Способ определения простагландинов Советский патент 1987 года по МПК G01N30/04 

1,13

Изобретение относится к аналитической химии, b частности к способам анализа водных растворов физиологически активных соединений кислотной природы - простагла«динов - методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, и может быть использовано в медицинской, фармацевтической, химической промышленности и биотехнологии.

Цель изобретения - упрощение и повышение точности способа,

Способ осуществляют следующим образом.

К анализируемой пробе, содержащей простагландины в количестве от 30 кг до 100 мкг, прибавляют метанольный раствор тетрафениларсония или фосфо- ния хлорида, или тетрапентил-тетра- гексиламмония бромида, или триоктил- метиламмония иодида (ТОМАИ), устанавливая их концентрацию в смеси 0,63- 2,5 мМ, Из полученной смеси простагландины экстрагируют 30-70 мМ раствором 4-бромфенацилбромида в хлористом метилене. Объемное соотношение анализируемая проба - экстрагеит 1:0,58-0342. Полученный экстракт анализируют на колонке (4,6-250 мм) с сорбентом Ультрас фер-ODS (5 мкм) в потоке подвижной фазы метан ол - вода (80:20 об/об) при расходе последней 1 мл/мин. Детектирование при длине волны 260 нм.

Пример UK О,6 мл раствора простагландинов ПГЕ,, ПГФ,,, ПГД,.,, ИГА, и ПГБ,2, растворенных в количестве по 8 мкг каждого в фосфатном или

цию в растворе или 0,63, или 1,65 ил 2,5 мМ. Во всех случаях результат

трис-НС1 буфере (50 мМ, рН 8,0)., при- 40 вещества, дающего органический ка- бавляют 15 мкл 0,1 М раствора в мети- тион, тетрапентиламмоний бромид ноле тетрафениларсония хлорида (ТФАХ), (ТПАБ), устанавливая его концентра- устанавливая содерл ание последнего в смеси 1,6 мМ. К полученной смеси прибавляют 0,3 мл .экстрагента., представ- полученным в примерах 1-6 ляющего собой 50 мМ раствор 4-бромфе нацилбромида в хлористом метилене (объемное соотношение анализируемая .смесь - экстрагент 1:0,5), смесь

Примеры 10-12, ПГФ2,,раст воренный в К фосфатном буфере (50 мМ рН 7), определяют в условиях пример 1-9 с.применением тетрагексиламмоний gQ бромида (ТГАБ),при его концентрации

встряхивают в течение двух мин, дают смеси расслоиться и 10 мкл органической фазы вводят в жидкостный хроматограф, снабженный колонкой с сорбентом Ультрасфер-ODS зернением 5 мкм, В качестве подвижной фазы используют смесь метанол - вода (80:20), объемны расход которой равен 1 мл/мин. Время удерживания ПГЕ 16, ПГД 17,5,, ПГФ 19,5, ПГА, 22,5, ПГБ,, - 24 мин. По-0

5

0

5

0

5

грешность определения содержания каждого из простагландинов не превьш1ает 10%.

Пример 2. К О,6 мл раствора ПГЕ, в трис-НС буфере (50 мМ, „рН 7) прибавляют растворенный в метаноле ТФАХ, концентрация которого в полученной смеси составляет 0,63 мМ. Дальнейшее определение проводят анапогич- но примеру 1 с получением идентичного результата.

Приме р 3. В анализируемой пробе по примеру 2 концентрация ТФАХ составляет 2,5 мМ. В условиях обработки пробы, аналогичных примеру 1, получен идентичный результат.

Пример 4. В условиях приме- . ра 1 анализируют смесь по примеру 2, используя в качестве соединения, дающего органический катион, тетрафенил- фосфоний хлорид (ТФФХ)5 концентрация которого в смеси 0,63 мМ. Результат идентичен результатам примера 1 ,

Пример 5, Проводят анализ простагландинов аналогично примеру 1 с применением ТФФХ при его концентрации 1,6 мМ. Результат аналогичен полученному в примере 1,

Пример 6. В условиях анализа -по примеру 1 концентрация ТФФХ составляет 2,5 мМ. Результат аналогичен результатам полученным в примерах 1-5.

Примеры 7-9. Анализ проводят, используя в качестве растворителя для простагландинов трис-НС1 буфер (50 мМ, рН 9,0), качестве

цию в растворе или 0,63, или 1,65 или 2,5 мМ. Во всех случаях результат

вещества, дающего органический ка- тион, тетрапентиламмоний бромид (ТПАБ), устанавливая его концентра- полученным в примерах 1-6

40 вещества, дающего органический ка- тион, тетрапентиламмоний бромид (ТПАБ), устанавливая его концентра- полученным в примерах 1-6

Примеры 10-12, ПГФ2,,растворенный в К фосфатном буфере (50 мМ рН 7), определяют в условиях примера 1-9 с.применением тетрагексиламмоний gQ бромида (ТГАБ),при его концентрации

0,63, или 1,6,, или 2,5 . Результат

55

аналогичен полученному по примеру 1„ Примеры 13-15, Определение ПГД , растворенного в К-фосфатном буфере (50 мМ, рН 9,0)5 проводят в условиях примеров 1-12, используя ТОМАИ при его концентрации в смеси 0,63, или 1,6, или 2 .,5 мМ. Результат аналогичен полученному в примере 1 ,

соотношении анализируемая экстрагент 1:0,58 или 1:0, таты аналогичны полученным 1-15, 26.

Примеры 36-37. А водят аналогично примерам соотношении анализируемая экстрагент 1:0,17 или 1:1,

Примеры 16-25. В условиях примера 1 определение проводят с при - менением или ТФАХ, или ТФФХ, или ТПАБ .или ТГАБ, или ТОМАИ при их концентрации в смеси 0,3 или 5 мМ (запредельные значения). Ошибка определения простагландинов превышает 10%.

П р и м е р 26. Определение простагландинов проводят в условиях при- 10 определения превышает 10%. мера 1 при концентрации раствора 4- бромфенацилбромида- в хлористом метилене 30 мМ. Результат идентичен полу- « енным в примерах 1-15,

Пример 27. В условиях анализа по примеру 1 и аналогичном составе анализируемой смеси концентрация 4-бром- фенацилбромида в хлористом метилене равна 70 мМ. Результат идентичен полученным в примерах 1-15,26.

Примеры 28-29. В условиях

20

Формула изобре

Способ определения прос нов путем экстрагирования 5 емьгх вещаств из анализируе органическим растворителем щей обработкой экстракта х реагентом и разделением по смеси на колонке, заполнен чески модифицированным сил потоке подвижной фазы, сме ческого растворителя и воды чающийся тем, что, упрощения и повьш ения точн

примеров 1-15 определение ПГА про Способ определения простагландинов путем экстрагирования определя- 5 емьгх вещаств из анализируемой пробы органическим растворителем с последую щей обработкой экстракта химическим реагентом и разделением полученной смеси на колонке, заполненной химически модифицированным силикагелем в потоке подвижной фазы, смеси органического растворителя и воды, отли чающийся тем, что, с целью упрощения и повьш ения точности споводят при концентрации раствора 4- бромфенацилбромида 20 или 100 мМ (запредельные значения). Ошибка опре- 25 соба, в качестве экстрагента исполь- деления превьш1ает 10%.зуют 30-70 мМ раствор 4-бромфенацеПримеры 30-33. В условиях тилбромида в хлористом метилене при примеров 1-15 и проб аналогичного состава проводят определение простагландинов, используя в качестве раст- зо Os58, экстракцию проводят в присутст- ворителя для 4-бромфенацилбромида или вии хлорида тетрафениларсония, или хлороформ, или тетрахлорид углерода, или этилацетат, или гексан. В ходе анализа простагландины не определены.

объемном соотношении анализируемой пробы к экстрагенту, равном 1:0,42хлорида трифенилфосфония, или бромида тетрапентиламмония, или бромида гексиламмония,или иодида триоктилме- тиламмония при их концентрации в смеси, равной 0,63-2,5 мМ.

Примеры 34-35. Анализ проводят аналогично примерам 1-15 при

ор А. Огар 3958/42

Составитель С. Хованская Техред ЛоСердюкова

Ко По

Тираж 776 ВНИШ1И Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

. Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4.

754

соотношении анализируемая проба - экстрагент 1:0,58 или 1:0,42. Результаты аналогичны полученным в примерах 1-15, 26.

Примеры 36-37. Анализ проводят аналогично примерам 1-15 при соотношении анализируемая проба - экстрагент 1:0,17 или 1:1,7. Ошибка

определения превышает 10%.

определения превышает 10%.

Формула изобретения

Способ определения простагландинов путем экстрагирования определя- емьгх вещаств из анализируемой пробы органическим растворителем с последующей обработкой экстракта химическим реагентом и разделением полученной смеси на колонке, заполненной химически модифицированным силикагелем в потоке подвижной фазы, смеси органического растворителя и воды, отличающийся тем, что, с целью упрощения и повьш ения точности способа, в качестве экстрагента исполь- зуют 30-70 мМ раствор 4-бромфенацетилбромида в хлористом метилене при Os58, экстракцию проводят в присутст вии хлорида тетрафениларсония, или

объемном соотношении анализируемой пробы к экстрагенту, равном 1:0,42тилбромида в хлористом метилене при Os58, экстракцию проводят в присутст- вии хлорида тетрафениларсония, или

хлорида трифенилфосфония, или бромида тетрапентиламмония, или бромида гексиламмония,или иодида триоктилме- тиламмония при их концентрации в смеси, равной 0,63-2,5 мМ.

Корректор А. Тяско Подписное

Изобретение касается аналитической химии, в частности хроматографи- ческого анализа простагландинов, и может быть использовано в медицине. биотехнологии, химии. Цель - упрощение анализа и повьппение его точности. Анализ пробы ведут зкстракцией другим растворителем 30-70 мМ раствором 4-бромацетш1бромида в хлористом метилене (объемное соотношение 1:0,42- 0,58) в присутствии хлорида трефенил- арсония (или фосфония) или бромида тетрапентил-(триоктил или гекснл)- аммония при их концентрации в смеси 0,63-2,5 мМ. Полученную смесь разделяют в колонне, заполненной модифицированным силикагелем в потоке подвижной фазы - смеси органического растворителя и воды (метанол - вода). Детектирование ведут при длине, волны 260 нм. Погрешность определения содержания каждоро из простагландинов до 10%. (Л 00 00 4 СП