Способ выявления клеток панкреатических островков на гистологическом препарате Советский патент 1983 года по МПК G01N33/48 A61B10/00 

Изобретение относится к медицине, а именно гистологии, и может быть использовано для выявления гистологических структур панкреатических островков.

Известен способ выявления клеток панкреатических островков на гистологическом препарате путем окрашивания нейтральными красителями, приготовленными по методу Бенсли и его модификациям 1.

Однако приготовление красителей занимает много времени, очень сложно, а их применение дает непостоянные результаты окраски островковых клеток.

Известен также способ выявления клеток панкреатических островков на гистологическом препарате, включгш)щий их окрашивание альдегид-фуксином 2.

Однако известный способ не позволяет дифференцировать А- и. В- клетки панкреатических островков, кроме того, требуется проведение дополнительных окрасок, а введение в раствор альдегид-фуксина кислых красителей приводит к потере красящих свойств раствора.

Цель изобретения - дифференцирование А- и В- клеток панкреатических островков.

Указанная цель достигается согласно способу выявления клеток панкреатических островков на гистологическом препарате, включающему их окрашивание альдегид-фуксином, при котором окрашивание ведут в красителе состава, вес. %i

Альдегид-фуксин 0,07-0,1 Этиловый спирт 90-95 Оранжевый Ж 0,1-0,15 ВодаОстальное

в течение 15-20 с.

Окраску, панкреатических островков проводят следующим образом.

Депа рафинйр6ванные срезы поджелудочной железы, наклеенные на предмет 20ные стекла белком с глицерином, окисляют в течение 15-20 с в смеси, содержащей 3 мл насыщенного водного раствора марганцовокислого калия, 3 мл 3%-ной серной кислоты и 44 мл дистиллированной воды. /

Обесцвечивают срезы в 3%-ном раст воре мртабисульфита калия 15-20 с.

Промывают в дистиллированной во30 де 1-2 мин. Окрашивают в спиртовом растворе предлагаемого красителя (0,2 г сухого порошка растворяют в 50 мл 96%-ог этилового спирта) в течение 15-20 ми Срезы промокают бумажным фильтром . Гфепараты обезвоживают в этиловом спирте и через кси юлзаключают в канадский бальзам. Результат окраски цитоплазма В-клеток фиолетовая) цитоплазма А-кл ток и эритроциты оранжевые; ядра Аи В-клеток желтовато-коричневого цве та . Пример 1. При патологоанатомическом вскрытии трупа мужчины обна ружена опухоль поджелудочной железы диаметром 0,5 см. Ткань опухоли фиксируют в 10%-ном растворе нейтрально го формалина е течение суток. Материал по общепринятой методике заливают в парафин. Готовят гистологичес кие срезы толщиной 7 мкм и наклеивают их на предметные стекла белком с глицерином. Срезы депарафинируют и окисляют их в течение 20 с в смеси из 3 мл насыщенного водного раствора марганцовокислого калия, 3 мл 3%-ной серной кислоты и 44 мл дистиллирован ной воды. Затем срезы обесцвечивают в 3%-ном водном растворе метабисульфита калия-в течение 15 с и промывают в дистиллированной воде.. Срезы окрашивают в кислом спиртовом раство ре предлагаемого красителя (0,2 г су хого красителя растворяют в 50 г 70%-ого этилового спирта, подкисленного 0,5 г соляной кислоты, удельный вес которой 1,2) в течение 20 мин, затем промокают, бумажным фильтром, обезвоживают в спиртах восходящей концентрации и через ксилол заключают в канадский бальзам. При микроскопическом излучении гистологического препарата опухоли, окрашенного предлагаемым красителем, установлено, что цитоплазма опухолевых клеток содержит альдегид-фуксинофильные гранулы фиолетового цвета., Заключение: опухоль является В-кл точной. П р и м е р 2. При патологоанатомическом вскрытии трупа больной,страдавшей язвенной болезнью желудка, берут кусочек опухоли поджелудочной железы для гистологического исследования. Из материала, залитого в пара фин, готовят среды, которые наклеива ют на предметные стекла белком с гли церином. Срезы депарафинируют и окис ляют их в течение 20 с в смеси из 3 мл насыщенного водного раствора марганцовокислого калия, 3 мл 3%-ной серной кислоты и 44 мл дистиллирован ной воды. Затем срезы обесцвечивают в 3%-ном водном растворе метабисульфита калия в течение 15 с и промывают в дистиллированной воде. Срезы окрашивают в кислом спиртовом растворе предлагаемого красителя (0,2 г сухого красителя растворяют в 50 г 70%-ого этилового спирта, подкисленного 0,5 г соляной кислоты, удельный, вес которой 1,2) в течение 20 мин, затем промокают бумажным Фильтром, обезвоживают в спиртах восходящей концентрации и через ксилол заключа|ют в канадский бальзам. При микроскопическом изучении rjTcтологического препарата установлено, что опухоль является аденомой островковой ткани солидного типа. Цитоплазма опухолевых клеток окрашена в оранжевый цвет она не содержит альдегид-фукринофильных гранул фиолетойого Цвета, а также вакуолей. Заключение: в поджелудочной железе имеется аденома из А-клеток. Примерз. При вскрытии кролика через 6 суток после прививки в семенник опухоли Брауна-Пирс для гистологического изучения берут поджелудочную железу. Ее фиксируют в 10%ном растворе нейтрального формалина в течение суток. Ткань поджелудочной железы заливают в парафин по общепринятой методике. Приготавливают парафиновые срезы толщиной 7 мкм. Срезы депарафинируют и окисляют их в течение 20 с в смеси из 3 мл насыщенного водного раствора марганцовокислого калия, 3 мл 3%-ной серной кислоты и 44 мл дистиллированной воды. Затем срезы обесцвечивают в 3%ном водном растворе метабисульфита калия в течение 15 с и промывают в дистиллированной воде.Срезы окрашивают в кислом спиртовом растворе предлагаемого красителя(О,2 г сухого красителя растворяют в 50 г 70%-ого этиЛОВОГ1 спирта,подкисленного 0,5 г соляной кислоты,удельный вес которой 1,2)в течение 20 мин,затем промокают бумажным фильтром,обезвоживают в спиртах восходящей концентрации и через ксилол заключают в канадский бальзам. При микроскопическом изучении поджелудочной железы установлено увеличение в панкреатических островках количества и размеров В-клеток и их ядер. В цитоплазме В-клеток уменьшено содержание альдегид-фуксинофильных гранул фиолетового цвета. Заключение: В-клетки находятся в состоянии гипертрофии. Количество А-клеток, цитоплазма которых окрашена в оранжевый цвет, в островках уменьшено. Уменьшен также диаметр этих клеток и их ядер. Заключение: А-клетки находятся в состоянии атрофии. Предлагаемый способ позволяет дифференцировать А- и В-клетки панкреатических островков. Кроме того, упрощается и ускоряется способ окраски, так как исключается необходимость последующей докраски А-клеТок и клеточных ядер, сокращается многсэтапность окраски за счет устранения процедуры дифференцировки препаратов в спиртах из-за способности красителя избирательно в разные цвета четко и чисто окрашивать В- и А-клетки,а также клеточные ядра.Краситель может быть применен в патологоанатомическоя практике для дифференциальной диагнос тики опухолей,исходящих из разных кле ток панкреатических островков,а также в экспериментально-морфологических исследованиях для оценки морфо-функционального состояние гормонопродуцирующих клеток панкреатических островков.

Формула изобретения Способ выявления клеток панкреатических островков на гистологическсш

препарате, включающий их окрашивание, альдегид-фуксином, отличающийся тем, что, с целью дифференцирования А и В-клеток панкреатических островков, окрсшшвание ведут в красителе состава, вес %t

Альдегид-фуксин 0,07-0,1

90-95

Этиловый спирт 0,1-0,15 Оранжевый Ж Вода Остальное в течение 15-20 с.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1.Лилли Р. Патогистологическая техника. Практическая гистохимия. М., Мир, 1969, с. 274-279.

2.Фрайштат Д.М. Реактивы и препараты для микроскопии, М., Химия, 1980, с. 26.