Способ определения концентрации сердечных гликозидов в растворе Советский патент 1987 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицинской биологии и может быть использовано в фармацевтической промьшшенности для контроля качества препаратов сер- дечных гликозидов.

Цель изобретения - упрощение способа за счет использования калийсе- лективного электрода и эритроцитов кролика в качестве тест-объекта.

Пример 1. Определение концентрации уабаина в водных растворах.

Определение начинают с отбора 10 мл крови из ушной вены кролика в гепаринизированную пробирку. Эритро- .циты осаждают центрифугированием при 3000 g/мин в течение 10 мин, трижды промывают холодной инкубационной средой, содержащей, мМ: NaCi 160; KCi 5; трис-HCi 5, рН 7,4, удаляя суперна- тант и лейкоциты путем отсасывания. Затем из полученной эритроцитарной массы готовят суспензию в инкубационной среде вышеуказанного состава.

Из стандартного препарата уабаина готовят ряд водных растворов - от 5x10 до 5x10- И.

Суспензию эритроцитов разливают по 0,49 мл в пластиковые флаконы,подходящего размера. В каждую пробу добав- ляют по 0,01 мл соответствующего раствора уабаина, чтобы получить концентрационный ряд от 10 до М гликозида в пробе. В одну из проб добавляют 0,01 мл анализируемого раст- вора. Пробы перемешивают и измеряют разность потенциалов между калийсе- лективным электродом и электродом сравнения в каждой пробе, При этом необходимо соблюдать следующие уело- вия: электрод сравнения должен быть снабжен солевым мостиком,заполненным инкубационной средой; перед каждым / опытом необходимо проверять крутизну электродной функции, чтобы убедиться в работоспособности калийселективного электрода, для повьш1ения стабильности электродного потенциала измерения требуется проводить в термостатируемой ячейке; для контроля дрейфа потенциа- лов электродной пары нужно предварять каждое измерение в пробе проверкой разности потенциалов в инкубационной среде.

После измерения исходной разности потенциалов в каждой пробе флаконы с пробами помещают в термостат и инкубируют при 37°С в течение 3 ч, затем пробы вновь перемешивают и измеряют

конечную разность потенциалов в пробах.

Далее вычисляют прирост разности электродных потенциалов за время инкубации с учетом дрейфа потенциалов для каждой пробы. Зависимость прироста разности потенциалов от концентрации уабаина в пробе изображают графически в виде кривой линии. По ней определяют концентрацию уабаина в анализируемом растворе следующим образом: находят на кривой точку, ордината которой соответствует приросту разности электродных потенциалов в анализируемой пробе (к примеру,это значение равно 5,5 мВ ). Абсцисса этой точки, равная 2,5х10 М, соответствует концентрации уабаина в анализируемой пробе, а поскольку в ней анализируемый раствор разбавлен в 50 раз то, умножая величину концентрации уабаина в определяемой пробе на коэффициент разбавления, получают значение концентрации уабаина в анализируемом растворе, равное 1,255x10- М ( d- 0,235x10- М, что соответствует по гр ещно с ти спо со б а-про то типа).

Пример 2. Определение концентрации дигитоксина в спиртовых растворах.

Из стандартного препарата дигитоксина (вследствие его нерастворимости в воде), готовят спиртовые растворы с концентрацией от 1,25x10 до 5х х10 М. Суспензию эритроцитов кролика получают таким же способом, как при определении уабаина, затем ее разливают до 0,49 мл в пластиковые флаконы и добавляют по 0,01 мл соот- ветствзгющего спиртавого раствора дигитоксина, чтобы получить концентрационный ряд от 0,25x10- до Ю- М. В одну из проб добавляют 0,01 мл анализируемого раствора. Незначительное содержание спирта (2% по объему) в пробах не влияет на определение да- гитоксина.

Дальнейшие операции (измерение разности электродных потенциалов, инкубация проб и графическое изображение результатов проводят так же, как для определения уабаина.

Кривая, отражающая зависимость прироста разности потенциалов электродной пары от концентрации дигитоксина в пробах, изображена на чертеже.

При помощи данной кривой определяют концентрацию дигитоксина в анализируемом растворе способом, указанным выше для определения уабаина.

.Таким же образом определяют концентрацию любого другого гликозида.

Результаты контрольного определения уабаина и дигитоксина приведены в таблице.

Формула изобретение

Способ определения концентрации сердечных гликозидов в растворе путем измерения активности препарата

K -На -АТ фазы .индикаторным электродом в инкубационной среде с последующим расчетом калибровочной кривой,

отличающийся тем, что, с целью упрощения способа за счет сокращения числа стадий, в качестве индикаторного электрода используют К- селективный электрод, а в качестве

препарата-используют эритроциты кролика, которые добавляют в инкубационную среду в количестве, обеспечивающем насыщающую концентрацию K -Na -AT- фазы.

Ui tu

«C3

vt

Редактор И.Рыбченко

Составитель Л.Сабурова

Техред М.Дидык Корректор С.Шекмар

Заказ 6425Тираж 776Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие,г. Ужгород, ул. Проектная, 4

I-

g

ь

m Cv

Изобретение относится к фармако логии. Цель изобретения - упрощение способа. К суспензии эритроцитов добавляют спиртовый раствор дигитокси- на и в одну из проб вводят анализируемый раствор. После перемешивания измеряют разность потенциалов между калийселективным электродом и электродом сравнения в каждой пробе. Пробы инкубируют, измеряют конечную разность потенциалов в пробах и вычисляют прирост разности электродных ро- тенциалов за время инкубации. Затем определяют концентрацию дигитоксина в анализируемой пробе. 1 ил., 1 табл. оо О1 ГчЭ 05 О 00