Способ электрофоретического разделения лейкоцитов крови Советский патент 1986 года по МПК G01N33/48 G01N33/49 

Изобретение относится к медицине, а именно к фракционированию клеток крови.

Цель изобретения - повышение числа и чистоты клеточных фракций за счет подачи разделяемой смеси клеток и рабочего раствора в разделительную камеру прибора снизу вверх и использования определенного состава рабочего раствора.

Пример 1. 8 мл крови, взятой из вены, помещают в пробирку, дио которой покрыто гепарином, разведенным, имидазольным буферным раствором, содержащим, мас.%: имидазол 0,ООГ, сахароза 8,3J глюкоза 0,191, дистиллированная вЬда до 100. Соотношение гепарин : имидазольный буферный раствор 1:10. В пробирку добавляют 0,5 мл 10%-ного раствора желатина в 5%-ном растворе сахарозы. Смесь перемешивают и отстаивают в течение 30 мин при .Поеле отстаивания светлый слой плазмы с лейкоцитами отсасывают, не задевая эритроцитов, в отдельную пробирку. К .надосадочной жидкости добавляют 3%ный раствор сахарозы в соотношении 3:1, Смесь перемешивают в течение 30 с. Гемолизированные эритроциты трехкратно отмывают имидазольным буферным раствором. После отмывания эритроцитов клеточную взвесь разводят этим же буфером до тех пор, пока концентрация клеток не составит 2010 в 1 мл. Разведенная таким образом разделяемая смесь клеток непрерывно подается в разделительную камеру прибора для препаративного электрофореза под чавлением снизу вверх при В со скоростью протока имидазольного буферного раствора и разделяемой смеси .клеток 4 см/мин

При этом используют прибор для электрофореза клеток, содержащий вертикальную разделительную камеру с размерами 50ТО0,1 см, смежные с ней две электродные камеры, блок выведения, укрепленный в верхней части разделительной камеры и содержащий 105 каналов для выведения разделенных фракций. Рабочие растворы подаются в камеры при помощи генераторов пневматического давления, которые выдавливают рабочие растворы из герметичных сосудов. .

Избыточное давление рабочего раствора в разделительной камере 2050 КПа, напряжение, приложенное к разделительной камере 400-600 В.

Скорость протока рабочего раствора определяется следующим образом.

Герметичные сосуды с рабочими растворами имеют мерные деления ценой 100 мл. Визуально определяются изменение объема рабочего раствора в герметичном сосуде за известное время. При этом на протяжении всего времени измерения давление в указанном сосуде контролируют по образцовому манометру, отклонение первоначально установленного давления за

все время измерения составляет 0,5%. Затем вычисляют скорость протока рабочего раствора.

Измеряют температуру разделительной камеры.

Для Подготовки к работе с клетками крови камеры прибора промываются 2-3 л дистиллированной воды. Затем разделительную камеру на 30 мин заполняют 2%-ным раствором человеческого альбумина. Затем под давлением 50 КПа через разделительную камеру прокачивается такое же количество имидазольного рабочего раствора.

После этого камеры заполняются рабочим раствором. Через отверстие в нижней части разделительной камеры под небольшим избыточным давлением

подается разделяемая смесь.

После отклонения в электростатическом поле лейкоциты разделяются на 35 фракций (из них лимфоциты в 25 фракциях) в соответствии со своей электрофоретической подвюкностью.

Пример 2. Аналогичен примеру 1. Содержание имидазола в буферном растворе 0,004 мас.%. После отклонения в электростатическом поле лейкоциты разделяются на 35 фракций.

Положительный эффект изобретения заключается в увеличении числа получаемых фракций клеток от 22 до 35.

Формула изобретения

Способ электрофоретического разделения лейкоцитов крови, включаниций ста-билизацию взятой из вены крови, выделение из нее разделяемой смеси клеток и .подачу этой смеси с постоянной скоростью в вертикальную раз312623754 ..

делительную камеру, заполненную ра-этом рабочий раствор состоит из

бочим раствором, отличающий-следующих компонентов, мас,%: с я тем, что, с целью повьшенияИмидазол О,001-0,00

числа и чистоты клеточных фракций, Сахйроза Не менее 8,3 подачу разделяемой смеси клеток и s Глюкоза Не менее 0,191 рабочего раствора осуществляют снизу Дистиллированвверх со скоростью 1-5 см/мин, при ная вода До 100

Изобретение относится к способам электрофоретического разделения клеток крови. Цель изобретения - повышение числа и чистоты клеточных функций. 8 мл крови помещают в пробирку гепарином и имидазольным буферным раствором. К содержимому пробирки добавляют 0,5 мл 10%-ного раствора желатины в 5%-ном растворе сахарозы. Смесь перемешивают к отстаивают. Светлый слой плазмы отсасывают. Надосадочную жидкость смешивают с раствором сахарозы. Гемолизированные эритроциты отмывают имидазольным буферным раствором,Разведенную разделяемую смесь клеток io подают в разделительную камеру прибора снизу вверх со скоростью 15 см/мин. БСКБ