Способ определения циметидина в плазме крови Советский патент 1987 года по МПК A61K31/4164 A61P7/00 A61P43/00 

1

Изобретение относится к медицине, конкретно к анализу эндогенных и экзогенных веществ в биологических жидкостях.

Цель изобретения - повышение точности способа.

Экстракцию циметидина из плазмы этилацетатом в присутствии сухого карбоната натрия, модифицию циметидина проводят с помощью ДНС-хлорида при рН 6,0, причем переводят дансил- производное в гидрофобный растворитель (бензол) и разделяют хроматографией на силикагеле с помощью смеси хлороформ:ацетон:метиловый спирт :25%-ный аммиак в соотношен1ш 86,9: : 10:3,1:0,05 (по объему) в использванием флуоресцентного детектора.

Способ осуществляется следующим образом. Экстракцию циметидина из плазмы крови проводят этилацетатом в присутствии избытка сухого карбонта натрия, что создает необходимое для перехода циметидина в органический растворитель высокое значение рН и ионной силы, и приводит практически к количественному извлечени препарата. Дансилирование циметидин по остатку имидазола проводят при низком значении рН (рН 6,0), что знчительно уменьшает возможность образования побочных флуоресцирующих веществ, в т.ч. ДНС-пептидов и аминов, переходящих в этилацетат при экстракции из плазмы. Экстракцию ДНС-циметидина из реакционной смеси проводят с помощью неполярнего растворителя-бензола с посх1едующей промывкой бензольного экстракта водным 0,5 М бикарбонатом натрия, что позволяет количественно извлечь ДНС-циметидин с минимальными флуоресцирующими примесями. Разделение хроматографией на силикагеле проводят смесью хлороформ:ацетон:метилов спирт:25%-ный аммиак в соотношении 86,9:10:3,1:0,05 (по объему) с использованием флуоресцентного детектора.

Пример 1. Изучение фармако- кинетики циметидина при внутривенно введении препарата.

Больной Т., 47 лет, поступил в гродскую больницу с диагнозом язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки. Больному вводили в локтевую вену 200 мг циметидина (фирма Orion Финляндия) в 5 мл 0,9%-ного раство

O

15

0

25

30

35 I

40

45

50

55

ра NaCl внутривенно, струйно. Забор крови производили из локтевой вены другой руки с помощью катетра (фирма Vygon, Франция) через следующие временные интервалы: 5,10,15,30,60, 120,240,300 и 360 мин. Кровь центрифугировали при 3 тыс.об./мин. Плазму отбирали и хранили при . К 1 мл плазмы добавляли сухой карбонат натрия до насыщения (150мг) и 2 мл этилацетата. После 5-минутного встряхивания смесь центрифугировали и 1,5 мл этилацетатного экстракта, упаривали при температуре 50 С в токе азота. К сухому остатку добавляли 0,2 мл 0,17 М фосфатного буфера (рН 6,0) и смесь инкубировали при 37°С в течение 30 мин. Дан- силциметидин экстрагировали 1,5 мл бнзола при сильном встряхивании. Водную и органическую фазы разделяли центрифзггированием, бензольный экстракт промывали 0., 5 М раствором карбоната натрия и водой (по 0,2 мл). 1 мл бензольного раствора ДНС-циметидина упаривали при 50 С в токе азота. Сухой остаток растворяли в 0,5 мл подвижной фазы и аликвоту (50 мкл) наносили на колонку хроматографа. Определение дансилциметидина проводили на жидкостном хроматографе фир- №1 Altex с инжектором на 50 мкл и колонкой с необращенным силикаге- лем фирмы Partisil PXS 5/25 (250x4,6мм) Подвижной фазой служила смесь хлороформ: ацетон:метиловый спирт:25%-ный аммиак в соотношении 8,6:10:3,1: :0,05 (по объему). Скорость элюции 1 m/мин, скорость ленты на самописце 20 см/ч. Детекцию проводили с помощью флуорим:етра фирмы Gilson (рабочая область лампы 300-600 нм), range 5-10.

Среднее значение коэффициента детерминации, найденное для процесса распределения лекарственного средства в крови (обследовано -12 больных), составило 0,9774, а для процесса элиминации 0,9533.

Элиминация циметидина при внутривенном введении:

Время, мин Концентрация,

мкг/мл

О 5

10 15

9,65 6,90 4,83

2,76 1,66 1,15 0,57 0,43 0,28

Элиминация циметидина при оральном введении:

,мин

Концентрация мкг/мл

1,0

1,79

1,52

1,58

1,41

0,45

0,29

0,19

0,16

П р и м е р 2, Изучение фармако- кинетики диметидина при оральном введении.

Через сутки после внутривенного введения тому же больному вводили через рот 400 мг циметидина (фирма Orion, Финляндия). Забор крови производили из локтевой вены с помощью катетра (фирма Vygon, Франция) в следующие, временные интервалы: 15, 30, 45 мин, 1,2,3,5,6 и 7 ч. Дальнейшая обработка крови и анализ проводились точно также, как описано в примере № 1. Результаты определения концентраций циметидина в крови представлены в таблице. Среднее. значение коэффициента детерминации, найденное для процесса элиминации лекарственного средства из организма при оральном введении препарата (обследовано 12 больных), составило 0,9534.

Редактор М.Товтин

Составитель Л.Пашук Техред М.Ходанич

Заказ 648/8 Тираж 596Подписное

ВНЮШИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул.Проектная, 4

Ю

2961674

Способ позволяет проводить анализ циметидина в плазме крови с линейной зависимостью между высотой пика на хроматограмме и концентрацией в кро- 5 ви в пределах 0,05-10 мкг/м, что соответствует концентрациям, наблюдаемым в крови при лечении больных дан-- нын препаратом при любом способе введения. Среднее квадратичное отклонение метода составляет менее 5%. В способе линейность в соотношении концентрация лекарственного средства в плазме - высота пика на хром атограмме соблюдается в диапазоне 50-10000 нг/мл, т.е. диапазон концентраций шире чем в прототипе (30- 700 нг/мл) и охватывает интервал концентраций наблюдаемых у больных от О до 12ч после введения препарата, при оральном и внутривенном введении.

Формула изобрет-ения

15

20

Способ определения циметидина в плазме крови путем экстракции органи- у;ескими растворителями с последующим разделением на силикагеле жвд- костной хроматографией, о т л и ч аю щ и и с я тем,что, с целью повышения точности способа, экстракцию из плазмы проводят этилацетатом в присутствии сухого карбоната натрия, перед хроматографией цимитидин модифицируют дансилхлоридом при рН 6,0, переводят дансилпрои-зводное в бензол, хроматографическое разделение на силикагеле проводят смесью хлороформ: :ацетон:метиловый спирт:25%-ный

раствор аммиака в соотношении 86,9: :10:3,1:0,05, а определение содержания целевого продукта проводят с использованием флуоресцентного детектора.

Корректор С.Черни

Изобрете1ше относится к области медицины, к анализу эндогенных и экзогенных веществ в биологических жидкостях. С целью повышения точности определения экстракцию циметиди- на из плазмы крови проводят этилаце- татом в присутствии избытка сухого карбоната натрия. Дансилирование циме- тидина по остатку имидазола проводят при рН 6. Экстрагируют бензолом, промывают 0,5м бикарбонатом натрия и хроматографируют. Разделение на с -шикагеле проводят смесью хлороформ: ацетон: метанол :25%-ный растзор амг-шака в соотношении 86,9:10:3 1 г :0,05 (по объему). Определение содер-. жания целевого продукта проводят с помощью флуоресцентного детектора. ю со CD Nui О5