Способ определения пармидина и его метаболитов в биологических жидкостях Советский патент 1986 года по МПК G01N30/00 G01N33/15 

Изобретение относится к медицине, а именно к способам анализа лекарственных препаратов в биологических жидкостях, и может быть использовано при определении концентрации парми- дина и его метаболитов в крови и моч человека для оптимизации фармакотерапии при фармакокинетических исследованиях.

Цель изобретения - повьшение точ ности и чувствительности способа за счет проведения жидкостной хроматографии высокого давления в обратной фазе и э}1юции смесью метилового спирта, воды и уксусной кислоты.

Способ осуществляют следующим образом.

Образец биологической жидкости (сыворотки крови, мочи)5 содержащий пармидин (пиридинолкарбамат, анги- НИН, продектин-0,О -диметилкарбамо- шт-(2,6-диоксиметилен) пиридин, эффективный противосклеротический препарат) и 4 его метаболита - 1-дезме I тилпармидин, (N-мстил, 0,0 -дикарба- мош1-2,6-диоксиметилен пиридин), II- дидезметилпармидин (0,0 -дикарбамо- Ш1-)2,6-диоксиметилен(пиридин), III- О-метилкарбамоил-(2,6-диоксиметй- лен)шфидин и IV - (2,6-диоксиметилен) пиридин, подвергают экстракции хлороформом при рН 8. Затем экстракт упаривают, остаток растворяют в элюенте и вводят пробу полученного раствора в хроматографическую колонк длиной 15 - 25 см, заполненную нит- обратнофазным сорбентом,. например, Сферисорб 5SCN. Детектирование ведут с помощью переменно-волнового спектрофотометра с проточной ячейкой объемом 8 мкл. Времена удер- ямвания препарата и его метаболитов различны, что позволяет проводить юс качественное и количественное определение , например, при условиях хроматографирования: колонка Сферисорб 5SCN 25 см X А,6 мм, подвижная фаза - метиловьй спирт, вода, ледяная уксусная кислота в соотношении

(«-10): (86-88) : (3,4-3,5) по объему при скорости элюирования 1,8 мл/мин. Времена удерживания полученных пиков препарата и его метаболитов соответственно равнялись 1-7,8 мин, II 7,, t мин, III - 3,72 мин, IV

6,,36 мин, V - 4,4 мин. На хроматограм- Mft, полученной в результате исследования сыворотки крови и мочи челове5

5

0

0

0

5

0

5

ка, в этих условиях нет пиков эндогенных веществ в интервале 3-10 мин. Детектирование выходящих из колонки разделенных компонентов смеси осуществляют по поглощению УФ света с максимумом при длине волны 260-264 нм, при котором все анализируемые компоненты разделяемой смеси (I-V) характеризуются сильным поглощением. Такой метод детектирования гарантиру-- ет высокую чувствительность анализа. Содержание препарата и его метаболитов рассчитьшают по калибровочным графикам обычными способами. Минимально детектируемое количество ве- щества в пробе составляло 5 нг. Пло- ш;адь под хроматографическими пиками могут ( определять( с помощью электронного интегратора, а также Графическим методом треугольников. Показана линейная зависимость сигнала детектора от концентрации анализируе- мьпс веществ (I-V) в большом диапазоне концентраций от 5 нг до 20 мкг в 1 мл биологической пробы. Коэффициент вариации при параллельных анализах одинаковых проб 4,8%.

Пример 1. Определение концентрации пар;мидина и четырех его метаболитов в моче больного Н. после приема внутрь 0,5 г препарата.

К пробе мочи, собранной за 6 ч после приема пармидина, объемом 0,2 мл прибавляют 0,1 мл фосфатного буфера рН 8 и 3 мл хлороформа. Экстрагируют однократно при встряхивании в тенение 20 мин, затем хлороформенный слой от-: деляют, растворитель упаривают в токе азота при 45 С. Сухой остаток раствр- «ряют в 100 мл элюата и 50 мкл полученного раствора через мерную петлю инжектора вводят в хроматографическую колонку. Условия разделения: колонка Сферисорб 5SCN, элюент CHjOHsHjO: :СН,СООН (9:87,5:3,5 об.%). Детектирование проводилось на проточном пе- ременноволновом спектрофотометре Аптеке 165 при 262 нм, (объем проточной ячейки 8 мкл, диапазон измерения 0,05 А на всю шкалу). Расчет хро- матогргшм проводили по калибровочным графикам, на оси координат которых откладывали высоту хроматографичес- кого пика, а на оси абсцисс - концентрацию вещества в стандартных растворах . При расчете было найдено следующее содержание пармидина в моче

31

15,3 мкг/мл, метаболита II - 21,4 мкг/ /мл, III - 1,2 мкг/мл, IV - 0,8 мкг/мл.

П р и м е р 2. Определение концентрации пармидина и его метаболитов в сыворотке крови больного Н. после приема внутрь 1 г препарата.

Образец сыворотки крови больного, отобранной через 2 ч после приема внутрь 1 г препарата, подвергают экстракционной процедуре и последующему хроматографическому разделению аналогично примеру 1. При этом концентрация пармидина равна 2,3 мкг/мл, метаболита II - 2,8 мкг/мл, III - 0,8 мкг/мл, IV - 0,1 мкг/мл. Определение концентраций проводили также с помощью калибровочного графш а.

Редактор Н.Данкулич Заказ 3083/46

Составитель Н.Гуляева

Техред В.Кадар Корректор М.Самборская

Тираж 778Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

.Производственно-полиграфическое предприятие, г.Ужгород, ул.Проектная, 4.

366.4

Форму ли изобретения

Способ определения, пармидина и его метаболитов в биологических жидкостях путем экстракции, разделения жидкостной хроматографией высокого давления, элюции и спектрофотометрирования, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и чувствительности способа, хроматографирова- ние проводят в обратной фазе, в качестве элюента используют смесь мети- лового спирта, воды и уксусной кислоты в об ьемном соотношении (8-10):

:(86-88):(3,4-3,5), а спектрофотомет- рирование проводят при длине волны 260-264 нм.

Изобретение относится к сп осо- бам анализа лекарственных препаратов в биологических жидкостях. Цель изобретения - повышение точности и чувствительности способа за счет проведения жидкостной хроматографии высокого давления в обратной фазе и элю- ции смесью метилового спирта, воды и уксусной кислоты в объемном соотношении (8-10):(86:88):(3,4-3,5). Спектрофотометрирование проводят при длине волны 260-264 им. ISP о5 Р5 00 а О5