготовленной в соотношении 3:1. После повторного высушивания на воздухе их, в зависимости от толщины мазка, помещают на 10-20 мин в 2 н. раствор муравьиной кислоты. По окончании инкубации стекла ополаскивают дистиллированной воой и после высушивания окрашивают 50%-ным раствором азотно-кислого серебра согласно стандартной методике. После окрашивания серебром препараты тщательно ополаскивают дистиллированной водой, высушивают на воздухе и в течение 10 - 20 с подкрашивают 1%-ным раствором Гимзы, приготовленным на фосфатном буфере с рН 6,8.

В приготовленных препаратах в нализируемых клетках под иммерсионным объективом оценивают количесто, величину и форму ядрьш1ек, а акже содержание в последних аргентоильных гранул, принимая во внимание, что одним из важнейших признаов незрелости клеток является налиие в них гипертрофированных ядрыек с активным синтезом рибосомной

017202

рНК ( 10-15 гранул на ядрьшгко) и/или увеличение общего количества ядрьш1ек в клетке. Окончательную идентификацию клеток осуществляют 5 с учетом величины и формы ядра, со- отношения ядра и цитоплазмы, а также характера окрашивания хроматина.

Пример . Больной П.Н., 48 лет, поступил в клинику 22 января 1982 года. Направлен с диагнозом цирроза печени с явлениями гиперспленизма. Поводом для госпитализаций послунсила нарастающая слабость, связанная с анемизацией. Из анамне5 за было известно, что ранее больной страдал болезнью Крона и оперирован по поводу- ректального свища. В 1979 году перенес гепатит. Изменения в крови выявлены в конце декабря.

когда содержание эритроцитов равнялось 2,4 X 10 /л, гемоглобина 85 г/л, тромбоцитов 4 х , ретикулоцитов 0,2%, лейкоцитов 3,4 X 10/л, базофилов 1%, метамиелоцитов 2%, п/я нейтрофилов 6%, с/я нейтрофилов 6%, л имфоцитов 81% и моноцитов 4%. В миелограмме от 16.ХП-82 г. содержание бластных элементов, не увеличено (3%), промиелоцитов 1,4%, миелоцитов 19%, метамиелоцитов 5,8%, п/я нейтрофилов 29,2%, с/я нейтрофилов 23%, базофилов 1,6%, лимфоцитов 10,4%, моноцитов 3,2%, эритроидных элементов 3%, митозов

35 0,4%. Мегакариоциты не встретились. При осмотре в клинике состояние относительно удовлетворительное, бледность кожных покровов и слизис.тьк. Явлений геморрагического диате40 за, увеличения лимфоузлов, печени и селезенки не обнаружено.В анализах . крови и костного мозга помимо стойкой анемии, тромбоцитопении и гранулоцитопении повторно регистрировалось увеличение бластных элементов до 9 - 20%, что поставшю лечащих врачей перед необходимостью проведения дифференциального диагноза между гипопластической анемией с избытком бластов и острым лейкозом.

Избирательное окрашивание клеток крови с помощью азотно-кислого серебра показало, что в этом наблюдении содержание бластных элементов 5 достигало 32%, что позволило остановиться на диагнозе малопроцентной формы острого лейкоза и ограничиться в клинике назначением симптоматичес31201720 4

кой терапии и гемотрасфузиями. Боль- тов 5,3 х 10/л, бластов 49%, промиеной находится под наблюдением ге-лоцитов 2%, миелоцитов 1%, метамиеломатологического диспансера. В пос-цитов 1%, п/я нейтрофилов 7%,

леднем анализе крови эритроцитов нейтрофилов 11%, лимфоцитов 22%, мо1,9 X , гемоглобина, 60 г/л,.5 ноцитов 7%. Наблюдение за больным

тромбоцитов 15 X 10 /л, лейкоци-продолжается.

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЛАСТНЫХ КЛЕТОК В СМЕШАННЫХ КЛЕТОЧНЫХ ПОПУЛЯЦИЯХ НА ГИСТОЛОгаЧЕСКОМ ПРЕПАРАТЕ путем их окрашивания и анализа состояния ядрышек в клетка :, отличающийся тем, что, с целью повьш1ения точности способа, в популяции определяют количество клеток с усиленно аргентофильными ядрышками и их соотношение с общим числом клеток, при этом препарат перед окрашиванием обрабатывают в 2н, растворе муравьиной кислоты в течение 10-20 мин, а в качестве красителя используют 50 %-ньш раствор азотно-кислого серебра. (Л с §. гЗ (N9