Способ дифференциальной диагностики псориатического и ревматоидного артрита Советский патент 1993 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, точнее к ревматологии.

Целью изобретения является повышение точности способа.

Способ осуществляют следующим образом.

Для исследования СРП, нерастворимых белков сыворотки крови (НБСК) и ЦИК получают сыворотку крови, центрифугируя свернувшуюся венозную кровь. Определение СРП осуществляют методом кольцепре- ципитации в стеклянных капиллярах: капилляр опускают концом во флакон с антисывороткой, набирая его на 1/3 длины капилляра (3 см), протирают ваткой и набирают тем же концом исследуемую сыворотку на 1/3 длины. Покачивают капилляр, перемешивая реагенты и погружают в пластилин свободный конец капилляра так, чтобы уровень жидкости в ней был выше пластилина на 10 мм. Учет реакции проводят через 24 часа. Выпадение преципитата в капилляре

свидетельствует о наличии СРП в сыворотке .больного, оценивают в мм.

Определение ЦИК проводят методом ПЭГ-приципитации, основанном на селективной преципитации комплексов антиген- антитело (АГ-АТ) в 3,75 % ПЭГ с последующим фотометрическим определением плотности преципитата. Для проведения реакции готовят два раствора: раствор № 1 - 0,1 М боратный буфер РН - 8,4 (3.410 г борной кислоты и 4,275 г буры растворяют в дистиллированной воде и доводят объем до 1,0 л); раствор № 2 - 10,0 г ПЭГ - 6000 растворяют в 240,0 мл раствора № 1. Ход реакции: 0,3 мл сыворотки крови вносят в пробирку, добавляют 0,6 мл раствора № 1, перемешивают и переносят в пробирку, добавляют 0,6 мл раствора N 1, перемешивают и переносят по 0,3 мл в 2 пробирки. В одну из них приливают 2,7 мл раствора № 1 (контроль), в другую - 2.,7 мл раствора Мг 2 (опыт). Содержимое перемешивают и оставляют на 60 мин при комнатной температуре.

00

о

Ј

W

после чего определяют плотность на спектрофотометре СФ-46 в кювете 1 X 1 при длине волны 450 нм. Высчитывают разность показаний оптической плотности между опытом и контролем, результат умножают на 1000 получают количество ЦИК в 100 мл сыворотки крови. За положительный результат принимают значения более 156 единиц.. .

Определение НБСК, основным компонентом которых являются иммуноглобули- ны М и G, ЦИК грубодисперсные белки, проводят исследуя свежую сыворотку крови. К 0,5 мл сыворотки добавляют 4,5 мл дистиллированной воды, через 30 мин измеряют оптическую плотность нефалометри- чески при 400 нм на ФЭК (кювета 10 мм) против воды. Затем добавляют 0,13 мл 1 М NaCI (конечная концентрация 0,025 М), затем еще 0,26 мл этого же раствора (0,072 М), через 10 мин после каждого добавления NaCI учитывают убыль оптической плотности. Величина, на которую уменьшилась плотность после первого добавления NaCI соответствует 1 и 2 фракции НБСК. Фракцию 3 получают после добавления 0,52 мл 1 М NaCI (0,154 М - физиологическая система). Величина, на которую уменьшилась оптическая плотность после третьего добавления соответствует третьей фракции НБСК. При расчете суммы трех фракций НБСК остаточную оптическую плотность не учитывают. Единицы оптической плотности переводят в условные единицы умножением на 1000. За положительный результат принимают значения более 17 ед.

Для определения В-лимфоцитов в функции тимуса исследуют венозную гепарини- зированную кровь: в пробирку с 50 ед. гепарина забирают 2 мл из локтевой вены, перемешивают кровь и выделяют лимфоциты на градиенте плотности фиколл-гипак (Pharmacia Швеция), плотность 1,077, наслаивая на 2 мл фикола 4 мл разведенной 1 : 1 раствором Хенкса крови. Пробирки центрифугируют 40 мин при 1500 об/мин (400), после чего извлекают лимфоциты из интерфазы и отмывают раствором Хенкса 2 раза по 10 мин при 100 об/мин. Концентрацию клеток доводят до 2-4 Х10 /мл средой 199,

Определение В-лимфоцитов проводят методом розеткообразования с эритроцитами барана в системе ЕАС-РОК. Для приготовления ЕАС-комплексов смешивают 1 мл 1 % эритроцитов барана и 1 мл кроличьей гемолитической антисыворотки против эритроцитов барана в суббагглютинирую- ш,ем разведении, Смесь инкубируют 40 мин при 37° С, осторожно встряхивая каждые 10

мин. После чего эритроциты 3 раза отмывают раствором Хенкса при 1500 об/мин 10 мин, Супернатант отбрасывают, а к осадку добавляют первоначальный объем раствора

Хенкса и равный объем мышиной сыворотки, содержащей комплемент в разведении 1 : 10. Смесь инкубируют при 37° С в течение 30 мин, вновь отмывают 3 раза раствором Хенкса готовят 0,5 .% суспензию эритроцитов. Далее к 0,1 мл взвеси лимфоцитов добавляют 0,1 мл сенсибилизированных эритроцитов (соотношение эритроцитов к лимфоцитам 20 : 17) инкубируют 45 мин при 37° С, после чего 30 мин в холодильнике и

производят подсчет лимфоцитов, присоединивших 3 и более эритроцитов. Результат выражают в %.. За положительный результат принимают значения выше 12,7 %.

Определение функции тимуса проводят

после выделения лимфоцитов как описано выше. В пробирку № 1 и № 2 наливают по 0,2 мл 2 X 10 суспензии лимфоцитов, добавляют 0,2 мл 0,5 % взвеси эритроцитов барана, центрифугируют 5 мин при 1000 об/мин,

затем пробирку № 1 - тотальные Е-РОК - помещают в холодильник на 18ч, а пробирку № 2 - комплексные Е-РОК - в термостат при 37° С на 1,5 ч, после чего суспендируют энергичным встряхиванием до получения

гомогенной взвеси, осаждают при 1000 об/мин - 5 мин и инкубируют 18 часов в холодильнике 4° С. Подсчет Е-РОК производят под микроскопом как и определении В-РОК. Вычисляют отношение Е-тотальных

и Е-комплексным и при снижении отношения количества лимфоцитов по сравнению с нормой определяют снижение функции тимуса. А при повышении отношения и снижения количества лимфоцитов несущих

и не несущих Е-рецептор определяют повышенную функцию тимуса. Формула для расчетафункции тимуса:

Е - тотальная .. ссА Е- комплексная Х 66- снижение ФУ™

ции тимуса принимают при значении менее 0,75.

Полученные значения 5 параметров подставляют в формулу:

X 0,944 XAi + 0,013 X А2 + 0,083 X X Аз-0,046 X А4-0,22 X As-3,41,

где AI - уровень СРП (мм) д2 - уровень ЦИК (усл. ед.)

Аз - уровень В-лимфоцитов (%) А4 - уровень НБСК (усл. ед.) AS функция тимуса

ь 0,944. + 0.013, + 0.083, - 0,046, - 0,22, - 3,41 - выявленные коэффициенты соответственно к АЬ А2. АЗ, А4, AS и при .значении X менее 0 диагностируется ПА. а при значении X более 0 диагностируется РА.

Способ иллюстрируется следующим образом.

Пример 1. Больная К., 40 лет. страдает полиартритом в течение 6 месяцев. Показатели иммунной системы: СРП 1 мм; ЦИК 79 ед,; В-лимфоциты - 3 %; НБСК - 10 ед.; функция тимуса - 2,16. Подставка значения показателей в формулу получаем:

X 0,944 X 1 + 0,013 X 78 + 0,083X ХЗ-0,046Х 10-0,22 X 2,16-3,41

Получают значение X - 2,13, что указывает, на принадлежность больной к группе больных ПА. Из анамнеза выявлено, что больная в течение 12 лет страдает кожными проявлениями псориаза, что подтверждено наличием псориатических бляшек.

Пример 2. Больная Н., 68 лет, страдает полиартритом в течение 3 лет, Показатели иммунной системы: СРП 4 мм; ЦИК 206 ед.; В-лимфоциты 18 %; НБСК 29,5 ед.; функция тимуса 0,335. Используя формулу получаем:

X 0,944 X 4 + 0,013 X 206 + 0,083 X X 18 - 0,046 X 29,5 - 0,22 X 0,355 - 3,41

X +3,1, что свидетельствует о наличии у больной диагноза РА.

Данные клинического обследования больной (утренняя скованность, симметрич0

5

0

5

0

ный артрит проксимальных межфаланговых суставов), а также наличие ревматоидного фактора в крови в титре 1 /64 подтверждают правильность расчетов по формуле.

Предложенный способ дифференциальной диагностики применен у 10 больных, в 100 % случаев было распознано то или иное заболевание, т. е. ПА или РА. По сравнению с прототипом увеличивается точность способа при осуществлении дифференциальной диагностики ПА и РА.

Формула изобретения

Способ дифференциальной диагностики псориатического и ревматоидного артрита, включающий забор крови, определение циркулирующих иммунных комплексов, уровень С-реактивного белка, отличающий с я тем, что, с целью повышения точности диагностики, в крови дополнительно опреде- ляют уровень нерастворимых белков сыворотки крови, В-лимфоуитов и функцию тимуса, рассчитывают дифференциальный показатель по формуле

X 0,944 X AI + 0,013 X А2 - 0,083 X ХАз - 0,046 X А/г- 0,22 X As - 3,41

где Х-дифференциальный показатель; AI - уровень С-реактивного белка; А2 - количество циркулирующих иммунных комплексов; Аз количество В-лимфоцитов; - уровень нерастворимых белков сыворотки крови; AS - функция тимуса,

(и при X меньшем 0 диагностируют псориа- тический артрит, а при X большем 0 - ревма- тоидный артрит.

Изобретение относится к медицине, точнее к ревматологии. Цель изобретения - 2 ;...повышение точности способа. У больных производят забор крови и определение в ней уровня С- реактивного белка, циркулирующих иммунных комплексов, В лимфоцитов, нерастворимых белков сыворотки крови, а также функцию тимуса, вычисляют дифференцировочный коэффициент и при его значении менее 0 диагностируют псориатический артрит, а при его значении более 0 - ревмэтоидный артрит. По сравнению с прототипом увеличивается точность дифференциальной диагностики псориатического и ревматоидного артритов. со С