Способ получения пептидной фракции кумыса,обладающей иммуностимулирующим действием Советский патент 1989 года по МПК A61K38/01 A61K35/20 

1 12955572

Изобретение относится к медищше,30-40°С до объема 15 мл. Выделенная

в частности к способам получения бис-пептидная фракг ия представляет собой

логически активных веществ, обладаю-опалесцирующую жидкость желтоватого

щих иммуностимулирующим действием.цвета и имеет элементный состав %:

Способ осуществляется следующим 5С 33,64; Н 6,01; N 2,80; Р 8,56;

образом.О остальное,, Основные полосы ИК-спектПример 1. 50 мл кумыса из ко-ра, , раствор в диметилмульфоровьего молока и отходов сыродельчес-ксиде; 3400 с, 3000 ср, 2950 ср,

кой промышленности - подсырной сыво-2150 ел, 1680 с, 1250 ел, в УФ-спектротки центрифугируют при 10000 об/мин fOре: 226 и 280 нм в водном растворе.

(6500 g) в течение 10 мин. Затем над -Молекулярная масса 500-4000. Вещестсадочную жидкость хроматографируют во дает положительную реакцию на нинна геле Molselect G-75 (ВНР), (колон гидрин и биурет.

ка 0,8 м X 0,05 мп, 450 мл геля). Элю-

ируют 0,9%-ным раствором NaCl. Петек- 5

„При исследовании влияния пептидцию пептидной фракции проводят спект-„ ,..

.. м к„ НОИ фракции на пролиферативную активрофотометрически при 280 нм. Собирают.j.

, .„ - ность лимфоцитов периферической крови

АОО мл пептидной фракции и упаривают

i-у морских свинок берут 1 мл крови при пониженном давлении на вакуумном.

Г., , о„--тиз сердца в стерильные пробирки без

испарителе при 30-40 С до объема/и .п -

...„,консерванта, 0,3 мл крови культивиру15 мл. Выделенная пептидная фракция « ч-к .jQ g Пробирках из нейтрального стекпредставляет собой опалесцирующую.,,, .,

4Jла в общем объеме 5 мл на среде Игла

жидкость желтоватого цвета и имеет,г,,,,-ол

... „ с добавлением 20% сыворотки крупэлементный состав, %: С 37,74; Н 5,69|,..

„ „ „ „. . „ 25ного рогатого скота. Кровь культивиN 2,30; Р 7,14; О остальное. Основные вариантах: 1) нестимули-

полосы ИК спектра, смТ растворрованная контрольная группа; 2) куль- в диметилсульфоксиде: 3400 с. 3000 ср,,.

.J м t-5тура с неспецифическим стимулятором

2950 ср, 2150 ел, 1680 с, 125Q. ел.фитогемагглютинином фирмы Reanal Максимумы поглощения в УФ-области (Венгрнл) в концентра1-.ии 40 мкг/мл; при.226 и 280 нм (в водном растворе),з) культура, стимулированная пептид- Молекулярная масса пептидной фрак-ной фракцией, полученной из кумыса 1ЩИ 500-4000. Вещество дает положи-g концентрации 40 мкг/мл. Через 72 ч тельную реакцию на биурет и нинп-щрин,снимают надосадочную жидкость, ветряПример2. 50мл кумыса, полу- хивают осадок и в каждую пробирку

ченного.из коровьего молока и отхо- .Добавляют по 10 мл 10%-ной уксусной :

дов сыродельческой промышленности -кислоты для гемолиза эритроцитов. Заподсырной сыворотки центрифугируют центрифугируют в течение 10 мин

течение 12 мин при 10000 обДин„р„ 300Q-4000 об/мин, снимают надоса(6500 g). 45 мл надосадочной ж1здкостидачную жидкость, добавляют 5-6 капель

хроматбграфирушт на геле Molselectфиксатора (этанола), ресуспендируют

G-75, элюируют 0,9%-ным растворомосадок и переносят на предметное стекNaCl. Получение химически чистого Мазки, высушивают, окрашивают и

продукта достигается за счет того,проводят подсчет содержания бластов что на хроматографическую колонку на- „а 300-400 клеток. Анализ показывает,

носят 45 МП надосадочной жидкости, пролиферативная активность лимфополученной после центрифугирования стимуляции -пептидной фрак50 МП кумыса. . .j вьше, чем при стимуляПри хроматографировании в резуль- например., фитогемагглготинином.

тате размывания хроматографической стимуляции фитогемагглютинином зоны, получают 400 мл пептидной фрак- количество бластов 19,9±0,269, а при

ШШ, содержащей смесь пептидов с при-стимуляции пептидной фракций 25,01i

веденными характеристиками., стт

Выход пептидных фракций детектиру-

ют спектрофотометрически, сбор фрак- формула изобретения

Ve ции начинают при -- 2,5 (где V,, л. ч.

Vp Способ получения пептидной фракции

объем элюдип фракдаи; V - свободныйкумыса, обладающей иммуностимулируюобъем колонки) . Затем упаривают прищим действием, включающий центрифуги.312955574

рование пробы в течение 10-12 мин при глощения в УФ-спектре 226 и 280 нм 6500 .g, хроматографию на геле Molse- с молекулярной массой 500-4000 и имею- .ect G-7,5, элюцию физиологическим щего следующий элементный состав.%: раствором и получение целевого продук- С 34,50; i:0,96; Н 6,0010,40, та в объеме элюции с максимумом по- 5 Р ,75; О остальное.

Изобретение относится ft медицине, в частности к способам получения биологически активных веществ. Цель изобретения - получение пептидной фракции кумыса, обладающей стимулирующим действием. Кумыс Из коровьего молока и подсырной сыворотки центрифугируют. Надосадочную жидкость хрома- тографируют на геле Molselect G-75. Элюируют 0,9%-ным раствором NaCl. Детекцию -пептидной фракции проводят сп ектрофотометрически. Собирают пептидную фракцию и упаривают на вакуумном испарителе. Выделенная пептидная (Ьракция имеет следующий состав,%: С 37,74; Н 5,69; N 2,30; Р 7,14; О остальное. Максимумы поглощения в УФ- спектре при 226 и 280 нм. Молекулярная масса пептидной фракции 500-4000. Вещество дает положительную реакцию на биурет и нингидрин. О) ю со ел Q1