Способ определения иммунных комплексов Советский патент 1986 года по МПК A61K39/00 

«

изобретение относится к биологии и может найти применения в клинической иммунологии, Б ooo6eifflocTH при ;диагностзше шиму.нокомплексных болезней. ,.

Целью изобретения является повышение точности определения.Способ поясняется следующими примерами.

Пример 1. Приготовление протеина А па носителе..Носителем для протеина А могут служить частицы дер матола, латекса, эритроциты барана. Нагрузку протеина А на носитель производят из расчета 62 мкг белка протеина А на 1 г дерматола, последний используют в виде взвеси в 1 мл бо- ратного буфера рН 8,4. Сьшоротку крови больного хроническим неспецифическим заболеванием легких разводят дистиллированной водой 1:5. При подкис- лении субстрата до рН 4,5-5,0 мономерные иммуноглобулины остаются в надосадке, Отделение их от фракции, в которой предполагается наличие иммунных комплексов, производят центрифугированием в течение 30 мин при 2000 об/мин, и однократном отмы- ,вании осадков дистиллированной водой при рН 7,0. После этого осадок растворяют в исходном объеме физиологического раствора и готовят ряд последовательных разведений, начиная с. 1:2 до 1:256.

Реакцию агглютинации ставят при комнатной температуре на стекле, К одной капле 0,05 мл каждого разведения добавляется одна капля (0505мл) взвеси носителя с протеином А.. Стекло-покачивают на руках 5 мин, после чего производят учет реакции под микроскопом (объектив 8 окуляр 10х) О наличии иммунного комплекса в субстрате свидетельствует агглютинация частШд носителя с протеином А. Чувствительность метода - 2 мкг белка .комплекса в 2-мл субстрата. В результате проведенных испытан:ий в сыворотке крови больного хроническим неспецифическим заболеванием легких получена реакция агглютинации частиц носителя с протеином А, что свидетельствует о наличии в испытуемом субстрате иммунных комплексов.

И р и м е р 2. Сьгооротка крови больного системной красной волчанкой по описанной методике исследовали на наличие иммунных комплексов

437312

с помощью протеин а А на носителе, в этом образце сьгооротки также получены положительные результаты - констатировано наличие агглютированных

5 .стиц протеина А на носителе. В параллельных опытах эти же образцы сывороток бьши исследованы методом фиксации комплемента, взятого в качестве, прототипа. При анализе сыво10 роток этим методом на наличие иммунных комплексов получены отрицатель-. ные результаты.

Таким образом, в о боих примерах обнарЗ( жили иммунные комплексы при

tS помощр предлагаемого способа, при этом используемый для сравнения способ-прототип дал отрицательные результаты,,

Использование предлагаемого спо- 20 соба позволяет расширить возможности диагностики заболеваний, связанных с образованием иммунных комплексов, не сорбирующих комплемент.

При таких заболеваниях, как хро25 ничеСБ:ие неспецифические заболевания легких, холера, брюшной тиф, |Колиэнтерит, решающую роль играет иммуноглобулин класса А, не обладающий способностью сорбировать компле30 мент. Заболевания вирусной этиологии также сопровождаются выработкой иммуноглобулина класса А.

достаточно информативным методом для из гчения патогенеза заj,j . болевани, связанных с наличием им- мунньк комплексов в сьшоротке крови, является только метод, позволяющий определить иммунные комплексы, со-. держающе антитела разных классов,

40 независимо от их величины и способности сорбировать комплемент.

Предлагаемьй способ можно использовать для определения иммунных комп- 45 лексов общепринятую реакцию агглютиг нации, Ранее в иммунологии эта реакция использовалась только в целях определения антигена или антител.

50 Изобрете.ние позволяет впервые использовать реакцию агглютинации для индикации И1чмунных комплексов. Кроме того, обеспечивается доступность применения способа в клинических лабора55 ториях с целью диагностики, так как он не требует сложного оборудования и основан на использовании отечественных реактивов. При этом есть воз312437314

можность исключить применение для связанное с техническими трудностями определения иммунных комплексов ра- получения препарата и небезопасностью диоактивного препарата протеина А, его использования.