Способ определения ристомицина сульфата Советский патент 1987 года по МПК G01N33/53 G01N31/00 

Изобретение относится к области фармацевтического анализа, в частности к анализу гликопептидного антибиотика ристомицина сульфата, используемого в клинической практике,для лечения тяжелых септических инфекций вызванных устойчивыми к другим антибиотикам стафилококками и энтерококками.

Цель изобретения - упрощение спо соба за счет сокращения числа стадий и повышение селективности,

Способ осуществляется след тощим образом.

Для определения ристомицина суль- фата используют очшцен ную сумму лек- тинов семян мышиного горошка, которую получают по следующей методике 200 г размолотых семян экстрагируют при непрерывном перемешивании J000 мл 0,9%-ного раствора натрия хлорида 1-3 ч, рН раствора доводят до 4,0 и образующийся осадок удаляют центрифугированием. Затем рН раствора доводят до 8,0 и вновь образующий ся осадок удаляют центрифугированием Из полученного прозрачного раствора белки осаждают сульфатом аммония при 66%-ном насыщении. Осадок подсушивают, растворяют в небольшом объеме дистиллированной воды и диализируют против 0,9%-ного раствора NaC 1 , а затем против, дистиллированной воды, после чего лиофильно высушивают. Получают 350-500 мг аморфного веще- ства светло-коричневого цвета.,, %- ный раствор последнего в 0,9%-ном растворе NaCl используют для идентификации ристомицина сульфата.

Раствор, содержащий ристомицин сульфат, обрабатывают этим реагентом при рН 4,0-10,0, а о наличии в пробе ристомицина сульфата судят по образованию осадка, выявляемому визуально.

Осадок ристомицина сульфата образует D-маннозоспецифичный лектин семян мыщиного горощка. Для его визуального наблюдения необходимо не меньше 30 мин. При совместном при- сутствии в растворе D-маннозоспеци- фичного и М-ацетил-О- галактозамин- специфичного лектина осадок ристомицина сульфата образуется сразу после добавления реактива. Это объясняется взаимодействием двух лектинов между собой, В результате образуется еще более сложный комплекс, и осадок выпадает сразу.

Определение ристомицина сульфата основано на следующих реакциях: l) 0- маннозЪспецифичный лектин + N-аце- тил-О-галактозаминспецифичный лектин - комплекс лектинов (растворимый); 2) комплекс лектинов + ристомицин -т ристомицин - комплекс лектинов (осадок).

Пример 1. КО,5 мл %-ного раствора реактива на 0,9%-ном NaC. рН 7,0, полученного из семян мышиного горошка, добавляют 0,5 мл 1%-ного раствора ристомицина сульфата. Образуется обильный осадок, Открьшаемый минимум ристомицина сульфата при использовании 1%-ного раствора реактива при визуальном наблюдении - 70 мкг/мл раствора. Реакцию необходимо проводить в водных или водно- солевых растворах в диапазоне рН 4,0- , так как при рН 3,0 и ниже, а также при рН 10,0 и выше комплекс разрущаетсЯо Реакцию можно проводить в диапазоне температур О - 56°С, при температурах выше 65°С происходит денатурация лектинов реагента.

Пример 2, Проводят, как пример 1, за исключением того, что устанавливают рН 4,0 и берут концентрацию реагента 1%, Чувствительность способа снижается до 200 мкг/мл рис- ,томицина сульфата. Селективность для выявления ристомицина суль.фата сохраняется ,

Пример 3, Проводят, как пример 1, за исключением того, что устанавливают рН 10,0, берут концентрацию реагента 5%. Чувствительность реакции выявления ристомицина сульфата снижается до 200 мкг/мл, селективность выявления ристомицина сульфата сохраняется.

Способ определения ристомицина сульфата позволяет проводить реакцию в присутствии ароматических аминокислот, белков,моносахаридов, в том числе О-маннозы, -глюкозы, L-араби- нозы и L-рамнозы, .пептидных и глико- зидных антибиотиков.

Реакп,ия проста в выполнении. Способ может быть применен в аптечных учреждениях, контрольно-аналитических лабораториях, а также при контроле производства ристомицина сульфата

Формула изобретения

Способ определения ристомицина сульфата путем обработки пробы хими313021994

ческим реагентом, отличаю- честве реагента используют солевой рас- щ и и с я тем, что, с целью упроще- твор суммарного препарата лектинов из кия способа за счет сокращения числа мышиного горошка (Vicia сгасса L. ) ,а стадий и повьппения селективности,в ка- реакцию проводят при рН А,0-10,0.

Изобретение относится к фармацевтическому анализу, а именно к анализу гликопептидного антибиотика, ристомицина сульфата, используемого в клинической практике для лечения септических инфекций, устойчивых к другим антибиотикам. Цель изобретения - упрощение способа за счет сокращения числа стадий и повышение селективности. Для этого используют очищенную сумму лектинов семян мышиного горошка. Размолотые семена