Способ количественного определения производных кумарина Советский патент 1986 года по МПК G01N33/48 

1255922

Изобретение относится к способу определения физиологически активных веществ кумаринового ряда, а именно декурсинола и обтусифола формулы соответственно

НО

о

о

2

ропипетки наносят на стартовую линию (1,5 см от нижнего края) ллас- тины силуфол ( см). После улетучивания растворителя в местах на- , несения проб, хроматограмну помещают в предварительно (10-15 мин) (I) насыщенную камеру с системой растворителей бензол - ацетон в соотношении 0:3. Нижний край пластины пог- 10 ружают в систему растворителей примерно на 1 см так, чтобы уровень растворителя Ьыл ниже стартовой ли- (11) НИИ. Когда фронт растворителя на- 0ходится на расстоянии 0,5 см от

)5 верхнего края пластины, ее извлекают из камеры и отмечают линию фронта. Хроматограмму сушат в вытяжном шкафу в течение 5-10 мин, затем обна- в плазме крови и различных тканях. руживают пятна, рассматривая хромаДекурсинол-З-окси-З, 4-дигидропира-20 тограмму в УФ-свете. При этом иссле- но-5, 6:6,7-кумарин (О. С , дуемые соединения проявляются в ви- т.пл. 180-181,5 С; 22 - 8,89(с 2,56; хлороформ) и обтусифол- 2-изопропилок- си-6-метокси-бензодиоксано-5, 6:8,725

НзСО-Г

н,с оНзС 1 О , С-ЧхО

он

де ярко-фиолетовых пятен со значениями R j. :1 0,27, а ,55; что позволяет идентифидировать их среди

кумарин (II) , т.пл. 151 - 20 + 57,3° (с 6,5; хлороформ) обладают выраженной противоаритми- ческой активностью (4,5).

Целью изобретения явлпется разработка простого способа определения концентраций декурсинола и обтусифола в биосредах за счет подбора экстра- гейта, хроматографирования и спект- рофотометрирования.

На чертеже изображен калибровочный график, поя сняющий предлагаемый способ.

Пример. Крысам внутривенно вводят декурсинол (1) и обтусифол (II) в дозе 10,0 и 1,0 мг/кг, соответственно, и через 15, 30, 60, 120, 240, 360 и 420 мин отбирают пробы крови, почки, печень легкие, мозг, сердце и в них определяют содержания исследуемых веществ:

1.5,0 мл крови помещают в пробирку и центрифугируют в течение 15- 20 мин при 3000 об/мин. К 1,0 мл плазмы добавляют 6,0 мл хлороформа и встряхивают в течение 1 ч, затем содержимое переносят в делительную воронку емкостью 10,0 мл, После расслоения снимают нижний хлороформный слой, фильтруют через складчатый бумажный фильтр в пробирку и растворитель упаривают досуха. Остаток растворяют 1,0 мл хлороформа. 50 мкл полученного раствора с помощью мик30

35

40

45

50

55

многочисленных природных соединении, извлекаемых из исследуемых биосред. После этого соответствующие пятна обводят, вырезают и веиества элюиру- ют с пластины в мерную колбу ем- костью 25 мл через складцаи, бумажный фильтр трижды по 5,0 мл хлороформом. Объем доводят до метки хлороформом, перемешивают и оптические плотности растворов измеряю, например, ia спектрофотометре СФ-26 в кювете с толщиной jO см па фоне чис- |того хлороформа при соответствующих длинах волн („ для 1 335 нм, а для П 330 нм), Количественное содержание исследуемых соединений определяют по калиброзочньм графикам,

В табл. 1 преде гавлень результаты определения кондентр;идии декурсинола в плазме крови и тканях крыс после внутривенного и терорального введения,

В табл, 2 приведены результаты определения концентра-гии обтусифола в плазме крови и тканях крыс после внутривенного введения в дозе 1,О мг/Ki .

Формула изобретения

Способ количественного определения производных кумарина в биологических объектах путем экстракции органичес- К.ИМ растворителем, выпаривания, расттограмму в УФ-свете. При этом иссле- дуемые соединения проявляются в ви-

де ярко-фиолетовых пятен со значениями R j. :1 0,27, а ,55; что позволяет идентифидировать их среди

5

0

5

0

5

0

5

многочисленных природных соединении, извлекаемых из исследуемых биосред. После этого соответствующие пятна обводят, вырезают и веиества элюиру- ют с пластины в мерную колбу ем- костью 25 мл через складцаи, бумажный фильтр трижды по 5,0 мл хлороформом. Объем доводят до метки хлороформом, перемешивают и оптические плотности растворов измеряю, например, ia спектрофотометре СФ-26 в кювете с толщиной jO см па фоне чис- |того хлороформа при соответствующих длинах волн („ для 1 335 нм, а для П 330 нм), Количественное содержание исследуемых соединений определяют по калиброзочньм графикам,

В табл. 1 преде гавлень результаты определения кондентр;идии декурсинола в плазме крови и тканях крыс после внутривенного и терорального введения,

В табл, 2 приведены результаты определения концентра-гии обтусифола в плазме крови и тканях крыс после внутривенного введения в дозе 1,О мг/Ki .

Формула изобретения

Способ количественного определения производных кумарина в биологических объектах путем экстракции органичес- К.ИМ растворителем, выпаривания, растворения осадка в органическом растворителе и хроматографирования, о т- личающийся тем, что, с целью определения декурсинола, об- тусифола и упрощения способа в качестве органического растворителя

Плазма

в/в

Плазма

0,72+0,03 0,53+0,020,31+0,0090,18+0,01

Каждые представленные данные являются средним из 11 измерений.

2559224

используют хлороформ, хроматографи- руют в системе растворителей бен- зол - ацетон в соотношении 10:3 с последующим спектрофотометрированием 5 декурсинола и обтусифола при 335 и 330 нм соответственно.

Таблица 1

10

0,93+0,04 0,83+0,02

Таблица 2

Изобретение относится к способам определения производных кумарина. Цель изобретения - упрощение способа. По предлагаемому способу крысам внутривенно вводят производные кумарина. Затем берут, пробу крови. Получают из нее плазму и добавляют к последней хлороформ. Готовят хроматограм- му и помещают ее в систему бензол - ацетон в соотношении 10:3. Хромато- грамму сушат.и рассматривают ее в УФ-свете. Исследуемые соединения проявляются в виде ярко-фиолетовых пятен. Эти пятна вырезают и вещества эл:оируют с пластины в колбу трижды через фильтр с помощью хлороформа. Объем ДОВОДЯТ до метки хлороформом и перемешивают. Оптические плотности растворов измеряют на спектрофотометре при 335 и 330 нм соответственно .Количественное содержание исследуемых соединений определяют по калибровоч- нь1м графикам. 2 табл., I ил. (/)