Способ количественного определения гормонов в биосубстратах Советский патент 1986 года по МПК G01N33/48 G01N21/76 G01N33/74 

Изобретение относится к медицине, частности к способам количественого определения гормонов в биологиеских субстратах, например в сывоотке крови, и может быть ислользо- ано для оценки гормонального лрофи- я человека и животных.

Целью изобретения является упроение исследования путем измерения нтенсивности хемилюминесценции субстрата до и после введения в него антител, и по разности между измеренными значениями определяют количество гормона,

На фиг.1 и 2 представлены калибровочные кривые для определения эст- радиола и фолликулостимулирующего гормонов.

Пример.. Женщина К., 22 лет. Практически здорова, двадцатый день менструального цикла. Проведено определение содержания эстрадиола в сыворотке крови. Натощак взято из Эены локтевого сгиба 3 мЛ крови и путем центрифугирования при 3000 об./мин в течение 1 5 мин получают сыворотку. Для исследования необходимо две порции сыворотки по 0,3 мл.

К одной порции сыворотки {0,3мл) добавляют 0,1 мл дистиллированной воды и Измеряют интенсивность хемилюминесценции 0,3 мл этого субстрата. Затем в другую порцию сыворотки (0,3 мл) вводят 0,1 мл раствора антител к эстрадиолу с титром антител 1:10000 в дистиллированной воде, ин- кубируют эту смесь в течение 2 ч яри 37 С и добавляют к ней вещество, ведущее к агрегации комплексов эстра- диол - антитело - активированный уголь в Количестве 15 мг. Далее вновь инкубируют смесь в течение 30 мин при 20°С, вьщеляют агрегированные комп- Лексы эстрадиол - антитело посредством центрифугирования в течение 15 мин при 2000-2500 об/мин и измеря- ют интенсивность хемилюминесценции 0,3 мл супернатанта - субстрата, не содержащего эти комплексы.

Дополнительно строят калибровочную кривую. Для этого измеряют интен

сивность хемилюминесценции серии стандартных субстратов, представляющих собой смеси 0,3 мл стандартного источника свечения, например липазы, и 0,1 мл раствора эстраДиола в этаноле в концентрациях: 0; 35; 75; 300;

600; 900; 1200; 1500: 1 800; 2100 пг/мл. Для исследования берут 0,3 мл смесей. По разностям между полученными значениями интенсивности хемилюминесценции этих смесей строят калибровочную кривую (фиг,1).

Разность между измеренными значениями интенсивности хемилюминесценции исследуемой сыворотки и супернатанта составила 6,9 мВ. При сопоставлении с калибровочными данными (фиг.1) эта разница соответствует содержанию эстрадиола в сыворотке крови, равному 340 пг/мл.

П р и м е р 2. Больная С., 32 года. Диагноз: аменорея. Произведено определение содержания фолликулостимулирующего гормона в сыворотке крови аналогично примеру 1, разность между значениями интенсивности хемилюминесценции исследуемой сыворотки и супернатанта составила 1,8 мВ. При сопоставлении с предварительно полученными для фолликулостимулирующего гормона калибровочными данными (фиг.2) эта разница соответствует 7,6.пг/мл.

Формула изобретения

Способ количественного определения гормонов в биосубстратах путем добавления к исследуемому субстрату антител, вьщеления комплекса гормон- антитело, инкубирования, центрифугирования, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, антитела вводят в избыточном количестве, а количество гормона определяют методом хемилюминесценции по разности между интенсивностью свечения до и после введения антител.

I

I

I

I

-I

I

I

mV

11 W

9 8 7 б

5

гюо

ffa/tuSpoSovHOf HpuSaa ff/fg Ho uvecrrfSetfffOio onpeffe/ Mu jCfrrpaJu0/7a

Фа a. I

i

A

51020 ft-Q 60 80 100 120 ПО 160 J80 200 тиг//гг1 f(a/7u5p(fffo f cffl ffpttffcfff ffa/iuvec/r7 ef f/oea о/ ре е/те/ ия 0a/r/TUffyy7ac/frt/f4y - jjupyfoufeeo e op MO нееФие. 2

Редактор М.Келемеш

Составитель Л.Покрышкина

Техред И.ГайдошКорректор И.Муска

Заказ 4АОЗ./39Тираж 778Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб,, д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

A

Изобретение относится к способам количественного определения гормонов в биосубстратах. Цель изобретения - упрощение способа. Получают от обследуемого две порции сыворотки. К одной порции сьгаоротки добавляют дистиллированную воду. Измеряют интенсивность хемилюминесценции этого субстрата. В другую порцию сыворотки вводят 0,1 мл раствора антител к определяемому гормону с титром ан- ,тител 1:10000. Инкубируют эту смесь. Добавляют к ней вещество, ведущее к агрегации комплексов. Вновь инкубируют смесь и центрифугируют ее. Измеряют интенсивнос-ть хемилкминосценции супернатанта - субстрата, не содержащего эти комплексы. Строят калибровочную кривую. По разности между интенсивностью свечения до и после введения антител определяют количество гормона. 2 ил. I (Л