Способ получения микроклубней картофеля IN VIтRо Советский патент 1988 года по МПК A01H3/00 

со

о: со

.11

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано в селекции картофеля, в исследованиях по фитопатологии и морфогенезу картофеля.

Цель изобретения - сокращение времени получения микроклубней, повьше- ние их размеров и жизнеспособности,

П р и м е р,1 Каллусную ткань

картофеля сорта Янтарный 5-го пассажа культивируют на гжтательной-среде Мурасиге-Скуга с 2-7 мг/л 2,4- дихлорфеноксиуксусной кислоты (2,4-Д Затем переносят каллусную ткань в

пробирки, содержащие по 20 мл агари- зованной среды для индукции морфогенеза. Культивируют каллусы в пробирках при 23-25 С днем и 18-20°С ночью, при 16-часовом фотопериоде и освещенности 6-8 тыс,л, создаваемой лампами ЛФР 150,

Через 2 мае культивирования отбирают пробки с каллусом, в котором

ния микроклубней по предлагаемому способу по сравнению с прототипом соращается в 6 раз, а величина микро- клубней оказывается через 1 мес выращивания регенерантов с микроклубнями в 1,5 раза больше ( мм) в сравнении с 6-7 мм в диаметре, а при сравнении окончательных размеров в 2 раза больше: 12к20 мм по предлагаемому способу и 6-7 мм по способу прототипу.

Влияние компонентов питательной среды на индукцию регенерантов картофеля и .на индукцию микроклубней на них приведено в табл,2,

Как видно из табл,2 при концентрации зеатина 0,2 мг/л наблюдали очень

слабую регенерацию побегов в каллусе, а при концентрациях 0,6 и 0,8 мг/л отмечено ингибирование процесса .. микро1шубнеобразования на регенеран- тах. Поэтому оптимальными концентра

Изобретение относится к сельскому хозяйству, более конкретно к селекции и семеноводству картофеля. Цель изобретения - сокращение времени получения микроклубней, повышение жизнеспособности и размеров. Способ заключается в выращивании каллусной ткани с зачатками регенерантов ( 5- 10 мм) на питательной среде с минеральной основой по Мурасиге-Скугу. Среда содержит, мг/л: сахароза 80,000-90,000, зеатан 0,35-0,45, ИУК 0,05-0,15, инозит 90-110, никотиновая кислота 0,4-0,6, пиридоксин 0,05-0,15, тиамин 0,05-0,15, гидро- лизат казеина 900-1100, глицин 1-3, фолиевая кислота 0,4-0,6, биотин 0,03-0,08. Культивирование ведут в обычных условиях при ночью, 23-25°С днем, 16-часовой фотопериод, освещенность 6-8 тыс.л, создаваемая лампами 150) . Образовавшиеся микроклубни оставляют на материнских растениях в условиях культивирования до посадки. 2 табл. с S (Л

появились регенеранты различных разме- 25 циями зеатина для образования поберов (5-10 мм в высоту).

Состав питательньк сред приведен в табл,1 ,

Эти каллусы вместе с регенерантами пересаживают на среду, индуцирую- 30 щую микроклубнеобразование (см.табл, I); Выращивание продолжают в тех же условиях о Через 2 недели на регенерантах начинают образовываться микроклубни, Они интенсивно растут, достигают через 1 мес культивирования размеров 10x12 мм и более, а через 2-2,5 мес 12x20 мм. Свыше 75% регенерантов обра зуют более 1 микроклубня на растение.

гов и микроклубней на них являются 0,35 - 0,45 мг/Ло При этом ..микро-j клубни появлялись через 2 мес выращи вания образовавшихся регенерантов.

Для ускорения микроклубнеобразова ния каллусную ткань сорта Янтарный с зачатками регенерантов (5-10 мм в высоту) переносят на морфогенную сре ду с 0,4 мг/л зеатина и различными ос концентрациями сахарозы (см,табло2) и культивируют в тех же условиях как описано вьше. Наиболее активную индукцию микроклубнеобразования наблюдали при концентрации сахарозы

По известному способу до появления о 80000-100000 мг/л. При концентрации

на регенерантах микроклубней, обладающих достаточно длинным периодом покоя, проходит 4,5 мес (около 1,5 мес регенеранты доращивают до состояния, в котором они могут быть расчеренкованы, и 3 мес выращивают черенки до появления на них микроклубней). Еще через 1 мес, когда их закладывают на -хранение, размер микроклубней не превышает 6-7 мм в диаметре.

сахарозы 60000 мг/л индукция микроклубнеобразования проходила гораздо медленнее, В то же время при концентрации сахарозы 100000 мг/л не- д5 большие регенеранты почти совсем не развивались и были очень уродливыми. Так как регенеранты, получаемы при различных генетических манипуляциях (слияния протопластов отдаленных видов, трансформация протопласто

t,4.Jff JUfL-itii A - А ( л ... -- . V fUJljn. frXl. уt JJ Clfl 4/4 l JCUJ jrj.. 1 ).С1.л Д.

По предлагаемому способу микроклуб- и т,д,) , час Р о характеризуются низни начинают образовываться на регенерантах уже через 2-3 недели культивир рования на индицирующей микроклубнеобразование среде, через 1 мес культивирования регенерантов с микроклуб нями последние достигают размеров 10«12 мм и более и через 2,0-2,5 мес 12«20 мм. Таким образом срок получе 55

кой жизнеспособностью, целесообразно использовать для индукции микроклубнеобразования сахарозу в концент рациях 80000 - 90000 мг/л, которая не полностью ингибирует рост и развитие регенерантов.

Найденные закономерности были про верены на каллусах различных сортов

0

гов и микроклубней на них являются 0,35 - 0,45 мг/Ло При этом ..микро-j клубни появлялись через 2 мес выращивания образовавшихся регенерантов.

Для ускорения микроклубнеобразова- ния каллусную ткань сорта Янтарный с зачатками регенерантов (5-10 мм в высоту) переносят на морфогенную среду с 0,4 мг/л зеатина и различными с концентрациями сахарозы (см,табло2) и культивируют в тех же условиях как описано вьше. Наиболее активную индукцию микроклубнеобразования наблюдали при концентрации сахарозы

сахарозы 60000 мг/л индукция микроклубнеобразования проходила гораздо медленнее, В то же время при концентрации сахарозы 100000 мг/л не- 5 большие регенеранты почти совсем не развивались и были очень уродливыми. Так как регенеранты, получаемые при различных генетических манипуляциях (слияния протопластов отдаленных видов, трансформация протопластов

fUJljn. frXl. уt JJ Clfl 4/4 l JCUJ jrj.. 1 ).С1.л Д.

и т,д,) , час Р о характеризуются низ

55

кой жизнеспособностью, целесообразно использовать для индукции микроклубнеобразования сахарозу в концентрациях 80000 - 90000 мг/л, которая не полностью ингибирует рост и развитие регенерантов.

Найденные закономерности были проверены на каллусах различных сортов

картофеля: Домодедовский, Изобилие, Бирюза и Повировец, Каллусы культивировали и вызывали в них образование побегов по вьшеописанному для сорта Янтарный способу. По 50 каллусов с зачатками регенерантов (5- 1Q мм в высоФу) всех указанных сортов помещали „на среду с 80000 мг/л сахарозы и 0,4 мг/л зеатина (табл.2) и культивировали как описано вьше для сорта Янтарный, Через 4 недели культивирования наблюдали образовани микроклубней у всех сортов (Домодедовский 32%, Изобилие 28%, Бирюза 26%, Повировец 32%).

Таким образом, предлагаемым способом можно индуцировать микроклуб

1650 1900 440 370 170 6,2 22,3 8,6 0,83 0,25 0,025 0,025 37,3 27,8 20000 100

необразование у регенерантов различных сортов картофеля.

Формула.изобретения

Способ получения микрокпубней картофеля in vitro, включакнций культивиг рование эксплантатов на питательной , среде с минеральной основой по МурасигеСкугу, обогащенной сахарозой, отличающийся тем, что, с целью сокращения времени получения микроклу(3- ней, повышения жизнеспособности и размеров, в качестве зксплантатов

используют каллусную ткань с зачатками регенерантов, а в питательную среду дополнительно вводят зеатии в количестве 0,35-0,45 мг/л среды.

Таблица 1

1650 1900

440

370

170

6,2 22,3

8,6 0,83 0,25 0,025 0,025 37,3 27,8

80000-90000 90,0-110,0

I

Компонент

Сод Ьржание компонентов питательных .сред, мг/л среды

Для культивированиякаллуса

ислота

зеина

ота

кислота

кислота

0,5. 0,1 0,1 1000

2-7 7000

6

Продолжение табл,1

Для индукции

клубнеобразования

0,4-0,6

0-,05-0,15

0,05-0,15

900,0-1100,0

1,0-3,0

0,4-0,6

0,03-0,08

0,05-0,15 0,35-0,45

7000

со fM ISS «л в « « «t

О о О-«too

1Л Irt

о - о о о

i I

in - «. о о о

s g

ш « . о о

о о о

о о

vO

s

(S (Ч гм о о

о о о

. I. I

ш -

л«L

о о о

о о о о

S 2

ш - -

о о о

§

ID -

о о о

in - -

о о о

§

о о

8 i

кп - -

I «

о о о

§

ш - -

««

о о о

ев в о

««

о о

.п S

-MOO

о

. о о

|Л| о

АА

о о о

tn

ю о

- «ч о о

ю ш. о

- см о о

т «л о

о о

§1Л tf) о «

- N о о

.л 3

- еч 00

3

- «ч о о