Способ получения @ -2-(ациламино)-3-монозамещенных пропеонатов Советский патент 1986 года по МПК C07C103/58 

V Изобретение относится к органической химии, а именно к способу получения г-2-(ациламино)-3-монозамещенных пропеонатов формулы . . (1) где R, - водород, С - С -алкил, нат16RJ - Cg-алкил; R- - С -алкил, при этом один или два атома водорода в R и R могуФ быть замещены на хлор или бром, когда R.J - прямолиней ный С - С -алкил, а R не является Cj-. С.-алкилом, которые могут быть ;использованы в Ka4ectBe ингибиторов метаболизмадипептидазы. Целью изобретения является разработка доступного способа получения Z-2-(ациламино)-З-моиозамещенных про пеонатов, обладающих свойством ингибировать метаболизм дипептидазы в организме. Пример 1. Z-2-Изовалерамидо2-бутеновая кислота. Раствор 1,07 г (10,5 ммоль) 2-ке хомасляной кислоты и 0,71 г (7,0 ммол изовалерамида в 15 мл толуола перемешивают при температуре кипения и собирают воду в маленькой ловушке Дин-Старка. Через 5 ч раствор охлаж дают, в результате чего идет сильна кристаллизация. После вызревания ос док собирают и промывают толуолом, затем . Выход белого кристаллического вещества составляет 0,47 Т„. 172-174 (незначительное предваПЛ -. рительное размягчение). Продукт перекристаллизовывают из диизопропилкетона. ТСХ (4:1 толуол-АсОН) показывает только незначительные следы другого изомера. Выход белых кристаллов составляе 0,32 г (25%) Т.пл. 175 (незначительно предварительное размягчение). По да ным ЯМР полученный продукт представ ляет собой исключительно Z-изомер. Найдено: С 58,89; Н 8,55; N 7,43 C. Рассчитано: С 58,36; Н 8,16; N 7,56. Пример 2. г-2-(2,2-Диметш1циклопропанкарбоксамидо)-2-пентеновая кислота. Раствор 1,74 г (15 ммоль) 2-кето валериановой кислоты и 1,13 г (10 ммол 2,2-диметилциклопропанкарбоксамида 8392 в 20 мл толуола кипятят при перемешивании, собирая воду в маленькой ловушке Дин-Старка. Через 20 ч раствор охлаждают и обрабатывают слабым током азота. Перед испарением основной части растворителя кристаллизацию индуцируют трением. После вызревания остаток собирают на фильтре и промывают толуо|лом и некоторым количеством (C,Hg),jO. Выход белого кристаллического продукта составляет 0,63 г (30%). Т„, 154,5-155,(незначительное предварительное размягчение) . ТСХ (4:1 толуол - АсОН) показывает только чрезвычайно, незначительные следы другого изомера. ЯМРспектр соответствует 2-конфигурации. Найдено: С 62,86; Н 8,27; N 6,75. (С,, H,,NO,) Рассчитано: С 62,53; Н 8,11; N 6,63. П р и м е р 3. Z-2-(3-UHKnoneHтилпропионамидо)-2-бутеновая кислота.; Раствор 1,41 г (10 ммоль) 3-циклопентилпропионамида и 1,53 г (15 ммоль) 2-кетомасляной кислоты перемешивают при кипячении над маленькой ловушкой Дин-Старка. Через 8 ч раствор охлаждают, в результате чего идет обильная кристаллизация. Остаток собирают на фильтре и промывают толуолом и СН С1 . Выход кристаллического продукта составляет 1,44 г Т 180,5-182°С (предварительное размягчение). Продукт перекристаллизовывают из металэтилкетона. Выход белых игольчатых кристаллов 0,63 г (28%) Тп 184-185° (незначительное .; предварительное размягчение). ТСХ (4:1 толуол - АсОН) показывает одно пятно, а ЯМР-спектр соответствует полностью Z-изомеру. Найдено: С 63,99; Н 8,67; N 6,27. (C,,H,N03) Рассчитано: С 63,97; Н 8,50; N 6,22. П р и м е р 4. Е-2-(2-Этилгексанамидо)-2-бутеновая кислота. 10 г 2этилгексаноил хлорида по каплям при перемешивании добавляют к 25 мл охлажденного концентрированного раствора NH ОН в результате чего сразу же выпадает осадок. Смесь перемешивают в течение 2 ч, затем отфильтровывают и высушивают на воздухе, в результате чего получают 6,5 г амида. 1,4 г (10 ммоль) полученного соединения и I,5 г кетомасляной кислоты (15 ммоль) кипятят в 25 МП толуола течение 15 ч с ртгоикой воды. Реакционную смесь охлаждают и частично упаривают в токе азота. Кристаллиза ция продукта происходит после вызре вания в течение 3 ч. Кристаллы соби рают, трижда промывают толуолом и вы сушивают на воздухе. Выделяют 1,13 (50%) продукта, Т„ 160-162, ЯМРспектры соответствуют заданной стру туре и показывают присутствие 5%-но Е-изомера, ТСХ показывают (4:1 Толу ол-АсОН) одно пятно. Найдено: С Н 9,43; N 5,88 (C.H.NO,) Рассчитано: С 63,40; Н 9,30; N 6,16. П р и м е р 5. г-2-(2,2-Диметилциклопропанкарбоксамидо)-2-бутеновая кислота. 1.53 г (15 ммоль) 2-кетомасляной кислоты 1,13 г (10 ммоль) 2,2-диметилциклопропаикарбоксамида и 20 мл толуола перемешивают при температуре кипения в течение Ш ч. После охлаждеиия кристаллический продукт отфиль .тровывают, промывают толуолом (3 х X 10 мл) и высушивают, в результате чего получают 1,06 г продукта, 140-141с. тех (4:1 толуол - АсОН) показывает практически одно пятно, ЯМР-спектр соответствует требуемой структуре. После перекристаллизации из Et ОАс и высушивания получают 0,533 г продукта, 142-143,5, гомогенного поданным ТСХ. Найдено: С 60,92; Н 7,71; N 7,38 (С,оН.5«Оз Рассчитано: С 60,90; Н 7,67; N 7,10. П р и м е р 6. г-2-(2,2-Диметилциклопропанкарбоксамидо)-2-гександикислота. Смесь 1,0 г 2,2-диметилциклопропанкарбоксамида, 2,4 г 2-кетоаддипиновой кислоты и 25 мл метилизовале-; рата кипятят в течение 4ч, удаляют воду с помощью модифицированной ловушки Дин-Старка, содержащей молекулярные сита (4а). После вызревания при комнатной температуре в течение ночи кристаллический остаток отфильт ровывают, промывают серным и перекристаллизовывают из этилацетата в результате чего получают 0,23 г продукта Т 163-165°, ЯМР-спе стр со ответствует требуемой структуре. Найдено: С 56,20; Н 6,83; N 5,32. (C,iH,TNOa) Рассчитано: С 56,46; Н 6,71; N 5,49. Пример 7. г-2-(2,2-Диэтилдициклопропанкарбоксамидо)-2-бутеновая кислота. Смесь 2,3 г 2-кетомасляной кислоты, 2,0 г 2,2-диэтилциклопропанкарбоксамида и 25 мл толуола кипятят в течение 16 ч с удалением воды с помощью модифицированной ловушки ДииСтарка, содержащей молекулярные сита (4а). При охлаждении продукт не выпадает в осадок. Затем добавляют серный эфир (25 мл) и смесь экстрагируют насыщенным раствором NaOHCO (трижды). Объединенные фракции подкисляют концентрированной НС 1. Смолоподобный осадок закристаллизовывается при смешении с водой. После перекристаллизации из этилацетата получают 0,31 г продукта. Т, 29-130С. ЯМР-спектр соответствует продукту с требуемой структурой. Найдено: С 64,01; Н 8,62; N . С.2 Н,, N0. ) Рассчитано: С 63,98; Н 8,50; N 6,22. П р и м е р 8. 2-(2,2-Димeтилдициклoпpoпaнкapбoкcaмидo)-2 -гeкceнoвaя кислота. Третбутиловый сложный, эфир D1норлейцина. К суспензии 9,82 г (75 ммоль) DLнорлейцина в 80 мл диоксана, помещенной в 500 мл автоклав, охлажденной на ледяной бане, медленно (с перемешиванием) добавляют концентрированной . Охлаждая полученную смесь на ледяной бане, добавляют 80 мл жидкого изобутилена. Смесь нагревают до комнатной температуры и перемешивают под аутогенным давлением примерно в течение 23 ч. После того, как основную часть изобутилена выпускают из автоклава, слегка мутный раствор охлаждают на ледяной бане, а затем добавляют к охлажденной смеси 400 мл iH.NaOH и 500 мл . .После встряхивания в отдельной врронке происходит разделение слоев, водную фракцию промывают дополнительными 10 мл Et,jO. EtjO раствор встряхивают с 150 мл 0,5 H.HCl. Кислую водную фракцию обрабатавают 2,5 н. NaOH до достижения сильно щелочной реакции, а затем встряхивают с 250 мл . ЕцО раствор сушат (MgSO, ) , отфильтровывают и

концентрируют на ротационном испарителе. После продолжительного вакуумирования лод высоким вакуумом над паровой баней лолучают лрозрачный бес.цветный маслянистый продукт в количестве 9,04 г (65%). ЯМР-спектр показывает наличие сЛедов диоксана, ТСХ (9:1 СНС1 - МеОН) показала одно пятно.

Третбутиловый сложный эфир -N-(2, 2-диметилциклопропанкарбонил)-В1-норлейцина.

К раствору 8,98 г ммоль) третбутилового сложного эфира DL-норлейцина и 5,05 г (50 мыоль) триэтиламина в 100 мл , перемешиваемому на ледяной бане под .осушающей трубкой, по каплям (в течение 75 мин) добавляют раствор 6,39 г (48 ммоль 2,2-диметилциклопропанкарбонилхлорида) в 50 мл . Осаждение Et3N. НС1 происходит в процессе добавления реактанта, особенно ближе к концу. По мере плавления льда смесь нагревается до комнатной температуры. Через 16 ч смесь встряхивают с 200 мл 0,5 Н.НС1 . CHjjCl фракцию промывгиот дополнительно 200 мл 0,5 н.НС1, 2x200 мл 0,5 н. NaOH и окончательно - 200 мл Н, фракцию сушат MgSO, обрабатывают активированным углем и отфильтровывают через пелит, фильтрат концентрируют на ротационном испарителе (под высоким вакуумом). Выход конечного продукта, представляющего собой светло-оранжевое вещество, составляет 11,93 г (88%) ,ТСХ (2:1 гексан - Et ОА с) показывает одно пятно. ЯМР- и ИК-спектры соответствуют соединению заданной структуры. После вызревания в течение нескольких дней неиспользованная часть этого продукта закристаллизовыва тся. Т 52 - 65°С,

Третбутил 2-(2,2-диметилциклопропанкарбоксамндо)-2-метоксигексаноат

К раствору 6,37 г (22,5 ммоль) третбутилового сложного эфира N-(2,2диметилциклопропанкарбонил)-ВЬ-норлейцина в 35 мл , перемешиваемому при комнатной температуре под атмосферой азота в отсутствие света, добавляют 2,69 мл (2,45 г, 22,5 ммоль третбутил гипохлорита. Через 15 мин добавляют раствор метоксида натрия, полученный растворением 0,52 г (22,6 ммоль) натрия в 35 мл СН„ОН. .Перемешивание продолжают при комнат2648396

ной температуре под атмосферой азота в отсутствии света. Через 16,5 ч выпавший в осадок хлористый натрий отфильтровывают . Фильтрат разбавляют ( ) и последовательно промывают 3x50 мл 0,5 Н.НС1, 50 мл насыщенного

и 2x50 мл воды () фазу

осушают над MgSO иотфильтровывают. Фильтрат выпаривают на ротационном

O испарителе. Бледное, золотисто-желтое масло (6,45 г) подвергают препаративной жидкостной хроматографии высокого давления, в результате чего отделяют и выделяют 273 и 496 мг

5 двух диастереомеров - третбутил 2(2,2-диметилциклопропанкарбоксамидс&2-метоксигексаноата)(соответствующие Т„, .114-118° и 124-125,5°), а также 1,97 г самостоятельного изомера (очевидно Z) третбутил-2-(2,2-диметилциклопропанкарбоксамидо)-2-гексаноата (бесцветное масдо)..

2-(2,2-Диметилциклопропанкарбоксамидо)-2-гексеновая кислота.

Раствор 0,84 г (3,0 ммоль) третбутил-2-(2,2-диметилциклопропанкарбоксамидо)-2 гексеноата в 10 мл (CjHg) , насыщенный безводным НС1, выдерживают при комнатной температуре под осушительной трубкой. Через 17 ч раствор выпаривают и оставшуюся массу растворяют в 10 мл нacьш eнного NaHCO . Этот раствор промывают дополнительными 15 мл 0,5 Н.НС1, затем высушивают (MgSO), отфильтровывают и выпаривают, в результате чего получают вязкое масло. Масло перекристаллизовывают из толуола. Выход белых- кристаллов составляет 0,32 г (47%). Т 119-122°. ТСХ (4:1 толуол АсОН) показывает одно пятно. ЯМРспектр подтверждает образование практически чистого Z-изомера. Примечание: при обработке аддукта метанола, третбутил 2-(2,2-диметилциклопропанкарбоксамидо)-2-метоксигексеноата, безводным НС1 в среде ()О в аналогичных условиях образуется тот же продукт.

П р и м е р 9. (+)-г-2-(2,2-ДиметШ1Циклопропанкарбониламино)-2-октеновая кислота, натриевая соль.

Реагенты -(+)-2,2-Диметилциклопропанкарбоксамид, 7,0 г сложный этило5 вый эфир 2--кетооктановой кислоты, 14,7 г; 50 мг пара - толуолсульфоновой кислоты; и 100 мл толуола з агружают в 250 мл трехгорлую колбу под ловушкой Дин-Старка, содержащей таблетки молекулярного сита. В течение 27 ч смесь интенсивно кипятят. Образовавшийся светло-желтый раствор охлаждают и выпаривают под вакуумом на водяной бане при 45°С в присутствии воды для облегчения удаления толуола Оставшуюся массу суспендируют в 230 мл 2H.NaOH и перемешивают при в течение 3 ч, затем Температуру повьш1ают до и греют при ней еще в течение 2-1/2 ч до образования прозрачного раствора. Затем раст вор охлаждают, добавляют 85 мл хлористого метилена и доводят рН 8,5 среды до с помощью 4н.НС1 при перемешивании. Органический слой отделяют и отбрасывают. Водный слой(Зббмл) анализируют методом жидкостной хрома тографии и определяют, что он содержит 37,2 мг/мл, 87% Z-изомера. Затем добавляют другую порцию 85 мл ,j и доводят рН до 4,5 при перемешивании. Органический слой отделяют, а водный слой вновь экстрагируют 50 мл CHjCl и доводят рН до 4,5. Объединенные органические экстракты сушат Na-SO., , отфильтровывают и выпаривают i , Т полученный остаток растворяют в 150мл изопропанола и 15 мл воды и доводят рН до 8,2 с помощью 2 н.НаОН. Образовавшийся раствор концентрируют до маслянистого остатка, который прокывают изопропанолом до тех пор, пока он не превратится в кристаллическое вещество, что свидетельствует о том, что основная часть воды удалена. Его перекристаллизовывают из 120 мл изопропанола (охлажденного на льду -в те чение 1 ч), отфильтровывают, промывают 50 мл холодного изопропаиола, после чего - большим количеством аце тона, высушивают при (0,1 мм) 2ч, в результате чего получают 10,74 г (63,2%) кристаллического материала, характеризующегося одним пи ком иа жидасостной хроматограмме, Т„д 241-243 С. Эти растворы сливают все вместе при перемешивании. Образовавшуюся кристаллическую массу нагревают и получают два прозрачиых слоя, вновь интенсивно перемешивают при охлаждении и получают кристаллический продукт. Этот продукт оставляют вызревать при комнатной температуре на два дня. Затем его отфильтровывают, промывают 2x10 мл воды и 2x10 мл 50%-ного метанола и высушивают под вакуумом. Выход сырой соли хинина составляет 44,8 г (48,7%)выход моногидрата, Т 113-116°С, 94,4, С 1,0; СНС1д . Этот материал перекристалдизовывают из ацетона и получают 24,35 гпродукта, Т 127-130°С. Очищенную хиноновую соль превращают в кислоту обработкой водным основанием и хлороформом, и последующей обработкой кислотой, в резу51ьтатечего получают (96%) 3,9 г продукта, имеющего Cot-1 146,0° . Кислоту превращают в амид следующим образом. 30,5 г (+) кислоты в течение 5-10 мин добавляют через капельную воронку к охлажденному хлористому оксалилу 54 мл, содержащему 1 каплю диметилформамида. Смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Образовывается проэрачньй раствор, который добавляют к 100 мл хлористого метилена для разбавления. Избыток хлористого оксалила удаляют концентрированием и смесь дважды пр01«лвают хлористым метиленом. Образовавшийся раствор разбавляют равным объемом хлористого метилена и непрерывно добавляют через капельиз) воронку примерно к 100мл безводного жидкого аммиака, который разбавляют 100 мл хлористого метилена. Пример 10.. г-2-(2,2-Дихлорциклопропанкарбоксамидо)-2-бутеновая кислота. 2,2-Дихлорциклопропанкарбоксамид. 7,1 г образца 2,2-дихлорциклопропеикарбонил хлорида по каплям добавяют к 75 мл концентрированного гидоксида аммония при интенсивиом переешивании. Температуру реакционной смеси поддерживают ниже 10°С на ледяой бане. Смесь перемешивают на ледяой бане в течение 30 мин, затем в i ечение 1 ч - при комнатной темперауре. Водный аммиак выпаривают при ониженном давлении (баня при 50Гс). вердый остаток экстрагируют горячим тилацетатом (3x30 мл). Экстракты паривают до объема 40 мл и добавлят к ним 20 мл гексана. После охлажения на льду твердый остаток отфильровывают, промывают смесь этилацеат:гексан (1:1) и высушивают, в реультате чего получают 2,7 г 2,2-дипорцйклопропанкарбоксамида, Т„„ 14491146. ЯКР-спектр соответствует соединению заданной структуры. Найдено:.С 31,26; Н 3,31; N 9, С 45,79. (С N0) Рассчитано: С 31,20; Н 3,27; N 9,10; Cl 46,04. Другие 1,3 г амида, Т„ 143-145°, можно извлечь из маточного раствора, Z -2-(2,2-Дихлорциклопропанкарбоксамидо -2-бутеновая кислота. Смесь 1,53 г (15 ммоль) 2-кетомасляной кислоты, 1,54 г (10 ммоль) 2,2дихлорциклопропанкарбоксамида и 10 мл толуола кипятят в течение 12 ч с удалением воды с помощью модифицированной ловушки Дин-Старка, содержащей молекулярные.сита (4а). Добавляют дополнительные 0,7 г 2-кетомасляной кислоты и реакционную смесь кипятят еще в течение 12 ч. Смесь охлаждают, разбавляют 20 мл толуола и экстрагируют ненасыщенным раствором бикарбоната натрия (3x10 мл). Экстракты объединяют, промывают серным эфиром и подкисляют до рН 3 (по рН метру) концентрированной соляной кислотой. В осадок выпадает смолоподобное вещество, которое вскоре твердеет. Его отфильтровывают, промывают водой, вы сушивают и перекристаллизовывают из нитрометана, в результате чего получают 423 мг Z-2-(2,2 дихлорциклопропанкарбоксамидо) -.2-бутеновой кислоты Т„.188-189,5°С. ЯМР-спектр соответст вует соединению с заданной структурой. Найдено: С 40,48; Н 3,80; N 5,91; С1 29,53. (CgHgCl NO, ) Рассчитано: С 40,36; Н 3,81; N 5,88; С 29,78. Пример 11. г-2-(2,2-Дихлорциклопропанкарбоксамидо)-2-октеновая кислота. Смесь 1,19 г (7,5 ммоль) 2-ке.тоно вой кислоты, 0,77 г (5,0 ммоль) 2,2дихлорциклопропанкарбоксамида и 5 мл толуола обрабатывают и проводят реакцию аналогично примеру 10. Сырой продукт (537 мг) очищают путем превращения его в сложный метиловый эфир (BF /CHjOH), препаративной ТСХ (сели кагель G , 4, 1 гексан: EtOAc) и om, лением до чистого Z-метилового сложного эфира.(0,3 М Li OH/CH OH), в результате чего получают 88 мг Z-2(2,2-дихлорциклопропанкарбоксамидо) 2-октеновой кислоты в виде частично 39 ристаллической смолы. ЯМР-спектр (ДМ50-а : 5 9,68 (S, iH, NH); 6,50 S(t, IH Н); 2,835(t, Ш. Jblfff (vjj, ub г, 0,87Mt, ЗН, СН ). Пример 12, Z -8-Бром-2-(2,2Иметилциклопропанкарбоксамидо)-2-октеновая кислота. К суспензии 14,4 г (0,3 моль);:.. 50%-ной дисперсии NaOH в 360 мл толу- ола, охлажденной на ледяной бане, в атмосфере азота в течение 45 мин, добавляют раствор 146 г (0,6 моль) 1,6-дибромгексана и 57,6 г (0,3 моль) этил 1,З-дитиан-2-карбоксилата в 120 МП ДМФ. Охлаждающую баню удаляют и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь водой (3x210 мл) осушают над MgSO и выпаривают при пониженном давлении, в результате чего получают 179,5 г желтого маслянистого продукта, содержащего требуекый безводньй дитиан, 1,6-дибромгексан и минеральное масло. Этот сырой продукт используют для проведения следующей реакции без очистки, К суспензии 426 г (2,4 моль) Nбромсукцинамида в 800 мл ацетонитрила и 200 мл воды в течение 45 мин добавляют раствор сырого дитиана в 100 МП ацетонитрила. Температуру реакционной смеси поддерживают ниже перемешивания при в течение 10 мин темно-красную реакционную смесь выливают в 2 л смеси гексан CHjCl (1:1). Раствор встряхивают с насыщенным раствором Na HSO (2 х X 400 мл) и водой (1x500 мл). Затем 400 кл насыщенного раствора Уа небольшими порциями добавляют к раствору (интенсивное выделение СО). После окончания пенообразования воронку трясут и водный слой отделяют. Органический спой экстрагируют насыщенным раствором Na COj (400 мл) и водой (500 мл) и сушат над MgSO. После удаления растворителя при пЙниженном давлении получают 133,8 г сырого сложного бромкетоэфира, содержащего I ,6-дибромгексан и минеральное масло. Этот сырой продукт используют без очистки для проведения следующей реакции. Смесь 133,8 г сырого сложного бромкетоэфира, 133 мл 50%--ной бромис то-водородной жислоты и 267 мл уксус ной кислоты нагревают при 90°С (внут ренняя температура) в течение 75 мин Темный раствор выпаривают при пониженном давлении до тех пор, пока не удалена основная часть уксусной кислоты. Остаток растворяют в-500 мп серного эфира, промывают водой (2х 100 мл) и экстрагируют насЬиценным раствором NaHCOj .(3x200 мл) . Объединенные NaHCOj экстракты экстрагируют серным эфиром (2x100 мл) и подкисляют концентрированной НС1. Образовавшееся масло экстрагируют эфиром ,(3x200 мл). Эфирные экстракты промывают водой (1x100 мл) и насьщенные щелоком (1x100 мп) сушат над MgSO . После удаления серного эфира при пониженном давлении получают 46,2 г чистой бромкето кислоты, гомогенной по данным тех (силикагель, 4:1 толуол - уксусная кислота). ЯМР-спектр соответствует соединению требуемой структуры. Смесь 46,1 г (0,194 моль) бромкето кислоты, 17,6 г (0,156 моль) 2,2диметилциклопропанкарбоксамида и 450 мл толуола греют при температуре кипения в течение 13ч, собирая воду в маленькой ловушке Дин-Старка. После охлаждения прозрачную реакционную смесь экстрагируют насьщенным раство ром NaHCOj (4x100 мл), объединенные экстракты промывают серным эфиром (2x100 мл), а затем доводят до 3,5 (по рН -метру) добавлением концентрированной НС1. Образовавшееся масло BCKopg закристаллизовывается. Остаток отфильтровывают, хорошо промывают водой и высушивают. После перекристаллизации из ацетонитрила получают 22,5 г г-8-бром-2-(2,2-диметилциклопропанкарбоксамидо)-2-октеновой кислоты. Т„д 151-153С гомогенной по данным тех (4:1 толуол-уксусная кислота). ЯМР-спектр соответствует соединению требуемого строения. Найдено: С 50,66; Н 6,96; N 4,45; Вг 23,95. (C,H,,BrNOp Рассчитано: С 50,61; Н 6,67; N 4,22; Вг 24,05. На основе этой методики были полу чены следующие « -бромсоединения: г-6-бром-2-(2,2-димётилциклопро:панкарбоксамидо)ггексеновая кислота; Z-7-6pOM-2-(2,2-диметилциклопропанкарбоксамидо)-гектеновая кислота; Z-9-6pOM-2-(2,2-димеТилциклопропанкарбоксамидо)-2-ноненовая кислота; Z-1О-бром-2-(2,2-диметилциклопропанкарбоксамицо)- деценовая кислота; Z-8-6pOM-2-(2,2-диметилциклопропанкарбоксамидо)-октеновая кислота. Изучение расположения тиенамицина, его природных аналогов и полусинтетических производных позволило выявить основное метаболическое расщепление путем элюминации в различных изученных видах живых организмов (мьши, крысы, собаки, шимпанзе, резус-обезъяны). О степени метаболизма можно судить по низким мочевым выделениям и коротким периодам полураспада плазмь. Этот распад протекает по механизму лактамного расщепления под действием почечной дипептидазы (Е.С.3.4.13.11). Для того, чтобы продемонстрировать способность соединений формулы 1 подавлять действие почечного фермента дипептидазы, была-, применена методика исследования in vitro. Она позволяет измерять способность соединений ингибировать гидролиз глицилдегидрофенилаланина (ГДФ) с помощью солюбизированной дипептидазы, выделенной из свиной почки. Методика заключается в следующем: к 1 мл системы, содержащей 50 мм МОПС (3-Nморфолино пропансульфоновой. кислоты) буфера, рН 7,1 добавляют 6 мг лиофилизированного фермента и испытуемое соединение при конечной концентрации 0,1 мм. После 5 мин выдерживания в термостате при 37°С добавляют ГДФ при конечной концентрации его 0,05 мм. Термостатирование продолжают еще в течение 10 мин при 37 С и гидролиз ГДФ измеряют по изменению оптической плотности во времени при 275 им. Ингибирование действия фермента определяют при сравнении с результатами контрольного опыта, проводимого без ингибитора Ki. Это концентрация ингибитора, при которой достигается 50%-ное ингибирование фермента. В качестве субстрата в этом методе используется ГДФ по сравнению с тиенамицином, так как она характеризуется значительно более высокой максимальной скоростью гидролиза почечной дипептидазы, что позволяет снизить количество требуемого фермента Как ГДФ, так и тиенамицин имеют одинаковое сходство к почечной дипептидазе, кроме того, Ki испытанных ингибиторов оказались идентичными для двух субстратов. Помимо этого опыта in vitro, был проведен опыт i.n vivo для измерения способности исследуемых соединений ингибировать метаболизм по увели чению выхода тиенамицина в моче мышей. Методика предусматривает совместное введение исследуемого соединения внутривенно или подкожно при дозе 10-100 мг/кг с тиенамицином в количестве 10 мг/кг. Затем сравнивают содержание тиенамицина в моче за период 4 ч и .содержанием его в моче контрольной группы животных, которым не вводили исследуемое соединение. Содержание тиенамицина в моче во всех случаях измеряют с помощью цилиндрической или дисковой диффузионной ячейки. Эта биопроба с Stapky lococcus aureus АТСС 6538 в качеств опытных организмов имеет диапазон чувствительности от 0,04 до 3,0 г/мп Результаты опыта in vitro.

(Z) - 2-Ациламина-2-бутеновые кислоты

С02Н

снз

Таблица I о Используют 1 мл системы 50 мм МОПС буфера, рН 1,7. К нему добавляют 5 г свиного почечного фермента и такое количество исследуемого соединения, чтобы его конечная ког-дентрация составляла 0,1 мн. После 5 мин термостатирования при 37°С добавляют такое количество ГДФ, чтобы конечная концентрация ее составляла 0,05 мМ. Систему вновь термостатируют при в течение 10 мин. Гидролиз ГДФ определяют по изменению ее оптической плотности во времени при 275 им. Ингибирование фермента определяют при сравнении с результатами контрольного опыта, проводимого в отсутствие ингибитора, и выражают в процентах ингибирования. Ki представляет собой величину, показывающую концентрацию ингибитора, необходимую для достижения 50%-ного ингибирования фермента. Это расчетная величина, получаемая в результате нескольких in vitro проб, при концентрациях, приводящих к йнгибированию ниже или вьше точки 50%-ного ингибирования. Полученные результаты представлены в табл.1.

CH,CHj -CHjCH (

(СН,)зСН I |Д I 3 I fCHzHQ 176-177VIII (С1%г-О 180,5-181VII сн, 144-145IV 167-168V

142-143,5 XII

45,5-146,5 IV

145,5-146,5Y IV

201-202IV

131-132 IV

183-184IV

з

129-130IV

189-190,5 XII

188-189,5 V

191-192V 1264839 29 «О 3 5

27 С Н N0,

C,H,N 4

10 15 3

.И.5«0з

C,H,N 19

19,8

53 С, Н N0

C,H,N (10)

тч tg 3

C,H,N45

12 С Н N0

11 f7 3

22 Ч,И.,«Оз

C,H,N3

10 ,

C,H.N 86

32 С Н N0,

C,H,N1,6

10 13 3

C,H,N,Cl 08

18 С Н СШО 893

C,H,N,Br 03

23 CgHgBrNO 18 Продолжение табл.1 C,H,N25 п , «. C,H,N(54) Св«.,« H,N,C(16) N0 C,H,N12 ,

.СНз

172-174,5 XII

ч Результаты опыта in vivot 1п vivo опыт на мышах проводят следующим образом. Мышам весом 20 г, женским особям25 (СД Чарзл Ривер) подкожно вводят выбранную дозу химического ингибитора. Примерно через 2 мин определенную дозу тиенамицина вводят внутривенно. Осуществляют также контроль,тиенами-jg цина. Уровень тиенамицина в моче выражаемый в процентах от введенной дозы, измеряют с помощью биохимической пробы. Результаты представлены в табл.2. Два номера исследуемых соединений совпадают с номерами соединений из табл. 1. Сое чинение 7 представляет собой, 2-изовалераминр-2-бутеновую кислоту, соединение 10, представляет собой г-2-циклопро1гилкар.боксамидо-2-бутеновую кислоту. Соедииения 2-изовалерамидд-2-бутеновая кислота, соедашение 7, Z-2(2,2-диметилциклопропанкарбоксамидо)Влияние вводимой совместно 2-йз кислоты (соединение 7) ни вых моче мышей, жейские особи, СЛ вес 20 г

ВВ ИЛИпкж

пкж ПКЖ

Продолжение табл.1

4,7

19 C.

C.H.N

10 10

30jt5 33 2-бутеновая кислота были более детально изучены в опытах in viVo в сочетании с тиенамицииом (ТМ) в опытах на мышах. Общая методика проведения испытаний аналогична той, что описана в примере 2. Полученные результаты представлены в табл.3 и 4. т л Контрольное . Таблица 3 ваперамидобутеновой д тиенамицина в Чарзльз Ривер,

(б) Вводимые совместно.

Влия1 ие вврДИМОЙ совместно Z-2-(2,2-диметш1ЦИклопропанкарбоксамидо)-бутеновой кислоты (соединение - 2)на выход тиенамицина в моче мышей. Мыши, женские особи, СЛ Чарльз Ривер, весом 20 г.

(б) Совместное введение.

: ЕД„.,

,2

: TMtlOO мг/кг ингибитора 0,06

В другом опыте на мышах система- но в три раэа путем совместного вветнческое антибактериальное действие дения с 2-изовалерамидо-2-бутеновой тяенамшдана увеличивают приблизитель- кислотой.

Таблица4 231264 Влияние совместно вводимой 2-инвалерамидо-2-бутеновой кислоты на систематическую эффективность тиенамицина при лечении инфекции Staphylococcus aureus.5 Для изучения влияния ингибиторов дипептидазы на выход N-формимидоил тиенамицина в моче были использованы мужские особи собак. В контрольном опыте собаке вводили 5 мг/кг IV N-Ю формимидоил тиенамицина без ингибитора. Во втором О1тыте используют то же количество N-формимидоилтиенами ход в моче N-формим (5 мг) кг (IV) через 3 ния в организм собаки Исследуемое соединение

Ы-Формимидоилтиенамицин

плюс Z -2-изовалерамидо2-бутеновая кислота

шшс Z -2-(2,2-Диметш1циклопропанкарбоксамидо) 2-бутеновая кислота Таким образом, полученные соедине-35 ния общей формулы 1 обладгиот свойством изобритательно ингибировать 839 24 цина, а также вводят Z-2-изовалерамидо-2-бутеновую кислоту тремя дозами, каждая пСг 20 мг/кг исследуемого соединения. Ш-рвую дозы вводят сразу же после инъекции N-формимидоилтиенамицина, вторую - на 40-й минуте и третью - на 60-й минуте. В третьем опыте используют одну 2 мг/мг г-2-(2,2-диметилциклопропанкарбоксамидо)-2-бутеновой кислоты, вводимую непосредственно перед инъекцией Nформимидоилтиенамицина. Полученные результаты представлены в таблице 5. ТаблицаЗ доилтиенамицииа после его введеВыход в 1 моче,% метаболизм дипептидазы и могут быть использёваны в медицине.