Способ определения фосфолипидов в биологическом материале Советский патент 1987 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к биохимии и может быть использовано в ла- бораторной практике и научных иссле дованиях для количественного определения фосфолипидов в биологическо материале, например в сыворотке, микросомах печени и других биологических объектах. . Цель изобретения - повьшение чувствительности способа за счет определения с бато-фенантролеином железа в комплексе фосфолипид-ферротио- .цианат.

Способ осуществляют следующим образом.

Из биологической пробы экстрагируют фосфолипиды органическими растворителями (например, смесью хлороформа и метанола 1:1), уйари- вают досуха, вновь добавляют хлороформ, срабатывают ферротиоцианатом аммония, затем полученный комплекс обрабатывают аскорбиновой кислотой для восстановления железа. Пробы нейтрализуют, обрабатьюают спиртовы раствором бато-фенантролеина, разбавляют пробу ацетоном, центрифугируют и фотометрируют образовавшийся комплекс при взаимодействии двухвалентного железа с бато-фенантролеином (интенсивное малиновое окрашивание) .

Пример 1. К О,02 мл сьгао- ротки крови прибавляют 0,5 мл смеси хлороформ - метанол (1:1) и упаривают досуха при АО-УО С.

К сухому остатку прибавляют 1 мл хлороформа, нагревают 30-60 с, зате прибавляют 1 мл раствора ферротио- цианата аммония и встряхивают в течение 1 мин или размешивают в миксере. Приготовление ферротиоцианата аммония: 27,03 г гексагидрата хлорного железа и 30,4 г тиоцианата амРедактор Е.Копча

Составитель Н.Гуляева Техред М. Ходанич

Заказ 2655/49

Тираж 776Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие,-г. Ужгород, ул. Проектная, 4

мония растворяют в 1 л воды. После расслоения фаз отбирают 0,5 мл хло- роформенного слоя, переносят в новую пробирку и упаривают досуха.

5К пробе добавляют 2 мл 0,5%-ного

раствора аскорбиновой кислоты на 0,05 М растворе НС1 и инкубируют 1 ч при для перевода трехвалентног железа в двухвалентное. Затем в про10 бы прибавляют. 0,8 мл 0,1 М раствора едкого натрия, 0,5 мл 0,05%-ного спиртового раствора бато-фенантро- . леина и 2 мл ацетона, пробы размешивают и после центрифугирования

5 прозрачный раствор фотометрируют в кювете с длиной оптического пути 1 см при зеленом светофильтре.

Определение ведут по калиброврч- 20 ной кривой зависимости оптической плотности от концентрации фосфолипидов. Для стандартного раствора лецитина оптические плотности состаляют 0,125; 0,240; 0,550; 0,720 25 и 0,810 при концентрациях лецитина 1,2,5,10 и 20 мкг соответственно.

Форм.ула изобретения

30 Способ определения фосфолипидов в биологическом материале путем экстракции органическими растворителями, обработки пробы ферротиоцианатом аммония, экстракции образующего25 ся комплекса органическим, растворителем и последующего фотометрйрова- ния, отличающийся тем, что, с целью повьш1ения чзпзствитель- ности способа, комплекс фосфолипи40 дов с ферротиоцианатом дополнительно обрабатывают аскорбиновой кислотой, нейтрализуют и добавляют спиртовой раствор бато-фенантролеина и ацетон.

Корректор В.Бутяга

Изобретение относится к медицине. Для повышения чувствительности способа биологическую пробу экстрагируют органическими растворителями, упаривают досуха, добавляют хлороформ, обрабатывают ферротио- цианатом аммония, затем, аскорбиновой кислотой. Пробу нейтрализуют, обра- батьшают спиртовым раствором бато- фенантролеина, добавляют ацетон, центрифугируют и фотометрируют. СА G