Способ получения стероидных производных с замещенной 3-аминогруппой или их кислото-аддитивных солей Советский патент 1987 года по МПК C07J5/00 

1

Изобретение относится к способу получения новых стероидных соедине- ниц, конкретно к стероидным производным с замещенной 3-аминогруппой общей формулы

СНз X (I) Rlf -f--W

% КГ

где W

:N

XAJ

-водород или гидроксильная группа;

-группа СН-х или СН

1

X

сн-он

R - водород или метил;

R - водород или метил;

RJ - водород или радикал oi-амино- карбоновой кислоты, остаток аланина, глютаминовой кислоты, серина, фенил- аланина, триптофана, пролина, или остаток пептида, содержащего 2-3ci-- -а минированные кислоты, - глицил-гли цин, при этом, если одновременно R - метил, а W и Rg - водород, а X - радикал СН

в этом случае Rj не мо

жет быть остатком цС-аминокарбоновой кислоты, если одновременно R - метил, RJ и W - водород, а X - группа

ОН

гидроксил которой имеет конфигурацию (S), и аминогруппа находится в положении ЗЛ-, то R, не мо- . жет быть глицил-глициновым радикалом, или их кислото-аддитивных солей, обладающих иммунотерапевтическими свойствами.

Цель изобретения - получение новых производных стероидов, обладающих преимуществами в фармакологическом отношении перед известными струк- турньми аналогами.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. (2S)2-амино-Ы- - (20S)-20-гидpoкcи-5|)6-пpeгнaн-Зii-илJ пропанамид (хлоргидрат и основание).

Стадия А: 2-(1,1-димeтилэтoкcикap- бoнилaминo)-N- (205)-20-гидрокси- (5л)прегнан-3(-ил -пропанамид.

1,92 г (20S) Зо -амино-Зс -прегнан- -20-ола и 2,27 г трет-бутилокси кар- бонил-Ь-аланина растворяют в 60 см хлороформа и 12 см пиридина. Пере--

а327789 . 2

мешивают раствор в инертной атмосфере при 0-5°С и прибавляют 1,1 А г хлоргидрата 1-этил-3-(3-диметиламиg нопропил)-карбодиимида. По истечении 1 ч 15 мин, заново прибавляют 1,15 г хлоргидрата- 1-этил-3-(3-диметиламино- пропил)-карбодиимида, перемешивают в течение 50 мин при 0-5°С, сушат, за10 бирают в водный раствор бикарбоната натрия, экстрагируют этиловым эфиром уксусной кислоты, промывают насьщ5ен- ным водным раствором хлористого натрия, а затем нормальным водным раст15 вором соляной кислоты и потом заново насыщенным водным раствором хлористого натрия, сушат, кристаллизуют в изопропиловом эфире, отсасывают, промывают изопропиловьм эфиром, сушат

20 при под уменьшенным давлением- и получают целевой продукт, т.пл. 171°С. .

Стадия Б: хлоргидрат и основание (28)2-амино-Ы-(208)-20-гидрокси- 25 -(5oi)-пpeгнaн-3(xi-шl -пpoпaнaмидa.

Вариант 1. В инертной атмосфере- вводят в суспензию 1,55 г полученного в стации А продукта в -100 см нит- рометана, барботируют соляную кис30 лоту в течение 10 мин, перемешивают при 20-25°С в течение 35 мин, удаляют избыток соляной кислоты, отсасывают, промывают этиловым эфиром, |сушат при 60°С под уменьшенным дав35 ртением, перекристаллизуют в метаноле и получают 990 мг целевого хлоргидрата, т.пл. 220°С.

Вариант 2. В инертной ат; 1осфере растворяют 2,7 г полученного в ста40 дни А продукта в 10 см этанола,при- бавляют 40 см хлористоводородного этанола (3,5 н.), перемешивают в течение 8 ч, сушат, забирают в этиловый эфир уксусной кислоты, отсасыва- ют, промывают этиловым эфиром уксусной кислоты, сушат при 60 С под уменьшенным давлением, перекристаллизуют в метаноле и получают 2,2 г целевого хлоргидрата, т.пл. 220°С.

Приготовление основания. 1,74 г

хлоргидрата растворяют в 100 см тет- рагидрофурана, содержащего 30% воды, прибавляют 4 см 2 н. едкого натра, доводят досуха, забирают в 100 см хлороформа, промывают водой, сушат, перекристаллизуют в этиловом эфире уксусной кислоты, и получают 1,27 г целевого основания, т.пл. 224 С.

Согласно предлагаемому способу

: л

БОК-Ъ-Глютамино- | (f CH-CHi-CH СООН ISI

ПЛ СТ If МГ ТТОТЯ

вая кислота

NHi СН-СН20Н 1SI

(хлор

БОК-Ь-Серин

были получены производные, описанные в табл.1.

Таблица 1

isi он

: л

| (

| (f CH-CHi-CH СООН ISI

NHi СН-СН20Н 1SI

. ИН

(хлоргидрат)

210 (хлоргидрат)

БОК-L-Фенил Аланин

БОК-Ь-Трипто- фан

240

fSf (хлоргидрат)

ISI

135 (основание)

БОК-Ь-Пролин

CFj СООН

БОК-глицил- глицин

Вторая функция кислоты - L-глюта- миновой кислоты блокирована в виде бензилового сложного эфира, она освобождается каталитической гидрогенизацией в уксусной кислоте в присутствии палладия до отщепления БОК (БОК - третбутилоксикарбонил).

Пример 8. Хлоргидрат 2-амино -N-(20S)-17(i, 20-дигидрокси-5 1 -прег- нан-ЗсС-ил -ацет амида.

Аналогично примеру 1 (вариант 2), исходя из БОК-глицина и (20S) ЗсС-ами- ; но-5(-прегнан-1 7(1, 2Ь-диола, получают целевой продукт, т.шт. а; 200 С. (D6)v ° (к 1,5%, этанол 95),

/SI

275 (хлоргидрат)

сн,2- Н-СО-СНг-ИН2

240

(xлopгидI aт) 200 затем

252 (основание)

Исходный (20S) 3 6-амино-5в6-прегнан- -17((,, 20-диол может быть получен следующим образом.

Стадия 1: (г)-(5Ю-прегн-17-(20)- -ен-З -ол.

К 16,1 г трет-бутилату калия в растворе в 160 см тетрагидрофурана прибавляют 59,4 г бромистого трифе- нилэтилфосфония, перемешивают в течение 30 мин, прибавляют 23,2 г эпи- андростерона, перемешивают в течение 15 ч, выливают в ледяную воду, экстрагируют зтиловьм эфиром уксусной кислоты, промывают водой, сушат, отгоняют досуха, очищают хроматографи513277896

чески на двуокиси кремния (элант - тилена и 16,5 см пиридина охлаждают

до , вводят

циклогексан - этиловый эфир уксусной кислоты 7:3), кристаллизуют в метаноле, ледянят, отсасывают, сушат и получают 23,1 г целевого продукта,

т.пл. .

Стадия 2. (г)-Зй4азидо-(5())-прегн- -17-(20)-ен,

К раствору 1,66 г данного продукв течение 5 мин 16,5 см трифторуксусного ангидрида, перемешивают 15 мин при комнатной температуре, перегоняют досуха под уменьшенным давлением, прибавляют 200 см воды, отсасывают, промьтают водой, сушат под уменьшенным давле- 18,1 г кристаллов.

нием и получают - О т.пл. 204°С.

та в 30 см бензола и 5 см тетрагид рофурана прибавляют 1,92 г этилового эфира азодикарбоновой кислоты и 3,02 г дифенилового эфира азидофосфорной кислоты, перемешивают на ледяной бане, прибавляют 20 мин раствор 2,88 г трифенилфосфина в 30 см бензола, перемешивают еще в течение 40 мин при 10°С5 промывают раствором 2 н. соляной кислоты, а затем водой, сушат и

-

-

- 2

тгоняют досуха, очищают хроматогра ически на двуокиси кремния (элюент - гептан, а затем гептан - этиловый эфда 1:1) и получают 1,67 г кристалов целевого продукта, т.пл. 114°С осле перекристаллизации в метаноле.

Стадия 3: (г)-5о(,-прегн-17(20)-ен- -Зо -амин (и хлоргидрат) .

В 290 см тетрагидрофурана растворяют 14,5 г полученного вьш1е (Z)- -Зо(,-азидо-(5а,)-прегн-1 7(20)-ена (в данном виде), перемешивают нагревая при 25-27 0, прибавляют в течение 1 ч 800 мг алюмогидрида лития, перемешивают еще 1 ч, удаляют метанолом избыток гидрида, фильтруют, промывают фильтрат водным раствором сегнето- вой соли, а затем насьш;енным водным раствором хлористого натрия, сушат, одгоняют досуха и получают 13,1 г кристаллов целевого амина, т.пл. 90 С

Растворяют основание в 150 см этилового эфира уксусной кислоты и 90 см хлористого метилена, прибавляют 27 см 1,7 н. солянокислого этилового эфира уксусной кислоты, отсасывают, промьгоают этиловым эфиром уксусной кислоты и полученные к:рис- таллы сушат под уменьшенным давлени- ем и получают 13,2 г кристаллов хлор- гидрата целевого продукта, т.пл. 300 С.

(ii)j при 1% в пиридине, при 10% в воде +38,5 ± 1,5 .

Стадия 4. N-(Z,5jC)-nperH-17(20)- -ен-Зсб-ил -трифторацетамид.

В инертной атмосфере вводят в суспензию 16,5 г полученного на стадии 3 хлоргидрата в 165 см вслористого медо , вводят

в течение 5 мин 16,5 см трифторуксусного ангидрида, перемешивают 15 мин при комнатной температуре, перегоняют досуха под уменьшенным давлением, прибавляют 200 см воды, отсасывают, промьтают водой, сушат под уменьшенным давле- 18,1 г кристаллов.

г нием и получают О т.пл. 204°С.

15

20

-

-С

25

30

Стадия 5:. N-(20S)-17«, 20-дигид- рокси-(5йС)-прегнан-Зй -ил -трифторацетамид.

Б инертной атмосфере растворяют 18,1 г полученного продукта в 100 см метилэтилацетона, прибавляют 9 г двуводного N-оксида триметил- амина, а также, как раствор 360 мг четьфехокиси осмия в 71 см метил-- этилацетона, перемешивают 2 ч с ре- флюксом, дают остынуть, прибавляют 200 см 10%-ного раствора тиосульфата натрия в воде, перемешивают 30 мин при.комнатной температуре, декантируют, промывают водой, сушат на сернокислом магние, отфильтровывают, перегоняют досуха под уменьшенным . давлением, очищают полученное масло, хроматографически на двуокиси кремния (элюант-бензол-этиловый эфир уксусной кислоты 7:3) и получают 14 г целевого продукта, т.пл. 172°С, а затем

192 С.

35

4Q

45

6. (205)-3(-амино-5(),-прег- нан-17(, 20-диол.

В инертной атмосфере растворяют 4 г полученного выше продукта в 20 см метанола, прибавляют 8 см натрового щелока, перемешивают в течение 1 ч 30 мин, прибавляют 50 см воды, перемешивают в течение 10 мин, отсасывают, промывают водой, сушат при 40 под уменьшенным давлением и получают 3 г целевого продукта, т.пл. 210 С.

Пример 9. Хлоргидрат 2-ами- но-Н-(205)-20-гидрокси-19-нор-(5о6)- -прегнан-3(-ил -ацетамида.

Аналогично примеру 1 (вариант 1), Q но исходя из БОК-глицина и (20S) -амино-19-нор-(5()-прегнан-20-ола, получают целевой продукт, т.пл. - 270°С с сублимацией, (ot) « 39,5° i:1,5° (к 1% метанол). Исходный (203)-3-о -амино-19-нор- -(5о(,)-прегнан-20-ол может быть получен следующим образом.

Аналогично примеру 8 (стадии 1-3) для получения (Z)-5-ti-nperH-1 7(20)713277898

-eH-3ei-aMHHa, исцоця из 19-нор-эпиан- Пример 11. Хлоргидрат 2-амидростерона был получен (Z)-5(i-19-Hop- . (20R)-20-гидpoкcи-5(x -пpeгнaнпpeгн-1 7 (20) -ен-3в -амин.

Вводят в сусйензию в атмосфере азота 156 мг боргидрида натрия в 5 см тетрагидрофурана, прибавляют по капле при 5°С раствор 0,5 см эфирной вытяжки трифторида бора в 2,5 см тетрагидрофурана, перемешивают 1 ч на ледяной бане, прибавляют 296 мг (Z)-5()i-19-Hop-nperH-17(20)- -ен-Зо -амина в растворе в 3 см тетрагидрофурана, перемепшвают в течение 1 ч 30 мин при комнатной температуре, охлаждают на ледяной бане, прибавляют медленно 2 см 6 и. раствора едкого натра, перемешивают в течение 5 мин при комнатной температуре, декантируют,экстрагируют водный слой тетрагидрофураном, промывают органический слой водой, прибавляют 4 см 5 н. едкого натра, 2 см 110 объемной перекиси водорода, перемешивают в течение 45 мин, экстрагируют

-Зо. ил J-ацет амида,

Аналогично примеру 1 (вариант 1), 5 но исходя из БОК-глицина и (20R)-3ei- -амино-5(1б-прегнан-20-ола, получают целевой продукт, т.пл. 210 С (затем 260 С). (, +22°t Г (к 0,8% .пиридин, содержащий 10% воды), fO Пример 12. Хлоргидрат 2(S)2-, -амино-М-метил-К- (20S)20-гидрокси- -5(-прегнан-3()6-ил -пропанамида.

Подвергают взаимодействию (20S)-3ti -метщ1амино-5в6 прегнан-20-ол с БОК- 5 -L-аланином по примеру 1 (вариант 1) для получения целевого продукта, Хлоргидрат которого также приготовляют, т.пл. 270°С.

Пример 13. Хлоргидрат 2(R)2- 20 -aминo-N-мeтил-N- (205)-20-гидрокси- -5в6-прегнан-3о6-ил -пропанамида.

(20S) -Зй -метиламино-5а{-прегнан- -20-ол подвергают взаимодействию с БОК-Ь-аланином по примеру 1 (вариант

этиловым эфиром уксусной кислоты,про--25 1) для получения целевого продукта, мывают водой, сушат и перегоняют до- хлоргидрат которого приготовляют суха под уменьшенным давлением. Забирают сухой экстракт в 10 см мета(сублимация при около 260 с) .

Пример 14. Получение (2S)-2НОЛа с 5 см 1 н. соляной кислоты.

Пример 14. Получение (2S

нагревают 30 мин на водяной бане при 30 -амино-Ы(205)-20-окси-5й -прегнэн50 0, выпивают в насыщенный раствор (1-Н-индол-З-пропанамида).

бикарбоната натрия, экстрагируют хлористы м метиленом, промывают водой,

сушат, вьшаривают под уменьшенным

давлением и получают 257 мг кристал- 35

лов целевого продук та, т.пл. 190°С.

Согласно примеру 1 (вариант 2) исходя из 3 -амино-5о6-прегнан-20- -ола и трет-бутоксикарбонил-(.-алан

, получают целевой продукт, т.пл 140°С и ((i)j -34 1° (1% CHClj)

Пример 15. i -Диметиламино -N- (20S) 20-гидрокси-5(-прегнан-Зо -ил -ацетамид.

Пример 10. Хлоргидрат 2-ами- Ho-N-( 1 7о(.-гидрокси-20-оксо-5с6-пре гнан-3(1/-ил)-ацетамида.

Аналогично примеру 1 (вариант 2), исходя из БОК-глицина и Зо6-амино-17о6- гидрокси-5(-прегнан-20-она, получают целевой продукт, т.пл. . «

(об) +50±1° (к 1% этанол

95). ..

I

Исходный 3{ -амино-17ei-гидpoкcи- -5()6-прегнан-20-он может быть получен следующим способом. .

Надхромовым окислением полученного в примере 9 на стадии 5 продукта, получают N-( 1 7«;-гидрокси-20-оксо-5

Введение животным продукта, побуждающего активность иммунитетных сиспрегнан-3/-ил)-трифторацетамид,

т.пл. 178 С (затем 18б С), который 06-55тем, выражается увеличением шока в

рабатывают по примеру 9 на стадии 6,ответ на введение интигена, к котодля получения Зо6-амино-17ой-гидрокси-рому животное было сенсибилизировано. -5()С-прегнан-20-она, т.пл. (пос- Мыши самцы весом 30-35 г сенсибиле кристаллизации в воде).лизированы внутриподошвенным путем

-Зо. ил J-ацет амида,

Аналогично примеру 1 (вариант 1), но исходя из БОК-глицина и (20R)-3ei- -амино-5(1б-прегнан-20-ола, получают целевой продукт, т.пл. 210 С (затем 260 С). (, +22°t Г (к 0,8% пиридин, содержащий 10% воды), Пример 12. Хлоргидрат 2(S)2-,. -амино-М-метил-К- (20S)20-гидрокси- -5(-прегнан-3()6-ил -пропанамида.

Подвергают взаимодействию (20S)-3ti -метщ1амино-5в6 прегнан-20-ол с БОК- -L-аланином по примеру 1 (вариант 1) для получения целевого продукта, Хлоргидрат которого также приготовляют, т.пл. 270°С.

Пример 13. Хлоргидрат 2(R)2- -aминo-N-мeтил-N- (205)-20-гидрокси- -5в6-прегнан-3о6-ил -пропанамида.

(20S) -Зй -метиламино-5а{-прегнан- -20-ол подвергают взаимодействию с БОК-Ь-аланином по примеру 1 (вариант

1) для получения целевого продукта, хлоргидрат которого приготовляют

1) для получения целевого прод хлоргидрат которого приготовля

(сублимация при около 260 с) .

для получения целевого продукта, ргидрат которого приготовляют

Пример 14. Получение (2S)-2-3 -ил-(1-Н-индол-З-пропанамида).

Согласно примеру 1 (вариант 2), но исходя из 3 -амино-5о6-прегнан-20- -ола и трет-бутоксикарбонил-(.-алани, получают целевой продукт, т.пл. 140°С и ((i)j -34 1° (1% CHClj).

Пример 15. i -Диметиламино- -N- (20S) 20-гидрокси-5(-прегнан-Зо,- -ил -ацетамид.

Процесс проводят аналогично примеру 1 (стадии А), используя 2,552 г (20S) (,-амино-5(6-прегнан-20-ола и 3,350 г хлоргидрата N,N-димeтил глицина. Получают 4 г сырого продукта, содержащего целевое соединение и I,N-дизaмeщeннoe производное. Омылением едким натром в метаноле получают целевой продукт, т.пл. , ((Oj +29 t 1 (С 1% CHjClj)..

Фармакологическое исследование. 1. Вспомогательное средство анафилактического шока.

Введение животным продукта, побужающего активность иммунитетных систем, выражается увеличением шока в

при помощи сывороточного альбумина быка. Спустя 8 дней, мьшш получают антиген внутривенным путем. В услови-. ях минимальной сенсибилизации, конт- рольные животные не проявляют смер- ic тельного шока во время последнего введения. Исследуемый продукт инъекти- руется внутриподошвенным путем в смеси с антигеном: если этот продукт. является вспомогательным средством, fO то он увеличивает сенсибилизацию и тогда следует смертельньй шок после введения внутривенным путем.

В качестве активной дозы принята доза, которая вызывает смертность, равную или выше чем 50% животных. Результаты приведены в табл. 2.

Таблица 2

2, Проба на розетки, образованные красными кровяными тельцами барана. Введение животным продукта, стимулирующего активность иммунитет- ных систем, увеличивает их способности к впрыскиванию продукта иммунизации.

Крысы-самцы в возрасте 3 мес. сенсибилизированы внутрибрюшинным путем при помощи эритроцитов б-арана (;а,ень 0), 7 дней спустя (день 7) их селезенка изъята и спленоциты введены в контакт с эритроцитами барана, затем подсчитывают процент лейкоцитов, вокруг которых эритроциты образовали розетки.

Изучаемый продукт вводится через рот ежедневно.

Иммуностимулирующей дозой считается та доза продукта, которая умножает приблизительно на 2 процент розеток, на-блюдаемых у контрольных животных. Результаты приведены в табл. 3.

Таблица

Пример

Доза на животное в мг/кг

5 6

9 10

Через рот 1

2 5

5 5

3. Исследование острой токсичнос- ти. Летальные дозы. DL различных изучаемых соединений были оценены после введения через рот мышам. Дозой DLp называется максимальная доза, которая не вызывает смертность по истечении 8 дней. Результаты даны в табл.4.

II, ТаблицаА

ч1327789

Продолжение табл.4

10

1000

11

:.400

Дозой, которая изменяется в зависимости от применяемого производного, может быть от 10 мг и 1 г в день при применении через рот (мужчины) .

Изопринозин, взятый в качестве аналога, показал отсутствие в тесте при дозе 5 мг/мкмг. В тесте 2 для этого продукта отмечена иммуностимулирующая доза, превышающая 50 мг/мкм

Таким образом, целевые соединения более активны, чем изопринозин, обладающий аналогичной биологической активностью.

Формула и з.о бретения

Способ получения стероидных производных с замещенной 3-аминогруп .пой общей формулы (I)

--W

де W - водород или гидроксильная группа; группа СНз или pvr

X

СН

R - водород или метил; R - водород или метил;

ОН

89

R.

12

водород или радикал а: -аминокарбоновой кислоты, остаток аланина, глютаминовой кислоты,серина, фенилаланина, триптофана, пролина или остаток пептида, содержащего 2-ЗА-аминированные кислоты, глицил-глицин, при зтом, если одновременно R - метил, W и Rg - дикал

водород, а X - раСНз

в этом случае

R, не может быть остатком cL -аминокарбоновой кислоты, если одновременно R - метил, RJ и W - водород, а X - группа - СН.. гидро СН-ОН

ксил которой имеет конфигурацию S, а аминогруппа находится в положении 3tl-, то RJ не может быть глицил-гли- циновым радикалом,

или их кислото-адцитивных солей, о т- личающийся тем, что амин общей формулы (II)

ШгХ

-w

rfW

H21ML4J

где W, X и R имеют указанные значения,

вводят в реакцию с (L -аминокислотой или пептидом, содержащим 2- или 3 - -аминированные кислоты, аминофункция которых защищена трет-бутоксикарбони- лом, затем удаляют защитную группу с помощью кислотного гидролиза с получением продукта общей формулы (I) и целевой продукт вьщеляют и при желании переводят в соль.

Изобретение касается стероидных производных (СП), в частности соединений общей формулы HZ. Ri СНчХ RiTlH-cTr где W - Н или ОН; X - группа CHjC(O)- или CHjCH(OH)-; R( и Rj - CHj tmH Н; Rj-Н или остаток о -аминокарбоно- вой кислоты, аланина, триптофана, пролина, остаток пептида, содержащего 2- или ЗцС-аминированные кислоты, глицил-глицин, при этом, если а) R,-CH, W и R,-H и X - )-, то R, не может быть остатком ii-амино- карбоновой кислоты; б) R,-CHj, W и X-CHjCH(OH)-, в которой ОН имеет конфигурацию S, а аминогруппа находится в положении Зс, то R не может быть глицил-глициновым радикалом, или их кислото-аддитивных солей.Соединения СП обладают иммунотерапевти- ческим действием и могут быть использованы в медицине. Цель изобретения - создание новых стероидных производных с лучшей активностью. Синтез СП ведут из соответствующего не замещенного по аминогруппе соединения, которое подвергают реакции с :t-аминокислотой или пептидом, содержащие 2- или 3 -аминированные кислоты, аминогруппа которых защищена трет-буток- сикарбонилом. Для получения СП защищенную аминогруппу гидролизуют в присутствии кислоты. Вьщеление СП ведут в виде основания или соли. Испытания СП показьшают, что они активнее, чем известный изопринозин. О) со tsD 00 СО ы

Редактор М.Недолуженко

Составитель И.Федосеева

Техред Л.Олийнык Корректор В.Бутяга

Заказ 3398/58Тираж 347Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4