Штамм бактерий VIвRIо сноLеRае еLтоR серовара 2, используемый для приготовления диагностической сыворотки Советский патент 1991 года по МПК C12N1/00 A61K39/40 

Изобретение относится к медицинской микробиологии, а именно к серологической идентификации патогенных вибрионов, и может быть использовано для получения специфической диагностической сыворотки.

Целью изобретения является штамм Vibrio cholerae eltor 2, выделенный из популяции V.Nag.NcTc 4711 2 серовара, обладающий общим антигеном с исходной культурой Vibrio Nag. NcTc 4711 2 cepoaapa, служащий для получения специфических сывороток.

Штамм Vibrio Nag. 2 серовара хранится в коллекции Музея живых культур Всесоюзного научно-исследовательского протичум- ного института Микроб под номером NcTc

4711 и используется для получения моно- варных специфических сывороток 2 серовара. Штамм Vibrio Nag. NcTc 4711 обладает свойствами, характерными для рода Vibrio.

Штамм Vibrio cholerae eltor 2 получен путем целенаправленной селекции из штамма Vibrio Nag NcTc 4711 следующим образом.

Штамм Vibrio Nag. NcTc 4711 выращивают в пептонной воде к стандартизируют по оптическому стандарту мутности до 109 микробных те в 1 мл.

Культуру в количестве 1 мл вносят в пробирки с 3 мл 2%-ного растопленного и остуженного до 40-45°С щелочного агара (рН 7,6-7,8), тщательно перемешивают и выливают вторым слоем в чашки Петри с 10 мл

О

4

предварительно разлитого 2%-ного щелочного агара. После еф застывания на поверхность наносит полупроницаемую мембрану, вырезанную по кругу чашки, и простерилизованную 10-минутным кипячением в дистиллированной воде. На мембрану засевают суточную культуру Vibrio cholerae closslca 569 В, выращенную в 0,3%-ном питательном агаре.. Чашку помещают в термостат1 при 37°С и выдерживают ,18ч. Затем мембрану с нанесенной в ней культурой удаляют, а пассированный | штамм на участке частичного его роста непосредственно под культурой Vibrio cholerae classlca 569 В отбирают петлей и подращивают для нового пассажа в течение 4-5 ч.

В результате 10-кратного пассирования указанным способом взятая в опыт культура Vibrio Nag.NcTc 4711 приобрела свойства типичные для холерного вибриона, а выделений штамм диагностирован как Vibrio Icholeraeeltor2.

Штамм Vibrio cholerae eltor 2 депонирован в Музее живых культур Всесоюзного научно-исследовательского противочумного института Микроб под номером КМ-29 (2).

Свойства штамма Vibrio cholerae eltor 2 N КМ-29 (2). Морфологические признаки. Подвижные изогнутые палочки с одним полярно расположенным жгутиком, спор и капсул не образует.

Грам-отрицательные.

Культуральные признаки. На 1 %-ной пептонной воде вызывает помутнение, на плоском агаре образует гладкие круглые полупрозрачные с голубоватым оттенком колонии диаметром 2-2,5 мм.

Физиологические свойства. Оксидазо- положителен, ферментирует глюкозу и ман- нит (до кислоты без газа), не ферментирует инозит и салицин, образует индол, декар- боксилирует лизин и орнитин и не дегидрирует аргинин, не фосфоресцирует, относится к 1 группе Хейберга, дает феномен тяжа, не растет на 1%-но пептонной воде с 7% и 10% хлорида натрия, агглютинируется холерными диагностическими О, ОН и Инаба сыворотками, не агглютинируется Огава РО сыворотками, не лизи- руется холерными фагами С.

Лизируется холерными фагами эльтор и ХДФ 3-5.

Антигенные свойства. Обладает холерными 0-антигенами. При иммунизации животных вызывает образование холерных агглютининов. Полученная сыворотка агглютинирует холерные вибрионы и исходную культуру (вибрионы 2 серовара), но не аглю- тинирует штаммы 3-26, 28-56 сероваров.

Сравнительная характеристика исходного и полученного штаммов представлена в табл.1.

Пример, Штамм Vibrio cholerae eltor

2 N4(M-29(2) используют для получения специфической диагностической сыворотки. С этой целью штамм высевают на 1%-ную пептонную воду рН 7,6 и выращивают 4 ч при 37°С, затем пересевают на мясопептонный агар рН 7,6. Посевы инкубируют при 37°С в течение 18-20 ч. С агара культуру смывают физиологическим раствором рН 7,2. Микробную массу кипятят при 100°С в течение 2 ч. Затем дважды отмывают физиологическим раствором центрифугированием. Микробную взвесь после контроля на стерильность используют для иммунизации кроликов.

Кроликов иммунизируют трехкратно с

трехдневными перерывами: первую и вторую иньекции делают подкожно по 20 млрд. микробных клеток, третью - внутривенно - 5 млрд, микробных клеток. На 7 сут после третьей инъекции антигена кроликов обескровливают, получают сыворотку. Сыворотку инактивируют мертиолятом натрия 1:10000.

Титры сывороток составляют V1600- 1:3200 для холерных вибрионов и 1:2001:400 с исходным штаммом (контроль). Сыворотку применяют в реакции агглютинации с холерными штаммами, а также вибрионами 2-56 сероваров. Реакцию аглютинации ставят в пробирках объемным методом. Для

разведения сыворотки и приготовления взвесей культур используют физиологический раствор рН 7,2.

Специфичность сыворотки штамма Vibrio cholerae eltor 2 Isfe КМ-29 (2) представлена в табл.2.

Сыворотка против V. cholerae eltor 2 агглютинирует как холерные вибрионы эль- тор, так и Vibrio Nag. NcTc 4711 2 серовара (табл.2).

Штамм Vibrio cholerae eltor 2 № КМ-29 (2),

полученный из популяции Vibrio Nag. серовара 2, позволяет получить специфичную- сыворотку, необходимую при диагностике кишечных заболеваний, которая позволяет

более широко дифференцировать патогенные вибрионы, а также способствует выявлению антигенного родства между некоторыми представителями холерных и неагглютинирующихся вибрионов.

Формула изобретения

Штамм бактерий Vibrio cholerae eltor KM 29(2) серовара 2, используемый для приготовления диагностической сыворотки.

Сравнительная характеристика свойств штаммов Vibrio Nag Nc Тс 4711 и Vibrio cholerae eltor 2 № KM-29 (2)

ел

717017418

Таблица 2 Специфичность О - холерной сыворотки штамма Vibrio choferae eltor 2 № KM - 29 (2)

Изобретение относится к медицинской микробиологии, а именно к серологической идентификации патогенных вибрионов, и может быть использовано до получения специфической диагностической сыворотки. Целью избретения является штамм Vibrio cholerae eltor 2, выделенный из популяции Vibrio Nag. NcTc4711 2 серовара, обладающий общим антигеном с исходной культурой Vibrio Nag. NcTc 4711 2 серовара, служащий для получения специфических сывороток. Штамм Vibrio cholerae eltor 2 выделен из популяции Vibrio Nag. 2 серовара при помощи способа отбора токсигенных субкультур Vibrio cholerae eltor 01 и депонирован в коллекции Музея живых культур Всесоюзного научнс-исследовательского противочумного институга Микроб. При использовании штамма Vibrio cholerae eltor 2 возможно получение сыворотки, агглютинирующей холерные и неагглютинирующиеся вибрионы 2 серовара. 2 табл. СП