Способ определения фосфолипидов в биологическом объекте Советский патент 1987 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для опре деления фосфолипидов в лабораторной практике.

Цель изобретения ускорение способа путем совмещения процессов экстракции фосфолипидов и высушивания экстракта.

Пример 1. К 0,25 мг белка субклеточных фракций печени крысы при бавляют 1,5 мг смеси метанол-хлороформ в соотношении 1;1 и упаривают досуха при 40°С (следы-метанола завышают результаты определения фосфолипидов).

К сухому остатку прибавляют З мл

толуола (параллельно в пробирку „„ %

ливают J МП толуола - холостой опыт

и нагревают 3D с гфи 50°С5 затем прибавляют 2 мл раствора ферротио- цианата аммония (27,03 г гексагид- рата хлорного железа .и тиоциан та аммония растворяют в 1 л воды) и встряхивают в течение 1 мин или раз мешивают на миксере.

После расслоения фаз из верхней толуоловой фазы отбирают пробу и фо Тометрируют при 448 нм на спектрофотометре или фотоэлектроколориметр с соответствующим фильтром, против холостой пробы. Кювета не должна содержать воду. Если толуоловьй слой мутный, то кювету можно нагреть в теплой воде или добавить несколько кристалликов безводного сульфата натрия. I

Пример2„К1мг белка субклеточных фаркций печени крысы прибавляют 155 мл смеси метаноп-хлоро форм в соотно01ении 1:1 и упаривают досуха при 70 С (следы метанола завышают результаты определения фос-- фолипидов).

К сухому остатку прибавляют 3 мл толуола (параллельно в пробирку наливают 3 мл толуола - холостой опыт и нагревают 60 с при затем прибавляют 2 мл раствора ферротиоцианата аммония 27503 г гексагидрата хлорного железа и 30,4 тиоцианата аммония растворяют в 1 л. воды) и встряхивают в течени 1 мин или размешивают на миксере о

После расслоения фаз из верхней толуоловой фазы отбирают пробу и фотометрируют при 448 им на спектрофотометре или фотоэлектроколориметр с соответствующим фильтром против х

лостой пробы Кювета не должна содержать воду. Если толуоловый- слой мутный, то кювету можно нагреть в теплой воде или добавить несколько кристалликов безводного сульфата натрия.

Пример 3„ К Ojt мл сыворотки крови прибавляют 1,5 мл смеси ме- танол-хороформ в соотношении 1:1, и упаривают досуха при 70 С (следы метанола завышают результаты определения фосфолипидов)

К сухому остатку прибавляют 3 мл

толуола (параллельно в пробирку наливают 3 мл толуола - холостой опыт) и нагревают 60 с при 60°С, затем прибавляют 2 мл раствора ферротиоцианата аммония (27,03 г гексагидрата хлорного железа и 30,4 грамма тиоцианата аммония растворяют в 1 Л воды) и встряхивают в течение 1 мин или размешивают на миксере. После расслоения фаз из верхней

толуоловой фазы отбирают пробу в кювету и фотометрируют при 448 нм на Спектрофотометре или фотоэлектроколо-

риметре с соответствуюшдм фильтром

1.

против холостой пробы. Кювета не

должна содержать воду. Если толуоловый слой мутный, то кювету можно негреть в теплой воде или добавить несколько кристалликов безводного сульфата натрия

Пример 4, В табл.1 и 2 приведены данные по сравнению метода Стеварта (Б) с предлагаемым способом (А) . . 1

При сравнении специфичности пред- -лагаемого способа и способа-прототипа каких-либо различий не выявлено.

Предлагаемый способ количественного определения фосфолипидов по сравнению с известными сокращает время анализа с 48 до 1-2 ч, упрощает методику,, исключая из нее процесс отмывки и дозированньи отбор .Проб5 а также уменьшает количество фосфолипида, Необходимое для минимальных определений.

Формула изобретеня Способ определения фосфолипидов в биологическом объекте, включающий экстракцию фосфолипидов смесью хлороформ-метанол, упаривание экстракта с последутп5ей реэкютракцией фосфолипидов5 обработкой получен

31334083

кого продукта раствором фёрротиоци- си досуха при температуре от ДО С аната аммония и фотометрированием, до температуры закипания экстраги- о т л и .4 а ю щ и и; с я тем, что, рующей смеси, а реэкстракцию проводят с целью ускорения способа, экстракцию . при нагревании в течение 30-60 с проводят в процессе упаривания сме- и температуре 50-60 с.

Сравнение предлагаемого, способа определения фосфолипидов (А) с методом Стеварта (Б), п 10

Таблица 2

Специфичность определения фосфолипидов при сравнении предлагаемого способа (А) с методом Стеварта (Б) (максимум пропускания А90±10, длина светового пути 10 мм)

Вещество (100 мкг)

Фосфатидилхолин Триолеин

Таблица 1

Оптическая плотность

.ZIEZI

0,270 .0,270 О О

Аминокислоты (глицин, цисте- ИИ, серии, метионин, валин, норвалин, лейцин, норлейцин, аланин, аспараги- новая кислота, аспарагин, глута- миновая кислота, лизин, аргинин, фенилаланин, тирозин, триптофан, гистидин, пролин, орнитин)о

Изобретение относится к медицине, предназначено для определения фосЛолипидов в лабораторной практике. Цель изобретения - ускорение способа. К пробе белка субклеточных фракций печени крысы прибавляют пробу смеси метанол-хлороформ (1:1) и упаривают досуха при 40°С.К сухому остатку прибавляют пробу толуола и параллельно такое же количество добавляют в пробирку (холостой опыт) и нагревают 30 с при 30-50 С, затем добавляют раствор ферротиоцианата аммония и 1 мин размешивают на миксере. После расслоения фаз из верхней толуоловой фазы отбирают пробу и фотометрируют при 448 им на спектрофотометре или фотоэлектроколориметре с соответствующим фильтром против холостой пробы. Для осветления мутного толуолового слоя добавляют несколько кристаллов безводного сульфата натрия. 2 табл. (Л со со 4 О СХ) со