Способ получения растений картофеля в культуре тканей Советский патент 1986 года по МПК A01H3/00 

i Изобретение относится к биологии и сельскому хозяйству, в частности методам культуры тканей, клеток и протопластов растеттй, и может быть использовано в селекции картофеля для получения новых исходных форм или сортовых модификаций методами каллусной, клеточной и протопластной техники. Цель изобретения - увеличение выхода растений-регенерантов. Пример. Эксплантат каллусно ткани картофеля помещают на питател ную среду следующего состава: минеральные элементы по Мурасиге-Скугу, органические добавки по Нич-Ничу, зеатин 1,0 мг/л, глюкоза 0,2 М, ага 1%. На этой среде каллусную ткань выраиу-1вают 2 мес. при освещенности 8000 лк и 16-часовом фотопериоде. После этого рост ткани прекращается наблюдается ее потемнение и появление единичных очагов меристематиза1ЩИ в базапьной части эксплантата. Затем проводят роллерное культивирование каллусов в жидкой питател ной среде того же состава во вращаю щихся со скоростью 2 об/мин сосудах при той же освещенности. Соотношение воздуха, жидкости и эксплантато в сосудах 94:5:1 по объему. Культи08вирование на этой среде продолжают 3-4 нед. При зтом стимулируется заложение апексов и наблюдается массовое появление новых зон регенерации. Далее на 4-7-й неделе эксплантаты вновь переносят на твердую питательную среду прежнего состава для развития из заложившихся меристем регенераторов с 2-5 листьями. Часть регенерантов (до 50%) плохо укореняется и потому обречена на гибель. Во избежание этого эксплантаты каллусов с развинтимся в разной степени регенерантами вновь переносят на роллерные сосуды для отмывки от высокой концентрации регуляторов, удлинения стебля и стимуляции ускорения. Среда культивирования на этой стадии жидкая с минеральной основой по Сурасиге-Скугу, сахарозой 10 г/л, регуляторами - ИМК О,1 г/л или феруловой кислотой 1 мг/л. В этих условиях из регенерантов формируются облиственные проростки, которые при переносе на обычную минимальную среду для черенкования легко укореняются и развиваются в нормальные растения. Состав питательной среды для первого этапа морфогенеза у картофеля в каллусной культуре представлен в табл. 1.

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано в селекиуии картофеля для получения новых исходных форм или сортовых модификаций методами каллусвой, клеточной или протопластной техники. Цель изобретения - увеличение выхода растений-регенерантов. Каллус с меристематическими центрами получают на питательной среде, содержащей минеральные элементы по МурасигеСкугу, органические добавки по НичНичу, зеатин 0,7-1,2 мг/л, агарагар 8000-10000 мг/л, глюкозу 360045000 мг/л. Побеги получают на жидкой среде указанного состава. Побеги культивируют для укоренения на среде Мурасиге-Скуга с добавлением сахарозы, тиамина, пиридоксина, агарагара и ИНДолилмасляной кислоты в количестве 0,1-0,2 мг/л или феруловой кислоты в количестве 0,5 1,5 мг/л, а затем на агаризованной « среде того же состава с добавлением 6500-9000 мг огар-агара на 1 л среды. Количество регенерантов на 1 каллусный эксплантат увеличивается в 14 раз по сравнению с прототипом. 5 табл. 1Ю оэ о 00

Питательные среды для морфогенеза в каллусной ткани

Минеральные вещества

по Мурасиге-Скугу

СахарозаМаннит

Глюкоза

Гидролизатказеина

И 1ОЯИТ

Дгхентп

Таблица 1

+ 2400

36000-45000

1000

100

20-40

312763084 Питательные среды для морфогенеза в кштлусной ткани Влияние ИМК на образование корней 3,5 регенерантами на втором этапе морфогенеза следующее: Концентра- Укоренение регеция, мг/л :нерантов, %:

Продолжение табл.

Состав сред укоренения регенерантов (второй этап получения регенера50 тов) приведен в табл. 2, Влияние концентрации феруловой кислоты на образование корней регенерантами на втором этапе морфогенеза следующее: Концентрация, Ускорение регенерантов, %

Минеральные вещест по Мурасиге-Скугу

Сахароза

Тиамин

Пиридоксин

Инозит

Гидролизат казеина

Глицин

Фолиевая- кислота

Биотин

Аденин

Бензиламинопурин

Гибберелловая кисл

MES

Агар

ИМК или феруловая кислота Эффективность сред для укоренения реТ а б л и

Ц а

5000-10000

0,5

0,5

-20000

6500-9000

0,1-0,2 0,5-1,5 генерантов картофеля приведена в табл. 3 , СредаОбщее количество высаженныхрастений Прототип25 Предлагаемая с 0,1 мг/л ИМК27 с 1,5 мг/л феруловой кислоты31 Получение растений-регенерантов картофеля из первичного и длительно СортМаксимально на 1 в первичной культуре

15

мена

120

15 5 4 7

1 2

к

Эффективность способа-прототипа и предлагаемого способа получения регенерантов картофеля из длительно

Предлагаемьш

То же

Известный Прототип

пассируемой каллусной ткани приведена в тйбл. 5, Количество уко- Укоренившиеся ренившихся растения, % растений 832 27100 2790 пассируемого каллуса приведено в табл. 4. Таблица 4 оличество реагентов Способ лусный эксплантат в длительной культуре (15 мес..)

Таблица 5