Способ хроматографического определения витамина А в смесях веществ Советский патент 1988 года по МПК G01N30/90 

Изобретение относится к области аналитической химии и может быть применено для определения витамина А в биологических веществах методом тонкослойной хроматографии.

Цель изобретения - повышение воспроизводимости сокращения времени анализа.

Способ осуществляется следующим образом.

Методом экстракции получают фракцию, содержащую витамин А. Экстракт фильтруют,, упаривают и полученный остаток растворяют в хлороформе, Пробу раствора наносят на хроматографи- ческую пластину и осуществляют разделение компонентов в потоке смеси хлороформ-гептан в объемном соотношении 92-98:8-2. Обнаружение выделенного витамина А осуществляют последовательной обработкой пластины треххло- ристым железом, парами йода, 2,2-ди- пиридилаи парами аммиака. После проведения цветной реакции витамин А определяют по свидетелю, окрашенные участки элюируют с пластины и осуществляют количественный анализ витамина А фотометрическим методом.

Пример 1. Определение витамина А в печени кур.

Навеску гомогенизированного образца печени (50-100 мг) вносят-в колбочку для омыления, добавляют 20 мл этанола, 100 мг пирогаллола и 5 мл 60% КОН. Далее присоединяют обратный холодильник и проводят щелочное омыление на глицериновой бане при 90°С в течение 30 мин, периодически встряхивая колбочку. После омыления колбу быстро охлаждают, добавляют 20 мл воды и ее содержимое переносят в делительную воронку, куда предварительно вносят 50 мл гексана, энергично взбалтывают и оставляют до расслоения жидкостей на 5-10 мин, затем повторяют экстракцию еще дважды по 30 мл гексана. Гексановую вытяжку отмывают дистиллированной водой до нейтрально реакции по универсальной индикаторной бумаге. Затем фильтруют через воронку, заполненную обезвоженным сульфатом натрия. Фильтрат упаривают досуха, остаток растворяют в 0,2 - 0,4 мл хлороформа и количественно переносят на стартовую линию пластинки Силуфол.

Тонкослойную хроматографию осуществляют в камере, насыщенной парами подвижной фазы - смеси хлороформа и гептана (94:6). После того, как фронт растворителя достигнет верхнего края пластинки, ее извлекают из камеры, слегка подсушивают до исчезновения следов растворителя, а затем опрыскивают 0,2%-ным спиртовым раствором хлорного железа (III),

высушивают в токе теплого воздуха и затем помещают на 5-10 с в камеру, насыщенную ларами йода. При этом на пластинке появляется серовато-синее пятно витамина А, а она окрашивается

в голубоватый цвет. После этого пластинку прогревают в токе теплого воздуха до полного исчезновения следов йода с пластинки, т.е. до полного ее обесцвечивания. Затем пластинку

опрыскивают 0,5%-ным этанольным раствором 2,2-дипиридила. На пластинке появляется розово-красная полоса витамина А на белом фоне. После этого пластинку помещают на 5 с в камеру,

насыщенную парами аммиака, это позволяет полностью обесцветить фон пластинки и закрепить розово-красную окраску, которая после такой фиксации не исчезает несколько дней.

i

Локализацию витамина А определяют по свидетелю и окрашенный участок силикагеля количественно переносят в пробирку с притертой пробкой. Затем

в пробирку приливают 3 мл элюирующей смеси, состоящей из этанола, соляной и фосфорной кислот и дистиллированной воды.в объемных соотношениях 6:3:1:2, энергично встряхивают в течение 20 с и отфильтровывают через обеззоленный фильтр (красная полоса). Ополаскивают пробирку 1 мл элюирующей смеси, которую переносят на тот же фильтр. Полученный розово-красный

фильтрат фотометрируют при 492 нм по сравнению с элюирующей смесью. Содержание витамина А определяют по калибровочному графику.

П р и м е р 2. Определение витамина А в масляном концентрате.

100 мг масляного концентрата количественно растворяют в 2 мл хлороформа и переносят в мерную колбу на 100 мл, доводят до метки хлороформом.

На стартовую линию пластинки

Силуфол наносят О,1 мл полученного раствора в виде полосы длиною 80 мм, рядом наносят точку стандартного раствора ретинилацетата (1 мкг).

Все дальнейшие операции проводят по примеру 1, а растчет содержания витамина А в препарате проводят по формуле

X

A-d-Y,

Yj. n-0,3

е X - количество витамина А в

препарате, ИЕ/мл; А - количество витамина А, найденное по калибровочному графику, мкг; d - плотность масла, г/мл; Y - объем хлороформа, в котором растворена навеска препарата (100 мл); Y - объем хлороформного раствора препарата, нанесенного на пластинку (0,1 мл); п - навеска препарата, г; 0,3 - коэффициент перерасчета в интернациональные единицы (ИЕ).

П р и м е р 3. Определение витаа А в тривитамине.

200 мг тривитамина количественно растворяют в 2 мл хлороформа и переносят в мерную колбу на 100 мл и доводят до метки хлороформом. Дальнейшие операции проводят по примеру 1, а расчет ведут согласно примеру 2. Формула изобретения Способ хроматографического опреQ деления витамина А в смесях веществ, заключающийся в нанесении пробы смеси на тонкослойную хроматографическую пластину, разделении компонентов смеси потоком органического элюента и

5 обработке пластины реактивами для обнаружения выделенного витамина А по цветной реакции, отличающийся тем, что, с целью повышения воспроизводимости и сокращения вре0 мени анализа, разделение осуществляют смесью хлороформ-гептан в объемном соотношении 92-98 : 8-2, а при обнаружении витамина А пластину последовательно обрабатывают хлористым желе5 зом, парами йода, 2,2-дипиридилом и парами аммиака,

Изобретение относится к области аналитической химии и может применяться для определения витамина А в биологических веществах методом тонкослойной хроматографии. Цель изобретения - повышение воспроизводимости и сокращение времени анализа. Методом экстракции получают фракцию, содержащую витамин А. Экстракт фильтруют, упаривают и полученный остаток растворяют в хлороформе. Пробу раствора наносят на хроматографическую пластину и осуществляют разделение компонентов в потоке смеси хлороформ- гептан в объемном соотношении 92 - 98:8 - 2. Обнаружение выделенного витамина А осуществляют последовательной обработкой пластины треххло- ристым железом: парами иода, 2,2-ди- теридила и парами аммиака. После проведения цветной реакции витамин А определяют по свидетелю, окрашенные участки элюируют с пластины и. осуществляют количественный анализ фотометрическим методом. -ч i (Л с со . PS