Способ диагностики тромбинемии Советский патент 1991 года по МПК G01N33/86 

Ё

Изобретение относится к медицине, а именно к коагулологии, и касается способа диагностики тромбинемии. Целью изобретения является повышение специфичности способа диагностики тромбинемии. Для этого определяют наличие растворимых комплексов мономеров фибрина в плазме путем осаждения B-нафтолом, или этанолом, или протаминсульфатом и определяют содержание фибриногена, результаты определения выражают в виде показателя, вычисленного как отношение экстинций растворов соответствующего паракоагулянта и фибриногена, и, если вычисленные таким образом показатели превышают максимальный средний уровень у здоровых доноров, диагностируют тромбинемию.

Изобретение относится к медицине, а именно к гемокоагулологии и касается способа диагностики тромбинемии.

Цель изобретения - повышение специфичности способа диагностики тромбинемии за счет определения наличия растворимых комплексов мономеров фибрина в плазме путем осаждения их В-нафтолом или этанолом, или протаминсульфатом и определения в плазме содержания фибриногена.

Результат определения выражают в виде показателя, вычисленного как отношение экстинций растворов соответствующего паракоагулянта и фибриногена, и, если вычисленные таким образом показатели превышают максимальный средний уровень у здоровых доноров, диагностируют тромбинемию.

Способ осуществляют следующие образом.

Растворимые комплексы мономеров фибрина (РКМ) плазмы осаждают соответственно В-нафтолом, этанолом и протаминсульфатом, полученный осадок растворяют в уксусной кислоте и определяют экстинций раствора на спектрофотометре. Аналогично определяют содержание фибриногена в плазме. Для каждого из тестов вычисляется показатель как соотношение экстинций растворов соответствующего паракоагулянта и фибриногена. Таким образом устраняется зависимость результатов тестов от уровня фибриногена.

Определение производят в центрифужных пробирках. Смешивают соответственно 0,2 мл плазмы и 0,06 мл 2%-ного раствора В-нафтола, 0,4 плазмы и 0,12 мл 50%-ного этанола, 0,2 мл плазмы и 0,16 мл 1%-ного протамина. Содержимое пробирок встряхивают и оставляют при комнатной темпераО

ы ю

OJ

VI го

туре на 10 мин. Затем пробирки центрифугируют 20 мин при 3000 об/мин. Надосадоч- ную жидкость удаляют пипеткой, ее остатки осторожно смывают 1 мл дистиллированной воды, пробирки переворачивают на фильтровальную бумагу, затем осушают их стенки, а осадок растворяют в 10 мл (В-нафтоловый) и в 5 мл (этаноловый и про- таминосульфэтный тесты) 1,5% уксусной кислоты. Определяют экстинцию растворов при 280 и 320 нм на спектрофотометре (СФ- 16, СФ-26), Параллельно в исследуемой плазме определяют содержание фибриногена по Белицеру. Для каждого из тестов

г, (EZBO - Ез2о)п вычисляют показатель Р , fcр--fr

(.С280 - С320)ф

усл.ед, где (Е280 - Ез2о)п - разность экстинций при 280 и 320 нм о соответствующем пара- коагуляционном тесте, а (Е280-Ез2о)Ф аналогичная величина при определении фибриногена в исследуемой плазме Для плазмы доноров найдены следующие средние значения (Х± Sx). Р/з -3,5810,21 усл.ед., Рэг 0,86 + 0.00 уп.эд,Рп 0,93 + 0,03 усл.ед. Таким образом повышение в исследуемой плазме показателей В-нафтолового, этано- лового и протаминосульфатного тестов выше 4.21 усл.ед.. 1,04 усл.ед.: и 1,02 усл.ед. соответственно (X ± 3SX) свидетельствует о превышении нормального уровня РКМФ и, следопатепьно, о патологической тромбине- мии.

Пример. Больной Т., диагноз: ДВС- синдром, гипокоагуляционно-геморрагиче- ская форма. Для В-нафтолового теста (Е280-Ез2о) 1,0 для этанолового - 0,107 для протиминосульфагного 0,126, для фибриногена - 0,09 (1,52 г/л). Показатели паракоагу- ляционныхтестов составили соответственно

Рр 11.11 усл.ед., Рэт 1,19 усл.ед., Рп 1.4 усл.ед., что превышает приведенные нормальные значения.

В табл. 1 показано содержание фибриногена, РКМФ, ПДФ/Фг и время коалинак- тивированного эуглобулинового лизиса в плазме больного; в табл. 2 - сочетание повышения содержания РКМФ с дополнительными признаками дессиминированного внутреннего свертывания крови (ДВС); в табл. 3 - сравнение частоты положительных паракоагуляционных тестов, не сопровождающихся дополнительными признаками ДВС. Предлагаемый способ имеет преимущество перед известным использованием В-нафтолового, этанолового и протаминсульфатного тестов, так как устраняет зависимость результатов от уровня фибриногена и отражает лишь содержание

РКНФв исследуемой плазме. Способ прост и доступен для широкого применения в клинической лабораторной практике. Формула изобретения Способ диагностики тромбинемии путем осаждения растворимых комплексов мономеров фибрина в плазме В-нафтолом, этанолом и протаминсульфатом, растворения полученного осадка в уксусной кислоте и определения экстинций растворов, о т л ичающийся тем, что, с целью повышения специфичности способа, одновременно определяют содержание фибриногена, осажденного тромбином, рассчитывают показатель отношения экстинций растворов соответствующего паракоагулянта и фибриногена и если полученный показатель превышает максимальный средний уровень у здоровых доноров диагностируют тромби- немию.

Коэффициенты корреляции с уровнем фибриногена

ПДФ/Фг - продукты деградации фибрина и фибриногена; ХЗФ - время каолин-активированного эуглобулинового лизиса; По собственным данным в сыворотках 20 здоровых доноров, уровень ГПФ/Фг ниже чувствительности использованной антифибриногенной сыворотки (1,1-8,46.мкг/ил в различных опытах; РКМФ - растворимые комплексы мономеров фибрина.

г 0,612 ,05

0,907 ,01

г - 0,897 Р 0,00)

Повышение содержания РКМФ дополнительных

Повышение показателей паракоагуляционных тестов без учета уровня фибриногена (известный способ)

Повышение показателей паракоагуляционных тестов с учетом уровня фибриногена

9043

(47,8Z)

30

1215831

(401)(3.3Z) (16,71) (26,7Z) (10Z) (3.JZ)

от -J

NJ

СО

-J ю

9029

(32,2Z)

30

13444,05

с-з,з:) (13,зг) (13,зг) пз.зх)db,7z)