ТОМ аммония в среде метанола или изопропанола при условии, что, когда R,, ацетил, используют изопропанол, при комнатной температуре с последующим восстановлением цианборгидридом щелочного металла или каталитическим восстановлением с использованием палладия на угле или никеля Ренея в водороде, и в случае необходимости, когда R Q и Rg вместе О II - С - , гидролизом в воде и диэтиловом эфире. Целевой продукт выделяют в свобод ном состоянии или в виде соли. Хотя на моль кетона необходимо ис пользовать один моль ацетата аммония предпочтительно использовать десятикратный избыток его для обеспечения полного и быстрого образования имина Столь большие избыточные количества почти не влияют на качество целевого продукта. Что касается количества восстанав ливающего агента, используемого на моль кетона, то предпочтительно использовать около двух молей цианбор гидрида натрия на один моль кетона. Время реакции изменяется в зависимости от концентрации, температур при которой проводят реакцию, и характеристической вязкости реагентов При комнатной температуре (наиболее предпочтительной температуре реакци реакция практически полностью завер шается за 1-Зч. Предпочтительно использовать в качестве растворителя для реакции изопропанол. При отделении целевых производных if -деокси-V -аминоэритромицина А из неосновных, побочных продуктов или исходных соединений, как преимущество используют основной характер конечного продукта. Соответственно, водный раствор продукта экст гируют в интервале постепенно возрастающих величин рН, так что нейтральные или неосновные материалы экстрагируются при более низких значениях рН, а сам продукт экстрагируется при значениях рН, превышающих 5. Растворитель для экстракции, либо этилацетат, либо диэтиловый эфир, вымывают солевым раствором и водой, сушат над сульфатом натрия и после удаления растворителя получают целе вой продукт. В случае необходимости можно провести дополнительную очист ку с помощью колонной хроматографии на силикагеле в соответствии с известными методиками. Восстановление иминов можно также осуществлятьс применением водорода и соответствующего катализатора гидрирования. Последний можно использовать в различных количествах в зависимости от того, как бьютро следует провести реакции. Достаточно эффективно можно использовать такие количества катализатора, как 10-200 вес.% от веса соединения 11 . Давление газообразного водорода в реакторе гидрирования также влияет на скорость реакции. Для обеспечения обычного времени протекания реакции предпочтительно использовать первоначальное давление в 3,5 кг/см . Предпочтительно также для удобства проводить восстановление при температуре окружающей среды. Время реакции зависит от многочисленных факторов, в число которых входит температура, давление, концентрация и характеристические вязкости реагентов. Если реакцию проводят в указанных условиях, то она завершается за 12-2 ч. Примерами кислот, которые дают фармацевтически-приемлемые соли являются соляная, бромистоводородная, йодистоводородная, азотная, серная, сернистая, фосфорная, уксусная, молочная, лимонная, винная, янтарная, малеиновая, глюконовая и аспарагиновая кислоты. Когда соединения II превращают в амины с помощью описываемого про-р цесса, возможно образование двух эпимерных аминов. На практике замечено, что оба эпимерных амина присутствуют в конечном продукте в различных соотношениях в зависимости от выбранного способа синтеза. Если выделенный продукт содержит преимущественно один из эпимеров, то указанный эпимер можно очистить путем повторной перекристаллизации из подходящего растворителя до получения продукта с постоянной точкой плавления. Хотя указанную смесь эпимеров можно разделить с помощью известных способов, из практических соображений выгодно использовать указанную смесь в том виде, как ее выделили из реакции. Однако часто бывает выгодным очистить смесь эпимеров с 5 помощью по крайней мере одной перекристаллизации из соответствующего растворителя, а затем очистить с помощью колонной хроматографии высокого давления, распределения между растворителями или растирания в соответствующем растворителе. Ука занная очистка, если нет необходимости в разделении эпимеров, приводит к удалению исходных соединений и побочных нежелательных продуктов Оба эпимера указанного соединени обладают одним и тем же типом активности, т.е. являются антибактери альными агентами. Новые прбизводные Ц -деокси- -аминоэритромицина А, согласно изоб ретению, демонстрируют in vitro активность против различных грам-поло жительных микроорганизмов, наприме Staphylococcus aureus и Streptococcu aureus, и против некоторых грам-отрицательных микроорганизмов, наприме сферической или эллипсоидальной фор мы (кокки). Их активность легко прод монстрировать при in vitro испытания против различных микроорганизмов в сердечно-мозговой вытяжке в качестве среды с помощью обычной методики двухкратного серийного разбавления. Их активность In vitro делает их полезными при наружном применении в ви де мазей, кремов и т.п., для целей стерилизации, например предметов в комнате больного, и в качестве промышленных антимикробны препаратов, например при обработке воды, слизистых поверхностей для предохранения красок и дерева. Кроме того, многие соединения изо бретения и их соли присоединения кис лоты являются активными против грамположительных и некоторых грам-отрицательных микроорганизмов, например PasfeureBba muEfocida и Neisseria sicca in vivo при оральном и/или парэнтеральном приеме или введении животным и человеку. Их in vivo активность более ограничена с точки зрения чувствительности организмов и ее определяют с псмощью обычной методики, которая включает инфицирование мышей практически одинакового веса тестовым организмом и соответственную обработку их при оральном или подкожном введении тестовых соединений. Ка практике десяти мышам сделаны внутрибрюшинные прививки подходящих 226 разбавленных культур, содержащих приблизительно от одной до десяти (низшая концентрация организмов. Приводящая .к ЮО -ному летальному исходу). Одновременно проводят контрольные тесты, в которых мышам делают прививки более сильно разбавленных культур, как проверку на возможные вариации в.вирулентности тестовых организмов. Тестовое соединение вводят через полчаса после инокуляции и повторяют спустя jjZ и kB ч. Выживших мышей выдерживают еще в течение k дней после последней обработки и подсчитывают число выживших особей. При применении in vivo эти новые соединения можно принимать орально или парэнтерально, например при подкожных и внутримьниечных инъекциях в дозах, составляющих от около 1 мг/кг до около 200 мг/кг живого веса в день. Желательнай дозировка составляет от около 5 мг/кг до около 100 мг/кг живого веса в день,и предпочтительным интервалом является интервал доз от около 5 мг/кг до около 50 мг/кг живого веса в день. Растворителями, пригодными для порэнтеральных инъекций, могут служить такие водные среды, как вода, изотонический солевой раствор, изотоническая декстроза, раствор Рингера, или такие неводные среды, как жирные масла растительного происхождения (хлопковое масло, масло земляного ореха, кукурузное масло, кунжутное масло), диметилсульфоксид и другие неводные растворители, которые не влияют на терапевтическую эффективность препаратов и не токсичны в используемых объемах или пропорциях (глицерин, пропиленгликоль, сорбит) Кроме того, успешно могут быть приготовлены композиции для быстрого приготовления растворов непосредственно перед применением. Такие композиции могут включать жидкие разба- . вители, например пропиленгликоль, диэтилкарбонат, глицерин, сорбит и т.д., буферные агенты, гиалуронидазу, местные анестезирующие средства и неорганические соли для того, чтобы придать желательные фармацевтические свойства. Эти соединения можно также комбинировать с различными фармацевтически приемлемыми инертными носителями, вклочающими твердые разбавители, водные среды, нетоксичные pj ганические растворители в форме капсул, таблеток, сухих смесей, суспензий, растворов, эликсиров и парэнтеральных растворов или суспензий. Эти соединения используют в различных до зировках, причем уровень концентраци меняется от 0,5 до около 90 по весу от всей композиции. Пример. 6,9 полукеталь 11-ацетил-V -деокси- | -аминоэритромйцина А. К перемешиваемому раствору 4,4 г 6,9 полукеталя 11-ацетил 4 -деокси-4 -оксоэритромицина А и 4,38 г ацетата аммония в 75 мл метанола добавляют 305 мг 85%-ного цианборгидри да натрия. После перемешивания в течение ночи при комнатной температуре реакционную смесь выливают в 300 мл воды, к которой затем добавляют 250 мл хлороформа, рН водного слоя устанавливают равным 9.8 и слой хлороформаотделяют. Затем водный слой снова экстрагируют хлороформом и хлороформн 1е экстракты объединяют, сушат над сульфатом натрия и концентрируют до получения белой пены. Оставшуюся пену растворяют в перемешиваемой смеси 125 мл воды и 125,мл свежего хлороформа, и рН смеси доводит до 4,Э- Хлороформ отделяют и сли вают, рН водного слоя доводят до 5,-6, 7 и 8, причем после установления каждого значения рН осуществляют экстракцию свежим хлороформом. Экстракты из водных фаз с рН 6 и 7 объединяют, промывают насыщенным солевы раствором и сушат над сульфатом натрия. После удаления растворителя получают 1,72 г целевого продукта в ви де белой пены. Продукт растворяют в минимальном количестве диэтилового эфира и затем обрабатывают гексаном до помутнения. Образующийся при этом кристаллический 6,9-полуацеталь 11-ацетил-4 -деокси-V-аминоэритромицина А отфильтровывают и сушат; выход 1,33 г, т.пл. 204-206,5°С. ЯМРМП (S, СОСЕз): 3:31 (2Н)с, 3,28(1Н)с, 2,31(6Н)с, 2,11 (ЗН)с и 1,5(3H)s., П р и м е р 2. 1. Сложный 11-12-карбонатный эфир 6,9-полукеталя 4 -деокси-4 -аминоэритромицина А. А. К 189 г сложного 11,12-карбонатного эфира 6,9-полукеталя 4 -деокси-4 -оксоэритромицина А в 1200 мл 2 метанола при комнатной температуре добавляют при перемешивании 193 г ацетата аммония. Спустя 5 мин полученный раствор охлаждают до около -5°С и обрабатывают 13,4 г 85%-ного цианоборгидрида натрия в 200 мл метанола на протяжении периода добавления 45 мин. Охлаждающую баню удаляют и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Затем реакционную смесь упаривают в вакууме до объема 800 мл и добавляют к перемешиваемой смеси 1800 мл воды и 900 мл хлороформа. рН устанавливают от 6,2 до 4,.3 с помощью 6 н соляной кислоты и отделяют хлороформный слой. Хлороформ объединяют с 1 л воды, и рН устанавливают 9,5- Отделяют органическую фазу, сушат над сульфатом натрия и концентрируют при пониженном давлении, получая 17,4 г белой пены. Остаток растворяют в смеси 1 л воды и 500 мл этилацетата и рН устанавливают Отделяют этилацетатный слой и рН водного слоя устанавливают последовательно 5,7 и 9,5 причем экстрагируют после каждого установления рН 500 мл свежего этилацетата. Этилацетатный экстракт при рН 9,5 сушат над сульфатом натрия и концентрируют в вакууме досуха, в результате чего получают 130 г. 120 г оставшейся пены растворяют в смеси 1 л воды и 1 л хлористого метилена и рН водного слоя устанавливают 4J4, 4,9 и 9,4 последовательно, причем после каждого установления рН осуществляют экстракцию свежей порцией 1 л хлористого метилена. Экстракт хлористого мети-° лена при рН 9,4 сушат над сульфатом натрия и концентрируют при пониженном давлении, в результате чего получают 32 г продукта в виде белой пены. После кристаллиза.ции из 250 мл смеси ацетон - вода (1:1 объемное соотношение) получают 28,5 г кристаллических эпимеров сложного 11 ,12-карбонатного эфира 6,9-полукеталя 4 -деокси-4 -аминоэритромицина А. ЯМР 100МГц (S, CDCE9):5,20 (1Н)м, 3,37(1.5Н)с., 3,34(1,5Н)с, 2,3б{6н)с, 1 ,66(ЗН)с и 41 (ЗН)с. В. Разделение эпимеров 11,12-карбоната 6,9-полукеталя 4 -деокси-4 -аминоэритромицина А. На колонку для жидкостной хроматографии высокого давления, заполненную силикагелем GF 254, пропитанным формамидом, и элюируемую хлороформом помещают 200 мг 11,12-карбоната 6,9 полукеталя Ц -деокси- -аминоэритромицина Л. Под давлением 16,9 кг/см (2 0-фунт/ка.дюйм) при скорости 4,7б см/мин собирают фракции по 10 мл каждая. Собирают фракции с Н по 21 и с 2 по 36. Фракции с Itt по 21 объединяют и концентрируют до около 50 мл. Зате добавляют воду (50 мл)и величину рН устанавливают . Отделяют хлоро формный слой, сушат над сульфатом на трия и концентрируют, в результате чего получают 106 мг белой пены. Рас тирание с диэтиловым эфиром приводит к тому, что пена кристаллизуется. После перемешивания при комнатной температуре в течение 1 ч кристаллический 11,12-карбонатный эфир 6, укеталя 4 -диокси-4 -аминоэритромицина А фильтруют и сушат , выход 31,7 мг, т.пл. 19t-196°C. ЯМР 100 МГц (S, СОСез):Б,2 (1Н)д 5,00(lH)t, 3,(ЗН)с, 2,)с, .1,66{ЗН)с и 1,(ЗН)с. С. 8,г эпимерной смеси сложного 11,12-карбонатного эфира 6,9-полукеталя V-деокси-Ц -аминоэритромицина А от стадии А примера 2 растворяют в 50 мл диэтилового эфира. Продук заставляют кристаллизовываться, соскребая его стеклянной палочкой. Спус тя 20 мин перемешивания, кристаллический продукт отфильтровывают и сушат, в результате чего получают 1,91 вещества, т.пл. 198,5-200°С. ЯМР 100 МГц (S, ):3,2б(ЗН)с, 2,30{6Н)с, 1,б1(ЗН)си 1,М5(ЗН)с. Данные ЯМР указывают на то, что кристаллический продукт является одним эпимером сложного 11,12-карбонат ного эфира -деокси-Д-аминоэритромицина А и идентичен кетону, полученному в примере 3 В. И. 1 г эпимера 11,12-карбоната 6,9 полукеталя V-деокси-Ц -аминоэритромицина А из примера 2 С растворяют в 20 мл ацетона и нагревают на паровой бане до достижения точки . кипения. Добавляют 25 мл воды и полученный раствор оставляют при перемешивании при комнатной температуре на ночь.Спустя 1ч перемешивания об разовавшийся осадок отфильтровывают и сушат в результате чего получают 581 мг продукта с т.пл. 1 7-1t9 C. ЯМР 100 МГц {5СОСе):5.12(1Н)д, 2 3,30(ЗН)с, 2,0(6Н)с, 1,б2(ЗН)с и 1,Зб(ЗН)с. Эти данные ЯМР показывают, что продукт представляет собой один эпимер 11,12-карбонатного сложного эфира 6,9-полукеталя -деокси- -аминоэритромицина А. П р и м е р 3. А. К суспензии 11,1 г 11,12-карбоната 6,9-полукеталя 2-ацетил-4 -деокси- -оксоэритромицина А в 300 мл изопропанола при комнатной температуре добавляют при перемешивании 10,7 г ацетата аммония. Спустя 5 мин добавляют в течение 30 миИ У мг цианборгидрита натрия в 130 мл изопропанола и полученную реакционную смесь оставляют перемешиваться при комнатной температуре в течение ночи. Бледно-желтый раствор выливают в 1100 мл воды, к которой затем добавляют 00 мл диэтилового эфира. рН устанавливают равным Ц,5 и отделяют эфирный слой. Водный слой подщелачивают до рН 9,5 и экстрагируют ( мл) хлороформом. Экстракты хлороформа об-ьединяют, сушат над сульфатом натрия и концентрируют, в результате чего получают 7,5 г желтой пены. После перекристаллизации остатка из диэтилового эфира получают 1,69.г которые оставляют вместе с маточными растворами.. Маточный раствор обрабатывают 75 мл воды и рН устанавливают рввным . Эфирный слой заменяют 75 мл свежего эфира и рН устанавливают равным 5,. Эфир заменяют этилацетатом и рН поднимают до 10,0. Подщелаченный водный слой экстрагируют. (ZJs75 мл) этилацетатом и первый этилацетатный экстракт .сушат над сульфатом натрия и концентрируют досуха. Оставшуюся; пену (1,96 г) добавляют к смеси 75 мл воды и 50 мл диэтилового эфира и рН устанавливают 5,05. Эфир отделяют и рН водного слоя устанавливают последовательно равным 5, . 6,0, 7,05 и 8,0, причем после каждого установления рН осуществляют экстракцию 50 мл свежего диэтилового эфира.. Наконец, рН устанавливают 9,7 и вбдный слой экстрагируют 50 мл этилацетата. Эфирный, экстракт, полученный при оН 6,0, соединяют с 75 мл воды и рН устанавливают 9,7О.тделяют эфирный слой, сушат и концентрируют в вакууме, в результате чего получают 6Q мг белой пены. 11 ЯМР 100 МГц (S, eOC(i):5,20(lH)f, 3.f3(2H)c, 3,0{1Н)с, 2,38(6Н)с, 2,16(ЗН)с, Ь70(ЗН)е и 1,5(ЗН). Поданным ЯМР полученный продукт представляет собой смесь эпимеров 11 ,12-кар6оната 6,9 полукеталя 2 -ацетил-4 -деокси- -аминоэритромицина А. 1,б9 г вещества, полученного вы растворяют в смеси 75 мл воды и 75 мл диэтилового эфира и рН устанавливают равным 4,7. Эфир отделяю Идалее водный слой экстрагируют с жим эфиром (75 мл) при рН и этилацетатом (2x75 мл) при рН 9(7. Об диненные этилацетатные экстракты сушат над сульфатом натрия и концентрируют при пониженном давлении в результате чего получают 1,26 г белой пены. После кристаллизации остатка получают til мг продукта, т.лл. 193-19бс (с разложением). Маточный раствор концентрируют досуха, а остаток растворяют в горячем этилацетате. Раствор оставляют выстаиваться на ночь при комнатной температуре. Кристаллическое тверд вещество, которое осаждается, отфильтровывают и сушат, и получают 182 мг дополнительного продукта, т:пл. 19S-202°C (с разложением). ЯМР 100 МГц (S,CDCE5) :5,10(1Н)т, 3,3(2Н)с, 3,30(1Н)с, .2,30(6Н)с, 2,08(ЗН)с, 1,б2(ЗН)с и l,«}8(3H)c. Эти данные ЯМР указывают на то, что продукт является смесью эпимеров 11,12-карбоната 2-ацетил- -деокси-i -аминоэритромицина А. В. Раствор lOO мл 11 ,12-карбона та б.ЭПОлукеталя 2-ацетил-V-део си-4 -аминоэритромицина А в 20 мл метанола перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Ре акционный раствор выливают в 100 м воды, после чего добавляют 50 мл этилацетата. Величину рН устанавли вают и отделяют органическую фазу. Экстракцию повторяют, исполь 50 мл свежего этилацетата. Объедине ные этилацетатные экстракты сушат сульфатом натрия и концентрируют, результате чего получают 392 мг бе пены. Растирание с диэтиловым эфир и соскребание стеклянной палочкой вызывает кристаллизацию. После выс вания при комнатной температуре в течение 30 мин, образовавшееся кристаллическое вещество отфильтро вывают и сушат, получают 123 мг ве 2 . 12 ства-, а маточный раствор сохраняют. Продукт оказался идентичным по спектру ЯМР материалу, полученному в примере 2С. ЯМР 100 МГц (3,СОСЕгз) :3,2б(ЗН)с, 2,32(6Н)с, 1,б1(ЗН)си 1,(3H)c. Данные ЯМР указывают на то, что кристаллический продукт является одним эпимером 1 1 , 12-карбоната k -деокси- -аминоэритромицина А. Маточный раствор концентрируют в вакууме, в результате чего получают мг белой пены. Полученный продукт идентичен продукту, полученному в примере 2 А, Данные ЯМР указывают на то, что Продукт является смесью эпимеров 11 ,,12-карбоната 6,9-полукеталя 4 -деокси-} -аминоэритромицина А и что он идентичен продукту, полученному в примере 2а. П риме р k. k -деокси- -аминоэритромицин А. 20 г (-деокси- -оксоэритромицина А, г ацетата аммония и 10 г 10%-ного палладия на угле в 200 мл метанола встряхивают при температуре окружающей среды в атмосфере водорода при начальном давлении 3,5 кг/см (50 фунт/кв.дюйм) в течение ночи. Отработанный катализатор отфильтровывают и фильтрат концентрируют досуха в вакууме. Остаток распределяют между смесью вода - хлороформ при рН 5,5. Водный слой отделяют, рН устанавливают 9.6 и добавляют хлороформ. Отделяют органический слой, сушат над сульфатом натрия и концентрируют при пониженном давлении досуха. Остаточную белую пену (19 г) , растирают со 150 мл диэтилового эфира при комнатной температуре в течение 30 мин. Полученное твердое вещество отфильтровывают и сушат, в результате чего получают 9,5 г. одного эпимера 4 -деокси- -аминоэритромицина А, т.пл. ио-Й7 С. Диэтиловый фильтрат концентрируют. досуха, в результате чего получают 6,89 г продукта, который состоит из второго эпимера Ц -деокси-it -аминоэритромицина А и некоторого количества примесей. П р и м е р 5- -деокси-+-аминоэритромицин А. 2 г V-деокси- -оксоэритромицина А, 3,1 г ацетата аммония и 2,0 г никеля Ренея в 50 мл метанола встряхивают при комнатной температуре в атмосфере водорода при начальном давлении 3,5 кг/см (5 фунт/кв. дюй в течение ночи. Затем добавляют до полнительно 3,16 г ацетата аммония и 2,0 г никеля Ренея, и гидрировамие продолжает еще в течение 5 ч. Твердую часть отфильтровывают и 5)ильтрат концентрируют в вакууме досуха. Остаток при перемешивании добавляют к смеси вода-хлорформ и рН устанавливают ,после чего добавляют свежий хлорформ. Хлорофо ный экстракт отделяют, сушат над сульфатом натрия и концентрируют п пониженном давлении, в результате чего получают 1,02 г 4-деокси-+-ам ноэритромицина А в виде желтой пен Преимущественный изомер имеет конфигурацию в положении , противоп ложную той, которая наб/водается дл соединения примера 4. Формула изобретения Способ получения производных 4 -деокси- -аминоэритромицина А общей формулы 1J(CH5)2 «v г RsO О BjO-t « М. где R и RIкаждый- водород или ацетил; R ij г водород или Rq вместе - О ; R - ОН, а Rj означачает связь с атомом углерода, к кот рому присоединен R, или R4 кисло род, а Rg - водород, при условии, 221 что, если водород, то и R5 8° дород, или их солей ,отличающийс я тем, что соединение общей формулы IftCHjb )-ЛоЛ ВяО 4 0«//хОч « Х где R5 имеют указанные значения, подвергают взаимодействию с ацетатом аммония в среде йетанола или изопропанола при условии, что, когда R-( - ацетил, используют изопропанол, при комнатной температуре и восстанавливают цианборгидридом щелочного металла или каталитически с использованием палладия на угле или никеля Ренея в качестве катализатора с последующим в случае необходимости, когда R(и R , вместе - О , гид(юлйзом в воде и диэтиловом эфире и выделением целевого продукта в своодном состоянии или в виде соли. Приоритет по признакам: 0,02.77 восстановление осущетвляют цианборгидридом щелочного еталла. 01.12.77 осуществляют каталитическое восстановление. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Borch Bernstein. Durst. Cyanohydridoborate Anion as a selective Reducing Agent. -Jt, m. Chem. Soc. 2897, 1971.
