Способ количественного определения радиоактивных метаболитов стероидов Советский патент 1987 года по МПК G01N33/50 

Изобретение относится к химии и биохимии природных соединений и может быть использовано для количественного определения радиоактивных органических соединений, в частности стероидных гормонов о

Целью изобретения является повышение точности и ускорения способа за счет получения сухого остатка ра15

20

диоактивных стероидов исходной смесиЮ чественное определение радионуклидов.

Вариант 2. На пластинки одинаковой площади (около 2 см) и одинаковой толщины слоя силикагеля наносят увеличивающиеся количества прогестерона ИЛ.И Н тестостерона и проводят радиометрию, как в варианте 1 данного примера. Показано, что присутствие пластинок не влияет на ради- ометрию пропорционально увеличивающегося количества радионуклидов, меченых или Н.

Вариант 3. Разные количества смеси Н тестостерона или Зн 5с --ди- гидротестостерона вместе с нерадио- 2-5 активными (по 10 мкг - 15 мкм каждо- го) наносят на пластинку Силуфол 1, хроматографируют в системе растворителей, как указано выше в общем случае. Положение стероидов (пятна или зоны) определяют в парах йода, пятна вьфезают и радиометрируют как в варианте 1 данного примера. Показано, что после хроматогр афирования сохраняется пропорциональность в количестве опре- 35 деляемых радионуклидов.

П р и м ер2. На пластинки одинаковой площади (около 2 см) и одинаковой толщины наносят одинаковое количество с андростен-4-3,17-диона

и радиометрии идентифицированных зон в присутствии слоя силикагеля и алюминиевой подложки.

Способ осуществляется следующим .бразом.

Получают гомогенат аденомы предстательной железы человека в 0,05 моль - л- фосфатном буфере рН 7,4 J 5о -дигидротестостерон при концентрации 100 нмоль-л- инкубируют с гомогенатом аденомы предстательной железы в присутствии D-глюкозы, глю- козо-6-фосфата, и глюкозо-6- -фосфатдегидрогеназы в течение 30 - 90 мин при . Общий объем пробы 75 - 100 мкл. К пробам добавляют 25- 50 мкл 1 н НС1, намеченые стероиды: 5о -андростан-ЗЫ, 17/5-диол, 5с -андро- стан-3(, 17/з-диол, 5о/-дигидротесто- стерон и лиофилизируют. К остатку добавляют 50-100 мкл смеси бензол- метанол (1t1 по объему) и для хроматографии используют точный объем полученного раствора (обычно 40-90 мкл) Пробы хроматографируют в системе растворителей бензол:ацетон:этиловый спирт (9:Т:0,5). Пластинки высупшва- ют, опрыскивают проявляющей смесью: ледяная уксусная кислота - конц„ сер.30

нал кислота - анисовый альдегид-мета- 40 или Н тестостерона и такоечже ко- нол (25:1:3:71), нагревают от 5 до

личество радиоактивных нуклидов вносят в сцинтилляционные флаконы. Половину пластинок опрыскивают проявляющей смесью и проявляют при нагревании. Все пластинки помещают в сцинтилляционные флаконы, во все флаконы заливают сцинтилляционную жидкость и радиометрируют. Показано, что использование проявляющей смеси для детек7 мин при 100-110 С, соответствующие

нужньм метаболитам зоны вырезают вместе с алюминиевой подложкой и слоем силикагеля, помещают в сцинтилля- ционные флаконы,заливают сцинтилляционной смесью и радиометрируют на спектрометре модели 8100 ЛКБ Швеция) или модели СЛ-30 (Й нтертекник, Франция). Абсолютные количества радиоактивных метаболитов подсчитывают, учитывая коэффициент эффективности счетчика.

Пример 1. Вариант 1. На вырезанные пластинки со слоем силикагеля разной площади в пределах 0,5- 3,0 см наносят одинаковое количество радиоактивных С С гептадекана или Н гептадекана. Такое же коли

чество радиоактивных соединений вносят в пустые сцинтилляционные флаконы. Во все флаконы добавляют одинаковый объем сцинтилляционной смеси, инкубируют при нормальных условиях 3,5-4,0 ч и радиометрируют. Показано, что площадь вырезаемой зоны пластинки со слоем силикагеля на алюминиевой подложке мало влияет на коли-г.

40 или Н тестостерона и такоечже ко-

45

личество радиоактивных нуклидов вносят в сцинтилляционные флаконы. Половину пластинок опрыскивают проявляющей смесью и проявляют при нагревании. Все пластинки помещают в сцинтилляционные флаконы, во все флаконы заливают сцинтилляционную жидкость и радиометрируют. Показано, что использование проявляющей смеси для детек50 тирования стероидов вызывает химическое гащение при радиометрии только Н соединений.

Положительный эффект предложения. Предложенньй способ практически

55 устраняет потери радиоактивных веществ при анализе, выход радиоактивных стероидов после хроматографии 100%, а по известному способу 75 - 85%.

3131

в предлагаемом способе в одной пробирке проводятся следующие операции: 1) инкубация водных гомогенатов с радиоактивным соединением; 2) лио- филизация водных растворов радиоактивных соединений; 3) растворение (не экстракция) лиофилизированных радиоактивных веществ в точном объеме органического растворителя; 4) нанесение на хроматографическую пластинку точного объёма раствора радиоактивных соединений, хроматография и идентификация радиоактивных соединений; 5) вырезание зон (пятен) и радиометрия ,

В предлагаемом способе достигнуто повьшение точности, так как вообще отсутствуют потери радиоактивных веществ В известных методах всегда имеют место потери радиоактивных соединений и их учет проводят, добавляя дополнительно радиоактивные вещества аналогичной структуры, содержание С, . как указывалосъ вьше.

Следовательно, предлагаемый способ не только повышает точность анализа

Редактор Г. Гербер Заказ 2355/47

Составитель Л. Артюшина

Техред Л.Олийнык Корректор Т. Колб

Тираж 776Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие,г. Ужгород, ул. Проектная, 4

59034

радиоактивных соединений, сокращает время анализа (включает 5 стадий вместо 7), но и имеет значительный экономический эффект: в сотни раз

2 уменьщается количество (объем) органических растворителей, необходимых для анализа, и отпадает необходимость дополнительного применения радиоактивных веществ, меченых С.

fO

Формула изобретения

Способ количественного определения радиоактивных метаболитов стеро- идов путем инкубации ткани с радиоактивным предшественником, получения сухого остатка радиоактивных стероидов, растворения сухого остатка, хроматографирования и радиометрии, о тлич ающий с я тем, что, с целью повышения точности и ускорения способа, сухой остаток получают лио- филизацией исходной смеси, а радиометрию идентифицированных зон осуществляют, помещая в сцинтилляционную жидкость слой силикагеля с алюминиевой подложкой.

Изобретение относится к химии и биохимии природных соединений,предназначено для количественного определения радиоактивных органических со- . единений, в частности стероидных гормонов. Цель изобретения - повьшение точности и ускорение способа.. Для этого получают гомогенат адекомы предстательной, железы человека в 0,05 ммоль -л- фосфатном буфере, рН 7,4, С н 5 о -дигидротестостерон при концентрации 100 наномолей-л инкубируют с гомогенатом аделомы предстательной железы в п рисутствии Ь- i глюкозы, глюкозо-6-фосфата,.НАД Н и глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в течение 30-90 мин при . Общий объем пробы 75-100 мкл. К пробам добавляют 25-50 мкл 1 Н.НС1, стероиды : 5с -анд- ростан-Зс, 1 7/з-диол, 5ci -андростан-Зо, 17/1-диол, 5с -дигидротестостерон и лиофилизуют. К остатку добавляют 50- 100 мкл смеси бензолметанол (1:1) и хроматографируют пробы в системе растворителей бензол:ацетон: этиловый спирт (9:1:0,5)с Пластинки высушивают, опрыскивают.проявляющей смесью: ледяная уксусная кислота - концентрированная серная кислота - анисовый альдегид - метанол (25:1:3:71) , нагревают 5-7 мин до 100-1Ю С, Соответствующие нужным метаболитам зоны вырезают вместе с алюминиевой подложкой, помещают в сцинтилляционный флакон, заливают сцинтилляционной смесью, радиометрию идентифицированных зон ведут, помещая в сцинтилляцион- ную жидкость слой силикагеля с алюминиевой подложкой. (Л со сд со