Способ определения антиокислительной активности веществ Советский патент 1986 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к области медицины, а именно к биологической и медицинской химии, к способам опре- деления антиокислительной ак ивнос- ти различных фармакологических препаратов.

Целью изобретения является ускорение и упрощение способа за счет уменьшения числа операций.

Способ осуществляется следующим образом.

Исследование ведут в присутствии ионов Mg непосредственно в кювете спектрофотометра путем непрерьш- ного измерения оптической плотности при 23 или Л 270 нм.

Вьщеляют фракцию мембран эндоплаз матического ретикулума (микросо- мальную фракцию) печени: печень кры- Ьы перфузируют охлажденньм раствором КС1 (1,15%; 0-4°С}, гомогенизируют в том же растворе в соотношении печень: раствор КС1 1:3 (по весу/, центрифугируют гомогенат при 10000 g 30 мин, полученный суперна- тант центрифугируют при 105000 g 60 мин, В опытную кювету регистрирую щего спектрофотометра объемом 2,5 мл содержащую полученную микросомальную фракцию (0,1 мг/мл микросомального белка) , FeSOi, (2-3 мкМ), MgSO (5 мМ), Т1рис-НС1 буфер (50 ; рН 7,4 при ) и NaCl 100 ьй добавляют НАДФН до конечной концентХимическое соединение

Ионол (2,6-ди-трет-бутил- 4-металфенол)10

Аминазин Дипразин Димедрол 2-Этил-6-метил-3-оксипиридин

Предлагаемым способом исследованы и другие химические соединения: лекарственные средства, производные .оксипиридина.

395951(

рации 50 мкМ. Производят измерение оптической плот ности при А 232 или при А 270 нм. против кюветы сравнения, содержащей те же ком- j поненты, что и опытная кювета,

за исключением НАДФН, То же количество НАДФН, которое д обавляли в опытную кювету, одновременно добавляют в кювету с дистиллированной водой.

10

стоящую цугом за кюветой сравнения.

По снижению оптической плотности в присутствии испытуемого вещества определяют его антиокислительную активность.

Пример 1. На фиг. 1 показан график регистрации кинетики ферментативного НАДФН - зависимого перекис- ного окисления в микросомальной фракции печени предлагаемым способом,

где 1 - оптическая плотность при А 232 нм; 2 - оптическая плот- ность при /i 270 нм; на фиг,2 - то же, с помощью способа с тлобарбитуро- вой кислотой, где оптическая плотность при Л 535 нм (стрелками отечен момент добавки НАДФН).

П р и м е р 2. Изучают химических соединений, приведенных в таблице, на скорость ферментативного НАДФН-зависимого перекисного окисления липидов в микросомальной фракции печени с помощью предложенного способа.

Концентрация химического соединения, при которой наблюдается 50%-ное инги- бирование скорости липопере- окисления, М ,

-ь

6 МО

-S

5 10 10- 5-10

55 Форму л а изобретения

Способ определения антиокислитель- ной активности веществ путем прове-

дения реакции перекисного окисления липидов в микросомах ткани и определения оптической плотности инкубационной смеси в присутствии и без добавления испытуемого вещества, отличающийся тем, что, с целью ускорения и упрощения способ за счет уменьгаения числа операций.

реакцию перекисного окисления липи- .дов проводят в присутствии ионов магния, измеряют оптическую плотность при 232 или 270 нм и по снижению оптической плотности в присутствии испытуемого вещества определяют его аитиокислительную активность.

Изобретение относится к биологической и медицинской химии. Цель изобретения - ускорение и упрощение способа за счет уменьшения числа операций. В кювете спектрофотометра в присутствии ионов Mg; производят непрерьшное измерение оптической плотности при ( 232 или 270 нм. Выделяют микросомальную фракцию печени и помещают ее в опытную кювету спектрофотометра, в которую добавляют FeSO , MgSOj , трис-HCl буфер, NaCl, НАДФН. Измеряют оптическую плотность при А 232 нм или / 270 нм против кюветы сравнения, содержащей, те же компоненты, что и опытная кювета, за исключением НАДФН. То же количество НАДФН, которое добавляли в опытную кювету, одновременно добавляют в кювету с дистиллированной водой. По снижению оптической плотности в присутствии испытуемого вещества .определяют его антиокислительную активность. 2 фиг. 1 табл. (Л 10 со о сд со ел

О5 Ю 15

Время после peaKmftf,Mi4H Фиг.1

О5Ю /5

BpfMft после мчала реак14ии мин

Ф{/е.2

Составитель М.Позйяк Редактор Л.Гратшшо Техред Н.БоНкало

Заказ 3389/43 Тираж 778Подписное

: ВНИШИ Государственного комитета СССР : . по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г.Ужгород, ул.Проектная,4

Корректор Е.Рошко