Способ получения сесквитерпеновых производных или их солей Советский патент 1983 года по МПК C07D307/94 A61K31/343 A61P13/12 A61P17/00 A61P29/00 A61P35/00 A61P37/00 A61P37/08 C07D493/02 

который является характеристическим сигналом лакто;а. Интегральное соотношение -первого пика ко второму составляет примерно 73:27. Через 2 после растворения пик при 9,89 млн. дол. несколько увеличивается, интегральное соотношение пико достигает примерно 70:30. Такое интегральное соотношение достигается через 2 ч после растворения, едва изменяясь после этого. Этот результат показывает что соединение (ГЪ;,) и соединение (Ib) находятся в равновесной смеси 7:3 в указанном растворителе. При. использовании в качестве растворителя метанола или пи ридина подобный ЯМР-спектроскопический анализ не приводит к конформаци соединения () , которое является таутомером соединения (1Ъ.| ) .

П р и ,м е р 1. Растворяют 2,1. г нитрата серебра в 1 мл воды и прибавляют 3,5 мл 5,8 М водного .раствора гидроокиси натрия. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 20 мин. Затем прибавляют раствор 1,0 г 6,7-дйокси-2,5, 5,8атетраметил-1, 2, 3, 4, 4а, 5, 6., 7, 8, 8аг-декагидронафталин-1-спиро-2(6,-7-диформил-4-окси-2, 3-дигидробензофурана ) в 2 мл этанола. Реакционную смесь перемешивают при Комнатной температуре в течение 1,5 ч, устанавливают рН равным, .примерно, 2 с помощью 2 н. соляной кислоты. Реакционную смесь экстраги .руют таким же количеством по объёму этилацетата, отгоняют растворитель из экстракта при пониженном давлении. Остаток очищают хроматографией на колонке с силикагелем (ей.ликагель WaKo С-200), элюентом является смесь хлорофррм-этил-ацета уксусная кислота 100:50:2 (по объему). Собирают фракцию, соответствующую Rf 0,37 при тонкослойной хроматографии, используя смесь этил ацетат-хлороформ-уксусная кислота в объемном соотношении 50:50:2 в качестве проявляющего агента, или фракцию, соответствующую R 0,71 при тонкослойной хроматографии с использованием смеси бензол-бутанолуксусная кислота в объемном соот-ношении 60:15:1 в качестве проявлягацего агента. Выпариванием растворителя из фракции получают 700 мг 4,6-диокси-8-оксо-2,3, 6, 8-тетрагндрофуро-(3,4-о)-бeнзoфypaн-2cшIpo-l.-(6 , 7-диокси-2, 5, 5|-8-тетраметил-1, , 4, 4а, 5, 6, 7, 8, 8а-декагидронафталина в виде светло-желтых аморфных кристаллов.

б.|з°-44,8°/. С 0,9, метанол) Элементный анализ для С зНзоО. Вычислено, %:: С 66,03; Н 7,18.

Найдено, %: б 65,93; Н 7,21.

() ЯМР - анализ проведен с использованием СД,ОД (Д55) в качестве растворителя.

(ii) ЯМР - анализ проведен с использованием пиридина d (Две) в качестве растворителя.

(iii ) ЯМР - анализ проводят через 2 ч и через 63 ч после растворения (ЯМР - спектры через 2 .ч и через 63 ч после растворения согласуются друг с другом).

В качестве растворителя используют диметилсульфоксид

Условия измерения при получении ЯМР - спектра следующие:

Спектральная...

амплитуда9-100 5Г100 8«ДОО

Фильтр, С0,10/1 0,4

Рр мощность,Q0,05 0,05 0,05 Время развертки,

мин555

1 ирина развертки,

млн. дол.101010

Конец развертки , млн.дол,.000

I

Пример 2. Суспендируют 0,64 г окиси серебра в 1 н. водном растворе гидроокиси натрия и прибавляют при перемешивании при комнатнСй температуре 1,0 г 6,7-диокси2,5, 5, 8а-.тетраметил-1, 2, 3, 4, 4а, 5, 6, 7, 8, 8а-декагидронафтаЛИН-1-СПИРО-2-(6, 7-диформил-4окси-2 , 3-дигидробензофуран.а) . Смесь перемешивают при этой же температуре в .течение 1 ч и промывают осадок 5 раз в 10 мл воды. Объединяют промывные воды и фильтрат и прибавляют концентрированную соляную кислоту (36%) , устанавливая рН 2-3 с последующим охлажден твм до 0-10°С. Собирают выпавшие кристаллы фильтрованием, промывают 5 раз в 10 мл ледяной воды и сушат. : Растворяют сухие пороппсообразные кристаллы в 50 мл этилацетата,. от;Деляют нерастворимый материал фильтрованием. Концентрируют фи.льтрат до объема 5 мл при пониженном давлении К концентрированному раствору приба.ляют 50 Ш1 лигронина, смесь хорошо перемешивают и оставляют охлаждатьс до 0-10°С. Отфильтровывают выпавшие кристал.пы, дважды промывают их 20 м гидронина и сушат, получая 0,01 г 4,6-диокси-8-сксо-2, 3, 6, 8-тетрагидрофуро-(3, 4-0)-бензо-фуран-2- , спиро-1-(6, 7-диокси-2, 5, 5, 8а-тетраметил-1,-2, 3, 4, 4а56, 7, 8, 8а-дакагидронафталина) . Физико-химические свойства пол енного соединения аналогичны приве денным в примере 1. Пример 3. Растворяют 1,0 г 6,7 диокси-2, 5, 5, 8а-тетраметил1,2, 3, 4, 4а, 5, б, 7, 8, 8а-дека гидронафталин-1-спиро-2-(б,7-диформил-4-окси-2, 3дигидробензофу рана) в 50 мл 10%-ного водного раствора гидроокиси натрия и в та г.е время пропускакэт через раствор возд при 50 С. раствор перемешивают в течение 30 мин, подкисляют соляной кислотой до рН 2-3, выпавшие кристал лы отфильтровывают. Кристаллы промы вают io мл холодной воды 5 раз и сушат. Растворяют кристаллы в 50 мл этилацетата и отделяют нерастворимый материал фильтрованием. Обрабатываю фильтрат активированным углем и кон центрируют до объема 5 мл при понижен-1ЮМ давлении. Концентрированный растп вор .. прибавляют к 50 мл лигронина при интенсивном перемешивании. Выпавшие в осадок кристаллы собирают фильтрованием, промывают лигроином и сушат Получают 0,72 г 4,б-диокси-8-оксо2,3, б, 8-тетрагидрофуро-(3, 4-)- бензофуран-2-спиро-1-(6, 7-диокси 2, 5, 5, 8а-тетраметил-1, 2, 3, 4а, 5, б, 7, 8, 8а-декагидронафталина). Физико-химические свойства полученного соединения аналогичны приведенным в примере 1. П р и м е р 4. Растворяют 1,0 г б, 7-диокси-2, 5, 5, 8а-тетраметил1, 2, 3,-4-43-5, б, 7, 8, 8а-декагид ронафталин-1-спиро,2,-(б, 7-диформил-4-окси-2, 3-дигидробензофурана) в 25 мл 1 Н. водного рас-твора гидроокиси калия и прибавляют 50 мл водного раствора 0,578 г перманганат калия частями при перемешивании. После исчезновения окраски перманганата калия прекращают перемешивание Отфильтровывают осадок, используяселлаит в качестве вспомогательного вещества для фильтрования. Фильтрат подкисляют соляной кислотой до рН 2Отфильтровывают выпавшие в осадок кристаллы, промывают 10 мл воды 3 раза и затем сумат. .Высушенные кристаллы растворяют в 30 мл этилацетата. Отфильтровывают нерастворимый материал, фильтрат обесцвечивают и концентрируют при пониженном давлении. К концентрированному раствору прибавляют 50 мл лигроина и перемешивают смесь. Отфильтровывают выпавилие в осадок кристаллы, промывают лигроином и сушат при при пониженном давлении. Получают 0,9 г 4,б-диокси-8-оксо-2 , 3б,. 8-тетрагидрофуро-(3 , 4-g)-бензофу ран-2-спиро-1- (6, 7-ДИОКСИ-2, 5-, 5, 8а-тетраметил-1 , 2, 3, 4, 4а, 5, б, 7, 8, 8а-декагидронафталина (11, Физико-х гмичешские свойства полученного соединения аналогичны приведенным в примере 1. Пример 5. К 5 мл 0,4 н. водного раствора гидроокиси натрия и 5 мл этанола прибавляют 418 мг 4,6-ДИОКСИ-8-ОКСО-2, 3, б, 8-тетрагидрофуро- (3, 4-)-бензофуран-2, спиро-1-(б, 7-диокси-2, 5, 5, 8а-декагидронафталина). Смесь перемешивают при 30-40 0 в течение 30 мин в токе азота. После реакции отгоняют растворитель при пониженном давлении. Остаток сушат, затем и прибавляют туда 10 мл ацетона. Отфильтровывают часть, растворимую в ацетоне. Оставшиеся сырые кристаллы перекристаллизовЕлвают из смеси вода-ацетон. Получают 342 мг динатриевой соли б., 7-ДИОКСИ-2, 5, 5, 8атетраметил-1, 2, 3, 4, 4а, 5, б, 7, 8, 8а-декагидронафталин-1-спиро-2-(7-карбоксилат-б-формил-4-оксид-2, 3-дигидробензофурана в виде светло-желтых аморфныз кристаллов: 44,2°(С -1,25, НгО). Элементный анализ для Вычислено, %:С 59,74; Н 6,10. Найдено, %: С 59,48; Н 5,91. Ультра-фиолетовый спектральный анализ: Н,О 252. нм ( 20500) ,51моисс 330 нм { е 45900). ЯМР-анализ проводят, используя (flSS) в качестве растворителя. Условия ЯМР-измерений следующие: спектральная амплитуда 9-100; время развертки 5 мин; фильтр 0,1 с,ширина развертки 10 м.лн, дол.; PF мощность 0,05 мС; конец развертки О млн.дол. Пример б. Растворяют в 10 мл этилацетата 418 мг 4,6-диокси8-ОКСО-2, З-б, 8-тетрагидрофуро- (3 , 4-)-бензофуран-2-спиро-1-(б, 7 -диокси-2 ,5 ,5 ,8 а-тетраметил-1 ,2 ,2 ,4 ,4 а, 5 , б , 7, 8, 8а-д екагидронафталина) и при перемешивании прибавляют 0,33 моль б н. водного раствора гидроокиси натрия. Смесь перемешивают 10 мин в токе азота. Отфильтровывают выпавшие кристаллы, промывают их три раза 10 мл зтилацетата и сушат. Получают 390 мг динатриевой соли б, 7диокси-2, 5, 5, 8а-тетраметил-1, 2, 3, 4, 4а, 5, б, 7,,8, 8а, декагидронаф алин-1-спиро-2-{7-карбоксилат-б-формил-4-оксид-2, 3-дигидробензофурана ( 1Ь ) в виде светло-желтых аморфных кристаллов. Физико-химические свойства полученного соединения аналогичны приведенным в примере 5. Термин комплемент относится к комплексной группе протеинов в жидкостях тела, которая, работая вместе с антителсши и другими факфорами, играет важную роль как переносчик иммунных, аллергических, иммунохимических и/или иммунопатологических реакций. Реакции, в которых ,участвует комплемент, происходят в сьюоротке крови или в других жидкостях тела и, следовательно, рассмариваются как гуморальные реакции.

Известны соединения, обладающие антикомплементарной активностью, такие как этилендиаминотетрауксусная кислота (ЭДТУК), Сальдокс, флоризин оксибензольные производные, гуанидины и феноксиацетс1миды, фосфонатные эфиры, хлорофиллин, глицирризин и т.п..

Однако эти соединения являются неудовлетворительными для практических целей, так как являются высокотоксичными или обладают низкой антикомплементарной активностью. В настоящее время не имеется коммерчески, доступных антикомплементарных соединений или агентов.

Терапевтические агенты. Полученные сесквитерпеновые производные ;общей формулы (I) и их соли явля ются полезными как препараты для лечения нефрита. В этом случае их вводят в фармацевтические рецептуры вместе с обычными фармацевтическими приемлемыми носителями, которыми являются, например, разбавители или экципиенты, такие как наполнители, расширители, свя-зующие, смачивающие агенты, дезинтеграторы, поверхностно-активные агенты и смазки, которые обычно применяют для приготовления лекарств, зависящих от способа введения единичных форм дезы.

Для лечения могут быть выбраны .в соответствии с целью лечения различные формы дозы и способы введения лекарства как средства лечения нефрита. Типичными формами дозы |являются таблетки, пилюли, порошки, :жидкие препараты, суспензии, эмульсии гранулы, капсулы, свечи и препараты для инъекции жидкости, суспензии, эмульсии и т.п.

При формовании фармацевтического состава в виде таблетки, содержащей сесквитерпеновое производное общей формулы (I) или его соль в качестве активного ингредиента, можно использовать широкий ассортимент известных носителей. Примерами подходящих носителей являются экципиёнтй f лактоза, сахароза, элористый натрий, раствор глюкозы, мочевина, крахмал, карбонат кальция, каолин, кристалл.ическая целлюлоза и кремниевая кислота), связующие (вода, этанол, прогпансл, простой сироп, глюкоза, крахмальный раствор, раствор желатина, карбоксиметилцеллюлоза, шеллак, метилцеллюлоза, фосфат калия и поли

винилпирролидон), дезинтегрирующие агенты (сухой крахмал, альдегид натрия, агаровый порошок, порошок ламинарии, кислый карбонат натрия, Твин, лаурилсульфат натрия, моноглицерид стеариновой кислоты, крахмал и лактоза), ингибиторы дезинтегрирог вания (сахароза, глицериновый эфир стеариновой кислоты, крахмал, масло, какао и гидрированные масла), проматоры абсорбции (четвертичные аммониевые основания и лаурилсульфат натрия задерживающие увлажнение агенты (глицерин и крахмал), абсорбенты .(крахмал, лактоза, каолин, бентонит и коллоидная кремниевая кислота) и смазки (очищенный.тальк, соли стеариновой кислоты, порошок борной кислоты).

При формовании фармадевт1;ческого состава в виде пилюль может быть использован широкий ассортимент известных носителей. Примерами подходящих носителей являются экципиенты (глюкоза, лактоза, крахмал, масло какао, отвержденные. .растительные масла, каолин и тальк), связующие (порошок аравийской камеди, порошок трагаканта, желатин и этанол) и дизентегрируквдие агенты (ламинария и агар). Пилюли и таблетки могут быт покрыты сахаром, желатином, пленкой могут быть покрыты двумя или более слоями.

При формовании фармацевтического состава в виде свечей может быть использован широкий ассортимент известных носителей, например, масло, какао, высшие спирты, сложные эфиры высших спиртов, желатин и поусинтетические глицериды.

Когда из фармацевтического состав готовят препарат для инъекций, полученный жидкий раствор или суспензию предпочтительно стерилизуют и они являются изотоническими по отнЬц1ению к крови. При формулировании фармацевтического состава в виде раствора суспензии или эмульсии могут быть использованы любые известные разбавители, например вода, этанол, пропиленглнколь, этоксилированный изостеарйловый спирт, полиоксиэтиленсорбит и сорбитановые сложные эфиры В терапевтический нефритовый агент могут быть введены хлористый,натрий глюкоза или глицерин в количестве, достаточном для получения изотонических растворов. Кроме того, терапевтический агент может содержать обычные растворимые вспомогательные вещества, /буферы, болеутоляющие аген и консерванты, в некоторых случаях могут быть введены окрашивающие агенты отдушки, ароматизирующие вещес гва, подслащивателии другие ,лекарства. Количество соединения общей форм () или его фармацевтически приемл мых солей, которое в качестве актив ного ингредиента может быть введено в фармацевтический состав, полезный при лечении нефрита, не ограничива ется и может меняться в очень широк пределах. Поигодньм терапевтически эффективным количеством обычно является 1-70% от веса, предпочтитель но 5-50% от веса всего состава. Не имеется особых ограничений по способу применения терапевтического агента как агента для лечения нейри та. Терапевтический агент может быт введен любым способом, пригодным для конкретной формы терапевтическо го агента. Например, таблетки ,пилкши жидкие препараты, суспензии, эмульсии, гранулы и капсулы принимаются орально. Препараты для инъекций вво дят внутривенно одни или вместе с обычными вспомогательными агентами (глюкоза и аминокислоты). Кроме тог если требуется, терапевтический агент может быть введен просто внут римымечнр, внутрикожно, подкожно ил в нутрибрюшинно. Дозировка лекарства для лечения нефрита обычно выбирается в соответствии с целью использования, си птомами и т.п. Дозировка соединения формулы (1 ) 0,5-20 мг/кг веса тела в день, в одной или нескольких дозах. Соединения .формулы (I) обладают антикомплиментарными активностями и являются полезными также как терапевтические агенты для лечения ауто-иммунных болезней, коллагеновых заболеваний и ревматизма. Результаты испытаний .фармакологических действий соединений общей формулы ( I) и их солей. Испытуемое соединение ( 1Ь ) (ди натриевая соль) имеет различные заместители:R,-( (-COONol. Лнтйкомплиментарная активность. измерена и подтверждена с помощью испытательной методики. В частности, в испытуемую-трубку загружали 0,5 мл водной дисперсии каждого из испытуемый соединений, 0,5 мл иммунных частиц (ЕА) , ,.,соде-ржащих 1-10 клеток/мл, 1 мл 5-кратно разбавленного раствора Веронального буферного раствора (GvB ), содер жащего изотонический желатин и 0,5 мл комплементной сыворотки (cj.p. с.), разбавленной в 150 pa3QVP-+ разбавленной жидкостью. Смесь выдерживают нагретой ,до в течени 60 мин. Затем прибавляют 5 мл. охлажденного на льду физиологического солевого раствора. Смесь центрифугируют. Измеряют адсорбцию всплывшего слоя отделенного при и опт ределяют продолжительность инг бирования гемолиза иммунных частиц испытуемым соединением. В табл.1 приведена величин активности . 50%-ного ингибирования гемолиза Y (мл), измеренная указанным методом. Острая токсичность. ВеличиныШя) для испытуемых соединений при оральном введении для крыс приведены в. табл. 1. Терапевтическое действие на нефрит нефротоксинного типа. Кору почки крысы гомогенизируют в равном количестве физиологического раствора. Гомогенизированную смесь смешивают с комплексной вспомогательной добавкой фрейнда (продукт кoIvu aнии Дифко) в объемном соотношении 1:1. Инжектируют 2 мл полученной смеси внутримышечно кролику (масса тела 3100 г) для иммунизации. Через 1,5 мес берут кровь из средца кролика и готовят сыворотку. Полученную сыворотку инактивируют при 5б°С в течение 30. . ((затем высаливают 40%-ным насыщен-, ным водным раствором сульфата аммония и фракционируют. Собирают фракцию иммуноглобулин-у-глобулина (IgG ) , чтобы получить НТ. Подводят оценку, используя самцов крыс Вистар весом от 150 до 160 г. Для каждого соединения делают три репликации. Испытуемое соединение вводят.внутрибрюшинно, один раз каждые 24 ч в течение 7 дн. Спустя 1 ч после введения испытуемого- соединения на третий день применяют НТ. НТ инжектируют внутривенно в количестве 1 мл в хвостовую вену каждой крысы. В качестве сравнительного соединения используют хлорофиллин (СР), а для контроля физиологический солевой раствор. Измеряют общий уровень протеинмочевины в общем количестве мочи, выделенной за 24 ч, турбидиметрическим методом, применяя бычий сывороточный альбумин в качестве контроля в сочетании с сульфосалициловой кислотой. Полученные результаты приведены в табл.2. Каждое из испытуемых соединений, указанных в табл.3, вводили внутрибрюшинно крысам больным нефритом типа Гейманна (все тела от 300 до 350 г) один раз в день в течение 7 дн. , а затем измеряли количество протеинмочевины, мг/день, как описано выше. СР использовали для сравнения, а для контроля использовали физиологический раствор. Для каждого испытуемогр соединения делали три репли кации. Полученные результаты приведены в табл.З. Уровень протеинмочевины у здоровбп крысы составляет от О ,5 до 5 кг/дн Когда уровень протеинкочевины превыш ет этот интервал становится больше 10 мг/дн., можно с уверенностью сказать, что возник нефрит. Как видно из результатов табл.2, нефрит встречается в контрольной группе. 3 других группах количество протеин ючевины через 10 дн. после введени является по существу таким J.e, как у здоровой крысы. Следовательно, введение предлагаемых соединений ингибирует первичную и вторичную ре акции. Когда такой же тест проводили с пре лагаемыми соединениям было обнаружено,что все они ингибируют первичную ре акцию нефрита нефротоксинного типа. Терапевтическое действие на нефрит типа Гейманна. В тесте были использованы самцы крыс Вистер весом от 180 до 200 г. Кора почки крысы была зкстрагирована и гомогенизирована с равным количеством по объему физиологического раствора. Гомогенат центрифугируют при 1500G- в теч ние 1 ч. Всплывший верхний слой очи щают и смешивают с комплектной вспо могательной добавкой Фрейнда 37R .в объемном соотношении 0,4:1. Получен ную смесь инжектируют внутрибрюшинн крысам в количестве 0,5 мл на крысу После этого такое же количество всп могательной добавки вводили каждые 2 нед. до тех пор, пока уровень про теин-мочевины не превысил 100 мг/дн (в течение 6-8 нед). Через 2-3 нед. после начала испы тания вес тела крысы увеличивается до 400-500 г и нормальный уровень протеинмочевины равен 5-15 мг/дн. Ка видно из результатов табл.3 предлага мые соединения могут лечить нефрит типа Гейманна. Этот тест проводили с другими со динениями формулы и также была найдена суЩственная активность при лечении нефрита типа Геймана. Пример 7. В колбу Сакагуг-ш емкостью 500 мл загружают 100 мл культурной среды (состав приведен ниже) и Stack vj Ъ ot rijssp К-76 культив руют при 28°С и рН 6 в течение 4 дн со встряхиванием. Рецептура культур ной среды, %: Глицерин. 0,5 Крахмал1,0 Лактоза0,2 Порошкообразные соевые бобы0,5 Дрождевой экстракт0,1 Солодовый экстракт 0,2 , 0,3 yjg5O40,05. В 30-литровый сосуд для ферменации загружают 20 л культурной реды указанного состава. Одну колу результирующей высеянной культуы культивируют при температуре кульурной среды 28С в течение 5 дн. ри перемешивании со скоростью 400 об/мин и аэрировании, проводимом со скоростью 1 л на 1 л культурной среды в минуту. Результиругаций культурный бульон центрифугируют со скоростью 8000 об/мин для удаления микробных клеток. В супернатант добавляют 5 л метанола, смесь перемешивают и отстаивают в течение 3ч. месь центрифугируют и удаляют тверые частицы. Супернатант экстрагируют равным объемом этилацетата. Растворитель, этилацетатного слоя- отгоняют при пониженном давлении. Остаток растворяют в метаноле и пропускают через колонку с активированным углем. Элюат концентрируют до сухого остатка при пониженном давлении. Сухую массу растворяют в смеси хлороформ - этилацетат 1:1 (по объему) и подвергают гель-фильтрации через колонку с Сефадексом LH-20. Фильтрат подвергают тонкослойной хроматографии (с использованием в качестве несущего растворителя смеси этилацетатхлороформ-уксусная кислота в объемных соотношениях 50:50:2) и собирают фракцию с Rf 0,34, обладающую антикомплементарной активностью. В другом варианте фильтрат подвергают тонкослойной хроматографии (с использованием в качестве несущего растворителя смеси бензол - бутанолуксусная кислота в объемных соотношениях 60:15:5) и собирают фракцию с. Rf 0,58, обладающую антикомплементарной активностью. Выпариванием растворителя из ф)акции получают. 2,0 г б ,7-диокси-2, 5, 5, 8атетр метил-1, 2, 3, 4,-4а, 5, 6 7, В, 8а-декагидронафталин-1-спиро-2-(6, 7-диформил-4-окси-2, 3-дигидробензофурана), представлягадего собой бледно-желтое слабо-кислотное соединение, обладающее антикомплементарной активностью. Получение этого соединения подтверждается следующими физико-химическИми свойствами. 1 - Л8° (С 2,5, метанол). Элементный анализ для С.2з Н joOg . Вычислено, %: С 68,64; Н 7,51. Найдено, %: С 68,58; Н 7,55. Анализ ультрафиолетового спектра поглощения (УФ): этанол .-р 246 им ( е 16474), г макс 307 нм ( е 6659). ЯМР-анализ проводили с использованием в качестве растворителя пиридина - ds (2,2-диметил-2-силапентан-5-сульфонат натрия) (ДСС) в качестве внешнего стандарта. Условия измерения ЯМР следукадие: Амплитуда спектра Фильтр, с ,0,1 Выход радиочастоты, МГц0,5 Время развертки, мин,5 Ширина развертки, млн, дол10 . Конец развертки, млн. дол.О Пример 8. В колбу Сакагуш емкостью 500 мл загружают 100 мл . культурной среды, имеющей представ ленную ниже рецептуру, и известный штамм5ЪасЬуЬоЬг1 5 cbartarum ИфО 5389 культивируют в среде при температуре 28 С в течение 4 дн. при рН 6 со встряхиванием. Рецепту ра культурной среды, %: Глицерин0,5 Крахмал , 1,0 Лактоза0,2 Порошок из соевых бобов0,5 Дрожжевой экстракт 0,1 Солодовый экстракт 0,2 СаСОэ0,3 MgS040,05 В 30-литровый сосуд для ции загружают 20 л культурной среды указанного состава и две колбы с р зультируют-тей высеянной культурой к тивируют, при 2Э°С в течение 5 дн. с перемешиванием со скоростью . 30 об/мин и при аэрировании, провод мо, со скоростью 1 л Мд 1 л Среды в минуту. Результирующий культурны бульон центрифугируют со скоростью БООС об/мин для удаления, микробных клеток. В супернатйнт добавляют 5 л мета нола, смесь перемешивают и отстаива в течение 3 ч. Смесь центрифугируют и твердые частицы удаляют. Супернатант экстрагируют равным объемом этилацетата. Растворитель этилацета иого слоя удаляют при пониженном да лении, проводя концентрацию до сухо го остатка. Остаток раствбряют в метаноле и пропускают через колонку с активированньм углем. Элюат концентрируют до сухого остатка при пониженном давлении, растворяют в смеси хлороформа и этилацетата 1:1 (по объему) и подвергают Гель-филь рации Через колонку с Сефалексом LH-20. Собирают фракцию активного пика тонко-слойной хроматографии. Выпариванием растворителя получают 2,2 г {б,7-диокси-2,5,5,8а-тетрамётил 1,2/3,4,43,5,6,7,8, Ба-дакагиД роиафталин-1-спиро 2-/С6., 7 -дифор-т мил-4 -окси-2 ,;3 -дигидробензофура представляющий собой бледно-желтое слабокислотное соединение, обладающее антикомплементарной активностью. Это соединение имеет физико-химические свойства аналогичны соединению в примере 1. Пример 9.Stachijbot ys5p.T.789 культивируют и очищают по примеру 7, за исключением того, что используется приведенная ниже культурная среда, рН которой 7,5, и температура культивирования поддерживается равной 32°С. Состав культурной среды, %: .Глицерин0, 5 Глюкоза1,2. Настойка пшеницы0,5 Сухие дрожжи0,1 Солодовый экстракт0,2 MtfSO 0,05 Nace0,3 Так получают 6,7-диокси-2,5,5,8а-тетраметил-1,2,3,4,4а,5,б,7,8,8a-дeкaгидpoнaфт.aлин-l-cпиpo-2 /(6 ,7-диформил-4-окси-2,3-дигидробензофуран) , представляющий собой светло-желтое слабокислотное соединение, имеющее антикомплементарную активность. Физико-химические свойства данного соединения соответствуют свойствам соединения, полученного в примере 7, П р и мер lO.Stachijbotrys 3р- Т-791 культивируют и очищают по примеру 7, за исключением того, что культурная среда имеет указанный ниже состав и ее рН доводят до 5,5, температура среды поддерживает ся равной . Состав культурной , %: Глицерин0,5. Крахмал1,0 Сахароза0,2 Порошок из соевых бобов0,5 . Цептон0,1 Солодовый экстракт0,2 jyigSO 0,3 нее0,05 Так получают б,7-диокси-2,5,5,8а-тетраметил-1,2-3,4,4а, 5, б, 7,8, 8а-декагидронафталин-1-спиро-2 -(6 ,7-диформил-4 гокси23-дигидробензофуран), представляющий собой бледно-желтое слабокислое соединение, обладаюцее антикомплементарной активностью. Физикохимические свойства данного соединения соответствуют свойствам сое динения, полученного в примере 1. Пример 11. динатриевой соли соединения ( ГЬ ). и 250 мл глюкозы растворяют в дистиллированной воде для инъекций до общегр количества 5 мл. Раствор выливают в ампулу емкостью 5 мл. Ампулу продувают азотом и нагревают в течение 15 мин при 121 С для стерилизации раствора, чтобы получить препарат для инъекции. . Пример 12. Используют SOU мг соединения (1Ь) 5 мг сульфита натрия и дистиллированную воду для инъекций до общегчэ количества ,5 мл. Препарат для инъкции готовят по методике примера 7. Пример 13. Используют 500 мг соединения (ib), 5 мг сульфита натрия и дистиллированную воду для инъекций до общего количества 5мл. Готовят препарат для инъекции по методике примера 1. Пример 14. Используют 75Q соединения (1Ь) и полусинтетическое глицеридное основание до общего количества 2000 мг. Прибавляют соединение (1Ъ) к пол синтетическому глицеридному основан смешивают и суспендируют при .. Смесь помещают в форму и да:ют ей са мопроизвольно остыть. Продукт удаля ют и, таким образом, получают свечу Пример 15. Используют 750 мг соединения, полученного в примере 1, 90 мг витамина Е и полусинтетическое глицеридное основание до общего количества 2000 мг. Свечу готовят по методике примера 10. Пример 16. 150мг соедине ния (1Ь) 40 г Авиула, (торговое наименсГвание продукта фирмы Асахи Ка Кабушихи Кайыа) ,. 30 г кукурузного крахмала и 2 г стеарата магния Ьмешивают и измельчают, а затем таблетируют с помощью pound ег и ,йокрывают сахаром ( R 10 мм), Полу ченные таблетки покрьшают пленкой покрывающего агента, состоящего из 10 г ТС-5 (торговое наименование 1окс1шропилметилцеллглози 3 г полиэтилен гликоля 6000 продукт фирмы Shinetsu Chem I nd),40 г касторового .масла и 40 г метанола для производст ва таблеток, покрытых пленкой. Пример 17. 100 г соединен (1,), 40 г Авиуала, 30 г кукурузно

Величина антикомплементарной

Испытуемое соединение активности у , мл

Та б л и- ц а

Be личина ID 50 мг/кг крахмала и 2 г стеарата магния смешивают,измельчсиот,таблетируют с помо щьюроиг }ер и покрывают сахаром С«{10 I«M}, Полученные таблетки покрывают пленкой из пленкообразующего агента, состоящего из 5,7 г сополимера метилакрилата метакриловой кислоты, 0,6 г триацетина и 50,4 г этонола, для образования кишеч.ных покрытых таблеток. Пример18.150г соединения (1ь) 1 г лимонной кислоты, 33,5 г лактозы, 70 г дикальцийфосфата, ;30 г Плон Плуроник Г-68 и 15 г лаурилсульфата натрия смешивают. Смесь просеипают через сито 60 и подвергают влажному гранулированию со спиртовым раствором, состоящим из 15 г поливинилпирролидона, 4,5 г Карбовакса 1500 (полиэтиленгликоль) и 45 г Карбовакса 6000 (полиэтиленгликоль) . В некоторых случаях прибавляют этанол (подходящее количество) для превращения порсхика в пастооб-: разную массу. Прибавляют 30 г кукурузного крахмала и продолжают смешивание до тех пор, пока не образуются однородные частицы. Частицы пропускают через сито № 10, помещенное в желоб, сушат в печи при 100°С в течение 12-14 ч. Высушенные частицы просеивают через сито 16 и смешивают с 3 г сухого лаурилсульфата натрия и 3 г сухого стеарата магния. Смесь прессуют в желаемую форму на таблетной машине. Полученные таким образом сердцег в.инки обрабатьшают лаком и обсыпают тальком, чтобы предохранить от поглощения влаги. Сердцевинки покрывают первым слоем, а затем лаком требующееся количество раз, для перорального введения. Чтобы полностью закруглить и сгладить таблетки снова наносят первый и сглаживающий слой, а окрашивающее покрытие наносят до тех пор, пока не получают желаемый цвет. После сугчки покрытие таблетки полируют для придания таблеткам равномерного блеска.

Способ получения сесквитерпено вых со.единений общей формулы - o-rvft: . Н( СНо Где RI - формильная.группа; Rj - карбоксильная группа,, или R,«Rf внесте с атомами углерода бензольного кольца, с которым они связаны, образуют .лактоновое; кольцо но или их солей, о т л и ч а ю щ и и .т с я тем, что соединение формулы

60 40

1в CVi orphi)2in

Хлорофиллин

(с Ьавне кие)

Т а и ц а 2 собой счет, времени от применения ч перед применением НТ. Та б-л и ц а 3

Продолжение табл. 3