Способ диагностики кардиосклероза Советский патент 1987 года по МПК G01N33/70 

Изобретение относится к меднцине, точнее к кардиолопп.

Цель изобретения - повышение точ-- ности и ускорение способа за счет определения креатина в биоптате мио- карда.

Способ осуществляют следующим образом.

Ткань миокарда взвешивают, измельчают ножницами и помещают в гомогенизатор тефлон-стекло. Добавляют 20- кратный объем среды выделения: 0,1М фосфатный буфер рН 7,3 с 0,1% тритона Х-100. Гомогенизируют при О С 2,5 мин при 900 об/мин. Из гомогена- та отбирают аликвоту дпя определения креатина 100 мкл. Гомогенат центрифугируют при 4°С 20 мин при 10000 g. ripti необходимости гомогенат перед измерением разводят 0,05 М трис-НС1 рН 7,3 с 0,5% бычьим сывороточным альбумином до 500- и 2000-кратного разведения по отношению к весу ткани

Пример 1. При операции на открытом сердце у больного А. взяты биоптаты из шести участков миокарда. Биоптаты больнбго А. измельчают ножницами и помещают в гомогенизатор тефлон - стекло. Добавляют 20-кратный объем среды выделения: О,1 М фосфатный буфер рН 7,3 с 0,1% тритона Х-100. Гомогенизируют при 0°С 2,5 мин при 900 об/мин, затем Центрифугируют при 4°С 20 мин при 10000 g Из гомогената отбирают аликвоту для определения креатина 100 мкл. При необходимости гомогенаты перед измерением разводят 0,5 М трис-НС1 буфером рН 7,3 с 0,5% бычьего сывороточного альбумина до 500- и 2000-кратно го разведения по отношению к весу ткани. 100 мкл исходного гомогената депротеинизируют добавлением 100 мкл 12% трихлоруксусной кислоты. Через 30, мин гомогенат центрифугируют 1C ми при 3000 g. Для построения калибровочной кривой используют растворы креатина в концентрации 0; 2,5; 5; 10 и 20 мкГ/мл. Измерение концентрации креатина в депротеинизированных об- разцах производят по из вестной мето

5

5

0 0

35 50

0

дике. Полученные результапи, выраженные в мкГ/мг, пересчитывают в мг/г ткани умножением на 60. Измеренное содержание креат на в миокарде больного А.равно 1,45-0,06 мг/г. Диагноз: кар.пиосклероз

Пример 2. При операции на открытом сердце у больного- Н. взяты биоптаты из семи участков миокарда. Гомогенизацию биоптатов и определение содержания креатина в них производят согласно примеру 1. Измеренное содержание креатина в миокарде больного Н. равно 1,73iO,07 мг/г. Диагноз : кардиосклероз.

Пример 3. Во время операции с использованием искусственного кровообращения и кардиоплегии у больного Д. взяты биоптаты из пяти участков миокарда. Гомогенизацию биоптатов и определение содержания креатина в них производят согласно примеру 1. Измеренное содержание креатина в миокарде больного Д. равно 2,11 . tO,3 мг/г. Диагноз: кардиосклероз.

100 мкл-ИСХОДНОГО гомогената депротеинизируют добавлением 100 мкл 12% трихлоруксусной кислоты. Через 30 мин гомогенат центрифугируют 10 мин при 3000 g. Дпя построения калибровочной кривой используют растворы креатина в концентрации 0; 2,5; 5; 10 и 20 мкг/мп. Измерение концентрации креатина производят в депротеинизированных образцах. Полученные результаты, выраженные в мкГ/мп, пересчитывают в мг/г т кани умножением на 60.

Формула изобретения

Способ диагностики кардиосклероза, включающий взятие биоптата миокарда и опре еление в про бе концентрации азотсодержащего компонента, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и ускорения способа,чопределяют уровень креатина и при снижении этого показателя относительно нори; диагностируют кардиосклероз.

С целью повьппения точности и ускорения способа ткань миокарда взвешивают, измельчают и помещают в гомогенизатор. Добавляют 20-кратный объем среды и,1деления: 0,1 М фосфатный буфер, рН 7,3, с 0,1% тритона Х-100. Гомогенизируют при 0°С 2,5 мин при 900 об/ мин. Из гомогената отбирают аликвоту для определения креатина