Способ получения фосфолипидов Советский патент 1987 года по МПК A61K35/20 A23C7/00 A23C17/00 A61K38/01 

11289440

Изобретение относится к пищевой и химико-фармацевтической промышленности и может быть использовано при получении фосфолипидов из сырья животного происхождения, которые при- 5 меняются при производстве лекарственных и косметических средств, кормовых и пищевых добавок, а также в качестве реагентов для научных исследований. О

Цель изобретения - увеличение выхода фосфолипидов.

Способ заключается в том, что в качестве сырья животного происхождения используют пахту, в которую перед экстракцией вводят минеральную или органическую кислоту с соотношением пахты и кислоты (1:0,001)- -(1:0,0023). Экстракцию липидов из осадка проводят смесью хлороформа 20 и метанола в соотношении (1:1,5)(1:2), а выделение фосфолипидов из экстракта ведут при соотношении экстракта и ацетона (1:2)-(1:3) или ко-„ . „ ,

N у ч /конечной фракции. Конечную фракцию

лоночной хроматографией на окиси алю- „„4,„„,.„„„„„ „.,,„„ „„ „„л,

«5

Использование кислоты в качестве коагулянта в соотношениях меньших 1:0,001 вызывает неполную коагуляци При соотношениях вьше 1:0,0023 набл дается окис,ление липидов (исследова ния проводили методом микротонкосло ной хроматографии), что ухудшает качество продукта и имеет место необоснованный перерасход коагулянтов

Экстракцию липидов мембран жировых глобул пахты осуществляют смесь хлороформ:метанол в соотношении (1:1,5)-(1:2) двукратно на холоду () с последующим отделением экстрагированных липидов от белков центрифугированием при 1000 об/мин в течение 5 мин, концентрированием липидов, упариванием растворителей на роторном испарителе.

Как видно из табл. 3, оптималь- ньп4 соотношением смеси хлороформ:ме танол является соотношение 1 :(1,5-2 обеспечивающее максимальный выход

фосфолипидов выделяют из экстракта путем осаждения ацетоном при объемном соотношении экстракт - ацетон 1:(2-3).

миния смесью хлороформа и метанола в соотношении (3:1)-(3:1,5), при этом в качестве минеральной или органической кислоты используют 35-36%-ную соляную или 98-100%-ную уксусную кислоты.

Обработка пахты кислотой в соотношении пахты и кислоты (1:0,001)- (1-0,0023), обеспечивает коагуляцию мембран жировых глотул пахты, которые затем отделяют от водной фазы, из осадка экстрагируют липиды и из экстракта осаждают фосфолипиды с помощью подобранных органических растворителей при определенных соотношениях. Использование нового сырьевого источника при оптимальных условиях вьщеления фосфолипидов обеспечивает выход фосфолипидов до 90- 95% при одновременном снижении себестоимости конечного продукта.

В качестве коагулянтов могут быть использованы минеральные или органические кислоты. Наиболее доступными из них являются соляная и уксусная . Благодаря коагулированию мембран жировых глобул увеличивается выход сухой массы пахты в 78- 90 раз, что позволяет значительно ускорить и упростить режим ее отделения .

В результате многочисленных экспериментов были определены оптимальные количества применяемых-реагентов

„ . „ ,

Использование кислоты в качестве коагулянта в соотношениях меньших 1:0,001 вызывает неполную коагуляцию. При соотношениях вьше 1:0,0023 наблюдается окис,ление липидов (исследования проводили методом микротонкослойной хроматографии), что ухудшает качество продукта и имеет место необоснованный перерасход коагулянтов.

Экстракцию липидов мембран жировых глобул пахты осуществляют смесью хлороформ:метанол в соотношении (1:1,5)-(1:2) двукратно на холоду () с последующим отделением экстрагированных липидов от белков, центрифугированием при 1000 об/мин в течение 5 мин, концентрированием липидов, упариванием растворителей на роторном испарителе.

Как видно из табл. 3, оптималь- ньп4 соотношением смеси хлороформ:ме- танол является соотношение 1 :(1,5-2), обеспечивающее максимальный выход

„„4,„„,.„„„„„ „.,,„„ „„ „„л,

фосфолипидов выделяют из экстракта путем осаждения ацетоном при объемном соотношении экстракт - ацетон 1:(2-3).

Как видно из табл. 4, при осаждении фосфолипидов ацетоном в соотношении экстракт:ацетон меньшим чем 1:2 выход конечного продукта снижается вследствие неполного осаждения, а при большем количестве ацетона при соотношении 1:(4-6) часть фосфолипидов переходит в ацетоновый раствор. Выход фосфолипидов составляет при соотношении экстракт:аце- тон 1 : (2-3) 60-65,7%, при соотношении 1:(0,8-1), 50-51%, при соотношении 1:(4-6)33,37%.

Колоночная хроматография позволяет выделить фосфолипиды практически в чистом виде, однако использование хроматографических методов сопровождается потерями вещества.

При вьщелении фосфолипидов путем колоночной хроматографии достигается

выход фосфатидилхолина (лецитина) 89-91%.

Пример 1. К1 л пахты добавляют 35%-ную HCI в соотношении пах- та:кислота 1:0,0023 (до появления

признаков коагуляции). Затем выделяют осадок центрифугированием на рефрижераторной низкооборотной центрифуге при 1000 об/мин в течение 5 мин, при 4°С. Супернатант удаляют, а к

осадку добавляют 2,1 л смеси хлороформ - метанол в соотношении 1:1,5 выдерживают на холоду при О С в течение 2 ч при периодическом помешивании, снова центрифугируют в преж- нем режиме. Первый экстракт сливают, а осадок вновь обрабатывают 2,1 л смеси хлороформ - метанол в соотношении 1:1,5 в течение 3ч.

Осадок удаляют центрифугированием в аналогичном режиме, а экстракты объединяют, добавляют 2 л дистиллированной воды. После разделения фаз верхнюю водно-метанольную фазу декантируют, а нижнюю (хлороформный экстракт липидов) упаривают на роторном испарителе при пониженном давлении до объема 7 мл. К полученному концентрированному экстракту добавляют холодный ацетон при 4°С в соот- ношении экстракт - ацетон 1:3, выдерживают на холоду при 4°С в течение 2 ч, осадок фосфолипидов отфильтровывают и растворяют в хлороформе. Выход общих липидов составляет 7,3 г/л, а фосфолипидов - 4,7 г/л или 64%.

Результаты получения фосфолипидов по примерам 2-7 представлены в табл.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет получить высокий выход комплекса фосфолипидов 57-65% из легко доступного и дешевого природного сырья - пахты - неосновного продукта масляного производства. Получаемые фосфолипиды могут найти применение

Таблица 1

Сравнительный выход основных классов липидов (г/1 л).

Общие липиды0,1-0,3

Глицериды0,07-0 ,.18

Фосфолипиды0,025-0,04

Стерины стериды

0,004-0,009 1,2-3,0

как в медицине, ветеринарии, так и в фармацевтической, парфюмерной и пищевой промьш1ленности.

Снижение себестоимости конечного продукта, получаемого согласно предлагаемому способу относительно комплекса фосфолипидов, получаемых из яичных желтков, объясняется низкой стоимостью пахты.

Формула изобретения

Способ получения фосфолипидов, предусматривающий экстракцию липидов из сырья животного происхождения органическим растворителем, вьзделение фосфолипидов из -экстракта, добавлением ацетона к последнему, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода фосфолипидов в качестве сырья животного происхождения используют пахту, в которую перед экстракцией вводят минеральную или органическую кислоту в соотношении пахта:кислота 1:0,001- 1:0,0023, экстракцию липидов из осадка проводят смесью хлороформ:ме- танол в соотношении 1:1,5-1:2, а выделение фосфолипидов из экстракта ведут при соотношении экстракт:ацетон 1:2-1:3 или колоночной хроматографией на окиси алюминия смесью хлороформ:метанол в соотношении 3:1-3:1,5, при этом в качестве минеральной или органической кислоты используют 35-36%-ную соляную или 98-100%-ную уксусную кислоту.

24-26 15-20 16,8-19,6 9,7-13,0 5,2-6,0 3,0-4,0

0,75-1,0

12894406

Таблица 2

Зависимость выхода сухой массы и липидов пахты от условий коагулирования

Коагулянты

35%-ная НС1

98%-ная

CHjCOOH 1:0,0009 18 7

1:0,001 35 15 1:0,0023 40 20 1:0,003 20 20

Таблица 3 Зависимость выхода липидов от условий экстракции

Классы ли- Соотношения хлороформ:метанол

пидов, г/л т-1j-|-

:0 I 1:1 1:1,5 1 :2 1:3

Общие липиды 18 21 24 26 20 Глицериды 13,5 13,7 6,8 19,6 15,1 Фосфолипиды 3,0 3,9 5,2 6,0 4,0

Таблица4

Зависимость выхода липидов от условий осаждения

ацетоном

Соотношение экстракт:ацетон в основном липидном составе

Компоненты

.1:(0,8-1) 1:(2-3) . 1:(4-6) .

г/л % г/л % г/л j %

Общие липиды 3,5-5,0 51-53 7,:0-7,6 49-50 4,5-5,6 55-57 Глицериды 1,5-2,0 21-22 2,6-3,0 18-19 1,8-2,5 23-26

Фосфолипиды 1,8-2,5 26-26,54,2-4,6 30-31 1,5-2,1 19-20

Стерины, стериды,0,1-0,2 3-0,5 0,1-0,5 0,6

:

Выход

сухой

массы

пахты,

г/л

Выход липидов, г/л

20 45 47

47

9

24 26 26

71289440 8

Таблица 5

Химический состав липидов пахты в сравнении с составом липидов яичного желтка (по прототипу)

Глицериды

65-70

Вид и концентрация коагу- , лянта

Соотношение пахта:кислота

Отделение осадка

Соотношение хлороформ - метанол при экстракции

Вьщеление фосфолипидов

36%-ная 35%-ная 98%-ная 100%-ная 36%-ная 35%-ная НС1 НС1 уксусная уксусная НС1 НС1

1:0,0018 1:0,0022 1:0,0023 1:0,001 1:0,0018 1:0,0022

Центрифу- Фильтро- Центрифу- Фильтро- Фильтро- Центрифугирование вание гирорание вание ванне гирование

1:1,5

1 :2

1:2

1:2

1:1,5

1:2

Осаждение Осажде- Осаждение Осажде- ацетоном ние аце- ацетоном ние ацетономтоном

Колоноч- Колоночная хро- ная хро- матогра- матогра- фйя фия

1 :2

1:3

65

63

31-42

3-5

40-60

1:2

1:2

1:1,5

1:2

Колоноч- Колоночная хро- ная хро- матогра- матогра- фйя фия

1:2

1:3

3:1

3:1 ,5

55

57

88

91

Изобретение относится к пищевой фармацевтической промышленности и может быть использовано при получении фосфолипидов из сырья животного происхождения, которые применяются при производстве лекарственных и косметических средств, кормовых и пищевых добавок, а также в качестве реагентов для научных исследований. Целью изобретения является увеличение выхода фосфолипидов. Для получения фосфолипидов перед экстракцией в пахту вводят минеральную или органическую кислоту с соотношением пахты и кислоты (1:0,001 - 1:0,0023). Экстракцию липидов из осадка проводят смесью хлороформа и метанола в соотношении (I:1,5)-(1:2) двукратно на холоду (0-4 С) с последующим выделением фосфолипидов из экстракта :при соотношении экстракта и ацетона