Способ определения гликозаминогликанов в сыворотке крови Советский патент 1987 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицинской химии, а именно к определению гликозаминогликанов в сьторотке крови, и может быть использовано в диагностических целях в клинике, а также в других областях народного хозяйства, где исследуются гликозаминоглика- ны (ГАГ) биологических жидкостей.

Целью изобретения является сокращение времени определения при сохра- нении точности способа.

Способ осуществляется следующим образом.

К 1 мл сыворотки крови прибавляют 3-4 мл дистиллированной воды, затем хлорную кислоту в конечной концентрации 0,53-0,62 М, через 10-15 мин центрифугируют при 3 тыс. об/мин в течение 10-15 мин. Осадок удаляют, а в надосадочную жидкость приливают фос- форно-вольфрамовую кислоту в конечной концентрации 1-1,27%, через 10-15 мин центрифугируют при 3 тыс, об/мин в течение 10-15 мин. Полученный осадок растворяют в NaOH в конечной концент- рации 0,002-0,0026 н. и дистиллированной воде до общего объёма 1 мл. Далее к полученному раствору добавля- йт этанол до конечной концентрации 66-70% и оставляют на 40-60 мин при 3-6°С. После выпадения осадка центрифугируют при 3 тыс. об/мин в течение 5-10 мин. Осадок растворяют в 1 мл дистиллированной воды, прибавляют 5 мл коцентрированной серной кис- лоты (УД. вес 1,8 ХЧ), содерх ащей 0,95% тетраборнокислого натрия кристаллического, перемащивают и помещают в водяную баню на 10 мин. После охлаждения в пробирку добавляют 0,2 мл 0,125%-ного раствора карбазо- ла в 96%-ном этаноле, далее нагревают в водяной бане в течение 10 мин и после охлаждения измеряют экстинкцию на КФК-2 при 71 540, чувствитель- нести 1.

Пример 1.. Определение содер жания ГАГ сыворотки крови донора М.

К 1 мл сьшоротки крови донора М. добавляют 3,5 мл дистиллированной воды, затем хлорной кислоты в конечной концентрации 0,62 М, через 10 мин центрифугируют при 3 тыс. об/мин в течение 10 мин. Осадок удаляют, в надосадочную жвдкость прибавляют фос форно-вольфрамовую кислоту в конечно концентрации ,257, и в 2 н. HGi, через 10 мин центрифупфуют при 3 тыс.

об/мин в течение 10 мин. Полученный осадок растворяют в NaOH в конечной концентрации 0,0025 н. и дистиллированной воде до общего объема 1 мл. Далее прибавляют этанол в конечной концентрации 66%, перемешивают и оставляют на 50 мин при 5°С. Осадок отделяют центрифугированием в течение 5 мин при 3 тыс. об/мин. Надосадочную жидкость сливают, а в пробирку приливают мл дистиллированной воды растворяют осадок ГАГ, прибавляют 5 мл серной кислоты, содержащей 0,95% тетраборнокислого натрия кристаллического, растворяют перемещива- ют и помешают в водяную баню 100 С на 10 мин. Далее вынимают из бани, охлаждают до комнатной температуры и приливают 0,2 мл 0,125%-ный раствор карбазола в этаноле, повторно нагревают в водяной бане 10 мин,после охлалсдения измеряют экстинкцию на КФК 2 при А 540, чувствительности 1; плотность равна 0,18, что соответствует по калибровочной кривой, построенной по глюкуроновой кислоте 7,5 гамм/мл ГАГ сыворотки крови.

Пример 2. Определение содержания ГАГ сыворотки крови донора М. при минимальных значениях параметров

К 1 мл сыворотки крови прибавляют 3,5 мл дистиллированной воды, затем HCiO в конечной концентрации 0,53 М, через 10 мин центрифугируют при 3 тыс. об/мин 10 мин, осадок удаляют и в -надосадочную жидкость прибавляют фосфорно-вольфрамовую кислоту в 2 н. HCi в конечной концентрации 1%, через центрифугируют при 3 тыс. об/мин, полученньй осадок растворяют в NaOH в конечной кон центрации 0,002 н. до общего объема 1 мл в дистиллированной воде. Далее к полученному раствору прибавляют этанол до конечной концентрации 66%, оставляют на 40 мин при 3 С, затем центрифугирзтот при 3 тыс. об/мин в течение 5 мин. Полученный осадок растворяют в 1 мл дистиллированной воды, приливают 5 мл конц. серной кислоты, содержащей 0,95% тетраборнокислого натрия кристаллического, перемешивают, помещают на водяную баню на 10 мин, после охлаждения добавляют 0,2 мл 0,125%-ного раствора карбазола в этаноле, помещают в водяную баню на 1 О мин, охлаждают и измеряют экстинкцию на КФК-2 при -А 540, чув313523674

ствительности 1; оптическая плотность дующей фотометрией, отличаю- раствора О,18, что соответствует щ и и с я тем что, с целью сокраще- 7,5 гамм/мл в сыворотке крови. ния времени определения при сохранении точности способа, сьгооротку кроФормула изобретенияви депротеинизируют хлорной кислотой

в конечной концентрации 0,53-0,62 М,

Способ определения гликозаминогли- а осаждение гликозаминогликанов прр- канов в сыворотке крови путем обра- водят фосфорно-вольфрамовой кислотой ботки реактивами и этанолом с после- ю в конечной концентрации 1-1,27%.

Изобретение относится к биохимии. Цель изобретения - сокращение времени определения при сохранении точности способа. Сыворотку крови с дистиллированной водой центрифугируют. В надосадочную жидкость прибавляют фосфорно-вольфрамовую кислоту с соляной кислотой и центрифугируют. Осадок растворяют, прибавляют этанол и центрифугируют. После растворения осадка добавляют серную кислоту с тетраборнокислым натрием, помещают на водяную баню и измеряют экстинкцию.