Способ определения ионов кальция в мышечных волокнах Советский патент 1987 года по МПК G01N33/48 A61B10/00 

Изобретение относится к медицине, а именно к области цитохимических исследований для анализа распределения ионов кальция и других двухвалентных ионов при излучении быстро протекающих внутриклеточных процессо например, мьшечных повреждений, вызванных действием фосфорорганических инсектицидов, а также процессов возбуждения нервных клеток и мьшечных волокон в норме.

Цель изобретения - повьшение точности способа за счет полного выявления ионов кальция в митохондриях, саркоплазматическом ретикулуме и 1 и А зонах путем пропитки срезов в вакууме и окрашивания их в 2-2,5%-ном растворе пироантимоната калия.

Способ осуществляют следующим образом.

Металлическим стержнем, охлажденным до температуры жидкого азота, проводят быстрое замораживание участка диафрагмальной мышцы крысы, наркотизированной гексеналом. Замороженный кусочек диафрагмы быстро помещают в ацетон, охлажденный до температуры твердой углекислоты, в котором выдерживают в течение 5ч для замещения витрифицированной воды из объекта с последующим постепенным (в течение 1 ч) повьшением температуры до комнатной. Далее объект помещают в смесь ацетона с аралдитом, концентрация которого постепенно повьшалась до 100% по следующей схеме: 3 ч. ацетона на 1 ч аралдита, т.е. 3:1, далее 1:1; 1:3; чистый аралдит.

В каждой смеси объект вьщержива- ют в течение 2 ч. Последний этап в чистом аралдите проводят в вакуумной

Редактор П.Гереши Заказ 3479А47

Составитель М.Позняк Техред А. Кравчук

Корректор

Тираж 776Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб,, д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

камере (рабочий вакуум 10 торр). Далее осуществляют полимеризацию при 60 С и резку на ультрамикротоме, в ванночку ножа которого заливают

2-2,5%-ный раствор пироантимоната калия в дистиллированной воде. Просмотр срезов осуществляют в электронном микроскопе. Ионы кальция определяют по наличию электронно-плотного осадка.

Использование предлагаемого способа позволяет сохранить основные компоненты объекта в неизменном виде,

закрепив в смоле исследуемые ионы до момента соприкосновения их с водными раствора, что создает условия более полного и точного выявления исходной локализации ионов в близком

к нативному состоянию, что может быть полезно при изучении динамики протекания различных патологических процессов в живом организме.

Фор м у ла изобретения

Способ определения ионов кальция в мьшечных волокнах, путем замораживания ткани жидким азот.ом, обезвоживания в ацетоне охлажденном твердой углекислотой, пропитки в смолах и приготовления срезов, отличающийся тем, что, с целью повьшения точности способа а счет полного выявления ионов кальция в митохондриях, саркоплазматическом ретикулуме и 1 и А зонах, пропитку проводят под вакуумом, а срезы окращивают 2-2,5%-ным раствором пироанти- маната калия, при этом ионы кальция определяют по наличию электронно- плотного осадка.

Корректор А.Тяско