Способ идентификации @ @ Советский патент 1987 года по МПК C12Q1/04 

1130361

Изобретение относится к медицинсой и ветеринарной микологии и может ыть использовано в лабораториях, существлякйдих видовое определение рожжеподобных грибов рода Candida. 5

Цель изобретения - повышение точости определения.

Способ осуществляется следующим бразом.

Из суточных культур дрожжей и О рожжеподобных грибов, выращенных на среде Сабуро, готовят взвеси в физиоогическом растворе концентрацией 1 млн клеток/мл. К 1 мл человеческой сьшоротки, разведенной 1/10 физиоло- гическим раствором, добавляют 0,1 мл приготовленной взвеси гриба и инкубируют 3 ч при 37+0,5°С|- после чего клетки отделяют центрифугированием в течение 15 мин при 2000g. Осадок клеток затем однократно отмывают дистиллированной водой при том же режиме. Осадок взвешивают в минимальном объеме дистиллированной воды, взвесь наносят на предаетные стекла и фиксируют метанолом.

Для гашения аутофлюоресценции препараты погружают на 1 мин в 0,1%-ный раствор метиленового синего, после чего промьшают проточной водопроводной водой в течение 45 мин. На высушенные мазки наносят специфический конъюгат иммуноглобулина против Candida albicans, меченный флюорохроми- зотиоцианатом, в рабочем разведении и вьщерживают во влажной камере при 37°С в течение 15 мин. Затем мазки промывают в проточной водопроводной воде, высушивают и микроскопируют в сине-фиолетовых лучах при помощи люминесцентного икроскопа.

20

25

30

35

40

Реяактор М.Циткина

Составитель EtHpHbrx Техред Л.ОлейНик

1278/29

Тираж 500Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб,, д.4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г,Ужгород, ул.Проектная, 4

52

При иммунолюминесцентном исследовании дрожжевая клетка окрашивается (светится) специфически при отсутствии такого свечения ростковой трубки, При окраске тем же специфическим конъюгатом иммуноглобулина против Candida albicans других дрожжеподобных грибов рода Candida выявляется специфическое окрашивание (свечение) как тела клетки, так и образования, морфологически сходного с ростковой трубкой,

I

Аналогичное исследование 24 видов

дрожжеяодобных грибов и 4 видов истинных дрожжей не выявило специфического окрашивания,

Способ позволяет исключить ложно- положительные результаты идентификации Candida albicans, а также позволяет определить вид другого гриба, например, Candida trophicalu на стадии чистой культуры.

Формула изобретения

Способ идентификации Candida albicans путем пpopaш вaния чистой культуры в сыворотке крови при температуре 37 ±0,5 С в течение 3 ч с после- д тощим приготовлением микроскопичес- кого препарата и его исследованием, отличающийся тем, что, с целью повышения точности, микроскопический препарат дополнительно окрашивают специфическим конъюгатом иммуноглобулина против Candida albicans j меченного фпюорохромизотиоциа- натом и идентифицируют Candida albicans при наличии свечения клетки и отсутствии свечения ростковой трубки.

Корректор С.Шекмар

Изобретение относится к области медицинской и ветеринарной микологии, С целью повышения точности определения дрожжеподобных грибов рода Candida из суточных культур дрожжей и дрожжеподобных грибов, выращенных на среде Сабу.ро, готовят взвеси в физиологическом растворе концентрацией 1 млн клеток /мл.К 1мл человеческой сьшоротки, разведенной 1/10 физиологическим раствором, добавляют 0,1 мл приготовленной взвеси гриба, инкубируют 3 ч при 37 ±0,5° С и готовят микроскопические препараты, которые погружают на 1 мин в 0,1%-ный раствор метиленового синего, промьшают водой в течение 45 мин и высушивают. Наносят на мазки специфический конъюгат иммуноглобулина против Candida albicans, меченный фпюорохромизотиоцианатон, в рабочем разведении, выдерживают во влажной камере при 37 С в течение 15 мин и подвергают люминесцентному микроско- пированию в сине-фиолетовых лучах. Candida albicans идентифицируют при наличии свечения клетки и его отсутствии у ростковой трубки. (Л со о со 05