Способ гистохимического определения йода Советский патент 1988 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, а именно к гистологии, и касается количественного определения содержания йода в гистологических препаратах.

Цель изобретения - количественное определение связанного йода в тканях щитовидной железы.

Способ осуществляют следующим образом.

Для исследования Bi.- та щитовидная железа новорожденного - - бенка. Ее фиксируют в нейтральном О ормалине. Время фиксации 24 ч. Пост фиксации Препарат промьшают в npoi гной воде в течение времени, равного впмени фиксации. Обезвоживают в спирччк восходя 1|ей концентрации в Пропитывал v смесью спирт-хлороформ. Помещают в расплав- Ценный -парафин на 30-45 мин, пе.рено сят во второй расплавленный парафин на 4-6 ч и заливают в формочки. Депа™ {рафинируют срезы. Инкубиру от 30 мин цри 20-24°С в 0,5 М растворе сульфита натрия. Промьшают в трех сменах дис Тиллированной воды по 3-5 мин в каждой. Промокают срезы фильтровальной бумаги. Наносят на срезы 2-3 капли 6,4-0,5 М раствора гидросульфида натрия в диметилсульфоксиде. Инкубируют 3-7 мин при 20-24°С под тягой. Остатки реактива стряхивают со стекла в насьпценный водный раствор сульфата ме ди. Промьшают срезы в семи сменах дис иллированной воды по 2-3 мин в каж- дой. .

I Затем проводят выявление сульф- г идрильных групп по известному ме- ,

Помещают стекла со срезами в бюкс и заливают нагретым до 70 С раствором 2, 2-диокси- 6, 6-динафтилдисульфи- да (ДЦД) в ацетат-вероналовом буфере (рН 8,5), переносят бюкс со ере- зами в термостат 50 С и инкубируют 60 мин.

Охлаждают до комнатной температуры быстро промывают в дистиллированной воде и инкубируют в двух сменах дистиллированной воды, подкисленной ук- сусной кислотой до рН 4,0-4,5, по 5 мин в каждой.

Экстрагируют свободные нафтолы в спиртах восходящей концентрации и затем промьшают в течение 10 мин в трех порциях эфира,

Помещают срезы в 70-градусный спирт (2 мин), затем промьтают в дистиллированной воде.

Окращивают в течение 2 мин при комнатной температуре свежим раствором ПРОШЕНОГО синего,

Промьшают в проточной воде. Обезвоживают срезы в спиртах восходящей концентрации, просветляют в двух сменах ксилола и заключают в канадский бальзам, Фотометрируют контрольный препарат (содержание сульфгидрильных г.рупп) и препарат, исследуемый на содержание йода (сульфгидрильные группы исходные с сульфгидрильными группами, заместившими йод). По разности оптических плотностей контрольного и исследуемого препаратов на содержание йода определяют содержание йода в условных единицах,

Б таблице приведены данные о содержании йода в структурах щитовидно железы ребенка.

Из таблицы видно, что предлагаемый способ позволяет количественно определить содержание йода в различных структурах щитовидной железы.

Предлагаемый способ в отличие от известных позволяет провести количественное определение йода в гистологическом, препарате щитовидной железы и тем самым может быть использован при диагностике заболеваний щитовидной железы, при изучении ста - новления ее функции в онтогенезе, синтеза гормонов, патогенеза различных заболеваний щитовидной железы, изменений ее функций--при различных состояниях организма, механизма влияния различных лекарственных веществ с целью коррекции ее функций -при раз личной патологии самого органа и организма в целом

Формула изобретения

Способ гистохимического определения йода, включающий приготовлеьше прафинового среза, его депарафинирова ние, окрашивание, обезвоживание и заключение в канадский бальзам,.отличающийся тем, что, с целью количественного и локального определения связанного йода в тканях щитовидной железы,, после депарафинир ваная срезы обрабатывают Os4-0,5 М раствором гидросульфида натрия в диметилсульфоксиде в течение 3-7 мин при 20-24 С. проводят реакцию на сульфгидргшьные группы, фотометриру- .1435993.

ют и по разности оптической плотное- препаратами определяют содержание ти между исследуемым и контрольным связанного йода.

Изобретение относится к гистохимии. Цель изобретения - количественное и локальное Определение связанного йода в тканях щитовидной железы. После депарафиннрования срезы обрабатывают 0,4-0,5 М раствором гидросульфида натрия в диметилсульфоксиде при температуре 20-24 С. Проводят реакцию на сульфгидрильные группы, фотометри- руют и по разности оптической плотности между исследуемым и контрольным препаратами определяют содержание связанного йода. Способ можно использовать при изучении изменений функции щитовидной железы при различных состояниях организма. 1 табл.