Способ приготовления гистологических препаратов для люминисцентного выявления @ -Хроматина в интерфазных ядрах Советский патент 1987 года по МПК G01N1/30 A61B10/00 G01N21/66 

Изобретение относится к медицине, в частности к цитологии.

Цель изобретения - удлинение сроков хранения препарата путем окрашивания его в красящей смеси, дополнительно содержащей глицерин и спирт.

Пример 1. Образец ткани индивидуума мужского пола фиксируют в жидкости Карнуа, после проводки через целлоидин-парафин и заливки в парафиновые блоки изготавливают гистологические срезы толщиной 5-7 мкм и монтируют их на. предметные cтekлa. Срезы депарафинируют по известной методике в двух сменах ксилола по 5 мин в каждой, доводят до воды через растворы этанола нисходящей концентрации (96, 80, 70, 40 ), инкубируют в 0,3%-ном растворе трипсина в термостате при 34°С 3045

мин, промывают в дистиллированной

воде, на 30 с погружают в 2%-ный

0 ,

раствор уксусной кислоты и окрашивают ния в темноте при 20-22 С, дифферен- в течение 2 мин в красящей смеси следующего состава: 0,0005%-ный раствор квинакрина дигидрохлорида на 2%-ной уксусной кислоте - 96 этанол глицерин в - соотношении 5:1:4, затем срезы обезвоживают в растворах

концентрации

25 циальная светимость Y-хроматина не ухудшилась.

Препараты, изготовленные по из- . вестному способу, после хранения в течение 4-5 сут становятся непригодными для исследования.

30

этанола восходящей

(70 - 2 мин, 96° - 2 мин, абсолютный этанол - 2 мин), просветляют в двух ксилола по 3 мин и заключают

Формула изобретения

35

Способ приготовления гистологических препаратов для люминесцентного выявления Y-хроматина в интерфазных ядрах путем изготовления целлоидин- парафиновых срезов и их окраски в 0,0005%-ном растворе квинакрина дигид2. Образец ткани фик- Q рохлорида на 2%-ной уксусной кислоте,

отличающийся, тем, что, с целью удлинения сроков хранения

порциях

в полистирол. После полимеризации заключающей среды препараты готовы для исследования под микроскопом в режиме люминесценции при длине волны возбуждающего света 300-400 нм.

Пример

сируют в жидкости Карнуа, после проводки через целлоидин-парафин и заливки в парафиновые блоки изготавливают гистологические срезы толщиной 5-7 мкм и монтируют их на предметные стекла. Срезы депарафинируют по известной методике в двух сменах ксилола по-5 мин в каждой доводят до воды через растворы этанола нисходящей концентрации (96, 80, 70, 40°), инку45

50

препарата, к раствору красителя добавляют этанол и глицерин в соотношении краситель - этанол - глицерин (4,5-5) : (1-1,5) : (3,5-4,5), производят окрашивание в течение 2-4 мин, обезвоживают в спиртах восходящей концентрации, просветляют в ксилоле и заключают в полистирол.

Редактор А. Огар

Составитель Э. Чиркова

Техред А.Кравчук Корректор О. Кравцова

Заказ 5787/38Тираж 776Подписное

ВНИШШ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

.Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

бируют в 0,3%-ном растворе трипсина в термостате при 34°С 30-45 мин, промывают в дистиллированной воде, на

30 с погружают в 2%-ный раствор ук- -, сусной кислоты и окрашивают в течение 4 мин в смеси состава: 0,0005%-ный раствор квинакрина дигидрохлорида на 2%-ной уксусной кислоте - 96 этанол глицерин в соотношении 4,5:1,5:4.

Затем срезы обезвоживают в растворах этанола восходящей концентрации, просветляют в ксилоле и заключают в полистирол.

Результаты, полученные в примерах 1 и 2jаналогичны. Y-хроматин выявляется в виде крупного блока квинакрин- положительного материала, имеющего изумрудно-зеленую флюоресценцию на

желто-зеленом или коричнево-зеленом фоне ядра. При использовании предлагаемого способа свойства препарата не изменились в течение 8 мес хране0 ,

ния в темноте при 20-22 С, дифферен-

ния в темноте при 20-22 С, дифферен-

25 циальная светимость Y-хроматина не ухудшилась.

Препараты, изготовленные по из- . вестному способу, после хранения в течение 4-5 сут становятся непригодными для исследования.

30

Формула изобретения

35

препарата, к раствору красителя добавляют этанол и глицерин в соотношении краситель - этанол - глицерин (4,5-5) : (1-1,5) : (3,5-4,5), производят окрашивание в течение 2-4 мин, обезвоживают в спиртах восходящей концентрации, просветляют в ксилоле и заключают в полистирол.

Срезы ткани депарафинируют, доводят до воды через этанол нисходящей концентрации, инкубируют в 0,3%-ном растворе трипсина при 34 С 30-45 мин, промывают в воде, погружают в 2%-ный раствор уксусной кислоты, а затем в красящую смесь состава: 0,005%-ный раствор квинакрина гидрохлорида на 2%-ной уксусной кислоте - 96 этанол - глицерин (4,5-5) : :(1-1,5) : (3,5-4,5) на 2-4 мин, обезвоживают в спиртах восходящей концентрации, просветляют и заключают в полистирол. Свойства препарата не изменяются в течение 8 мес хранения в темноте при 20-22 С. Дифференциальная светимость Y-хроматина не ухудшается. U (Л со СГ5 СЛ 6о ю